DIAGNSTICO BORDETELLA SPP.

Nombre: Luis Colihuinca Ll. Microbiologa Avanzada. Escuela de Tecnologa Mdica

Microbiologa Avanzada, Octubre de 2012

BORDETELA SPP.
Reino: Bacteria Filo: Proteobacterias Clase: Beta Proteobacterias Orden: Burkholderiales Familia: Alcaligenaceae Genero: Bordetella Especies:

B. pertussis B. parapertussis B. avium B. bronchiseptica

B. hinzii B. holmesii B. petrii B. trematum B. ansorpii

MORFOLOGA

Gramnegativo Aerobios estrictos Bacilo pequeo con tendencia coco bacilar. Tamao de 0,2 a 1,0 um. Desarrollo a 35 - 37 C. No utilizan carbohidratos

http://microvet.arizona.edu/Courses/MIC420/lectur e_notes/bordetella_pertussis/gram_pertussis.html

DIAGNSTICO EN LABORATORIO

A) Cultivo en placa de petri con medio de Agar BordetGengou o Regan lowe. B) Inmunofluoescencia directa. C) Serologa. D) Reaccin en cadena polimerasa (PCR).
Agar Regan Lowe

Agar bordet Gengou

http://www.biomedicinabrasil.com/2010/09/meios-de-cultura.html

TOMA DE MUESTRA Y CULTIVOS

Tipo de muestr a
Aspirado o hisopado nasofaringeo. en intubados, aspirado traqueal. No utilizar trulas de algodn o rayn, tienen cidos grasos txicos para este M.O.

Transporte Inmediato y siembra Medio de transporte, Regan Lowe o Amies charcoal.

Nota: en caso de cuadros clnicos con sospecha de Bordetella pertussis, se debe acompaar el diagnstico con el hemograma.

CULTIVOS, BORDETELLA SPP.

Medios de cultivo ms utilizados: Bordet-Gengou (infusin de papa, glicerol y sangre de caballo/carnero) - Vida medias de 5 das aprox.

Agar Bordet-Gengou
Foto Inst. de Bqca. y Biologa Molec. U:N: La Plata.

Agar Regan-Lowe (suplementado con sangre de caballo al 10% y cefalexina 40 mg/L). - Permite mayor porcentaje de aislamientos, - Vida media de 4-8 semanas. - El crecimiento de B. pertussis puede observarse de 3-5 das de incubacin a 35-36C, se recomienda su incubacin hasta 7-12 das para obtener resultados positivos.

CARACTERSTICAS DIFERENCIALES

CARACTERSTICAS BIOQUMICAS

INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA.

Preparacin de frotis de aspirado nasofarngeo Fijacin del frotis Procedimiento de tincin Reactivos IFD: Anticuerpo policlonal o Anticuerpo monoclonal Lavado Lectura de laminas

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA

La I.F.D contina siendo la herramienta diagnstica disponible. Su sensibilidad es variable, alrededor de 29-71% Su especificidad puede ser alta pero es operador dependiente. Falsos positivos H. influenzae no capsulados, difteroides, B. bronchiseptica. I.F.D negativa en un paciente con cuadro clnico y epidemiolgico compatible, no descarta el diagnstico de coqueluche Colonizacin transitoria, sin enfermedad en curso.

PCR

A B C

Tcnica de biologa molecular que detecta ADN bacteriano No necesita viabilidad del microorganismo. En pases en desarrollo es la tcnica de eleccin. Identificacin de Bordetella.
Muy sensible y especifica, presenta FP y FN. El uso de buenas practicas clnicas evitas estos resultados.

PCR, PREANALITICO

Solicitar examen a pacientes con cuadro clnico compatible. Indicaciones Nunca a personas asintomticas

Toma de muestra

La sensibilidad es optima durante los 3 primeras semanas de tos. Antes del uso de antibiticos.

PCR, PREANALTICO

Toma de muestra

Muestra de aspirado (lavado) y el hisopado (exudado) nasofarngeos. Trulas de Dracn.

Toma de muestra

Evitar la toma de muestra donde se trabaja con vacunas. Utilizar guantes adecuados para la toma de muestra y desinfeccin de la superficie con cloro al 10% o alcohol.

