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Musayn H
Biopsia de Hueso
Biopsia de Hueso
Biopsia de Hueso
MIELOGRAMA
CITOMETRIA DE FLUJO
Mielograma
Se debe conocer las caractersticas morfolgicas y los
recuentos celulares de sangre perifrica del paciente. La extensin se examina inicialmente a bajo aumento para evaluar la celularidad global, la presencia de lagunas grasas o monomorfismo, la relacin mieloeritroide aproximada, la existencia de megacariocitos y la posible presencia de clulas extraas.
objetivo de inmersin. Con este objetivo, de mayor aumento, se procede al recuento porcentual de los elementos celulares de las diferentes lneas hematopoyeticas y del resto de la celularidad medular.
leucocitaria, el sist. mononuclearfagoctico, cl. plasmticas y serie megacarioctica. Para que el recuento porcentual, o mielograma, posea reproducibilidad el nmero de elementos celulares contados debe ser muy elevado, como mnimo de 500 o 1000 clulas.
MIELOGRAMA
Blastos Promielocitos Mielocitos Metamielocitos Neutrfilos Eosinfilos Basfilos Linfocitos Plasmocitos Monocitos Clulas reticulares Megacariocitos Eritroblastos Normoblastos
85 01 02 03
06 01 01
01
0.3 1.8 5.0 7.0 13.0 0.5 0.0 3.0 0.0 0.5 0.1 0.2 1.0 7.0
5,0 5,0 20,0 30,0 32,0 4,0 0,7 17,0 3,0 5,0 2,0 2,0 8,0 32,0
DESCRIPCION: Muestra con espculas de tejido medular, hipercelular, de aspecto homogneo. 85% de los elementos corresponden a blastos, de tamao grande, relacin N/C baja, membrana nuclear ms o menos regular, con presencia de ncleos lobulados y monocitoides, nucleolos prominentes, citoplasma basfilo, agranular en algunos con presencia de cuerpos de Aer. El componente granuloctico en maduracin a maduro corresponde a menos del 10% de la CNE, asimismo el componente monocitico representa menos del 10% de la misma.
Estudia la composicin qumica de las clulas, siendo posible detectar la localizacin topogrfica de enzimas, lpidos, carbohidratos, protenas y sustancias inorgnicas (como Hierro).
Tinciones que detectan la localizacin y actividad de sustancias intracelulares.
Procedimiento:
Paso 1: Fijacin Paso 2: Lavado Paso 3: Coloracin Paso 4: Lavado Paso 5: Verif. Col. (control interno) Paso 6: Contrastar. Paso 7: Lectura
Recuerda:
Si bien es una tcnica sencilla y de poca complejidad, guarda mucha importancia en el dx. L.A.; es por ello que su interpretacin requiere de experiencia y buen criterio.
REACCION DE PEROXIDASA
La peroxidasa es una enzima lisosomal, la cual transfiere hidrgeno de la bencidina al perxido.
3 3 DAB
Esterasas no especficas
El sustrato del reactivo reacciona con las esterasas de la muestra.
Los productos intermedios reaccionan
Esterasas Especficas.
El naftol AS-D cloroacetato esterasa produce la hidrlisis
enzimtica del naftol AS- D cloroacetato a un compuesto con naftol, a su vez reacciona con una sal diazonio para formar un compuesto insoluble de color rojo violeta.
Fosfatasas Acidas
Hidrlisis de los steres fosfato en
medio cido.
Bajo condiciones adecuadas, se
libera naftol AS-BI del naftol AS-OL fosfato y acoplado a una sal diazotada, produciendo un compuesto rojo naranja
Fosfatasa Alcalina
pH alcalino Es la prueba para el Dx diferencial entre LMC y Rx Leucemoide (+): Precursores mieloides desde del promielocito.
Resultados
Peroxidasa Sudn Black Mieloblasto Promielocito Mielocito Metamielocito Segmentado Eosinofilo Basofilo Monocito Linfocito Negativo a Granular + Granular +++ Granular ++ Granular ++ Granular ++ Granular ++ Granular +++ Dbil a Granular + Negativo PAS Negativo Granular fino + Granular fino ++ Granular fino +++ Granular fino + Negativo a + Negativo