PCR, FASE ANALTICA

Target PCR

Las IS481, adenilato ciclasa cyA, porina, pertactina, BP283, BP485, ptxS1 (subunidad-1 de la toxina pertussis) Promotores de la secuencia que codifica a PT, PTp1 5GATTCAATAGGTTGTATGCATGGTT3 y PTp2. 5TTCAGGCACACAAACTTGATGGGCG3

Extraccin de ADN

Debe considerar la dificultad de la muestra. La mucosidad y debries celulares. Alta sensibilidad y especificidad. Se debe utilizar controles internos, positivos y negativos

PCR, POSTANALITICA

INTERPRETACIN

Se sugiere que PCR+ con IS481, se debe considerar infeccin por Bordetella spp, o probable infeccin por B. pertussis.

Para confirmacin el laboratorio necesita de 2 target positivos como mnimo

La falta de estandarizacin es el mayor problema en la interpretacin.

SEROLOGA
Bsqueda de anticuerpos por enzimoinmunoensayos

Anticuerpos de tipo IgM e IgG.

Antgenos utilizados: Toxina pertussis, hemaglutinina filamentosa, pertactina y fimbrias.

SEROLOGA,
La repuesta inmune genera anticuerpos, IgM e IgG. Las vacunas acelulares contienen en su mayora PT y FHA. La respuesta inmune a vacunas es IgM y IgG. Los anticuerpos de tipo IgG anti PT, pueden ser encontrado en un amplio rango de adolecentes y adultos. Lo que dificulta la interpretacin para diagnstico de tos ferina. En Chile no existen estudios poblacionales serolgicos para PT.

SEROLOGA, FASE PREANALITICA

Se realiza en poblacin sintomtica. En nios menores de 6 meses: con tos prolongada y paroxismos y apnea.

En nios preescolares, adolescentes y/o adultos: con tos prolongadas. Se requiere de PCR para confirmacin. No sirve en recin nacidos. Diagnostico tardo desde 14 das despus de la tos.

SEROLOGA, FASE ANALITICA

Se debe verificar los compuestos de antgenos. Debe contener toxina pertussis.

Los puntos de cortes del kit, son analticos, por lo que no se debe interpretar. Se debe informar de manera cuantitativa para interpretacin del clnico.

SEROLOGA, FASE POSTANALTICA

Interpretacin
Valores de IgG sobre 50 a 150 UI/ml se pueden considerar positivos. El 90% de los individuos hace respuesta por IgG. Se recomienda no interpretar serologa en pacientes hasta 1 ao despus de la vacunacin.

Limitacin de IgA no tiene un cutt off poblacional aceptado ampliamente.

VIGILANCIA

Paciente que cumple con la definicin de caso sospechoso de coqueluche producido por Bordetella pertussis, se deber tomar una muestra de aspirado nasofarngeo. La cual debe ser trasladada al laboratorio local, debidamente identificada para efectuar la tcnica de inmunofluorescencia Directa y pruebas anexas para confirmacin. El coqueluche es de notificacin diaria.

Formulario de envi de cepas al ISP.

TRATAMIENTO

El tratamiento antibitico de primera eleccin sigue siendo eritromicina durante 7 a 14 das. Otros antibiticos efectivos para eliminar la bacteria, son claritromicina y azitromicina. En caso de resistencia o intolerancia a macrlidos, la opcin ms conveniente es trimetoprimsulfametoxazol.

REFERENCIAS

Alejandro Donoso, Daniela Arriagada. Coqueluche grave: Estado del arte. Facultad de Medicina Clnica Alemana-Universidad del Desarrollo, Santiago, Chile. Rev. chilena infectologa. vol.29 no.3 Santiago jun. 2012. Alejandra Aquino Andrade. Aspectos genmicos de Bordetella pertussis y el camino hacia el nuevo estndar de oro en el diagnstico de tos ferina. Microbiologa molecular para el clnico. Revista de Enfermedades Infecciosas en Pediatra 2011;24(96):139-146 ALISON WEISS. The Genus Bordetella. Prokaryotes (2006) 5:648674. DOI: 10.1007/0-387-30745-1_27. CHAPTER 3.2.3 Preston A. Bordetella pertussis: the intersection of genomics and pathobiology. Can Med Assoc J 2005; 173: 55-62. Dragsted DM, Dohn B, Madsen J and Jensen JS. Comparison of culture and PCR for detection of Bordetella pertussis and Bordetella parapertussis under routine laboratory conditions. J Med Microbiol 2004; 53: 749-54.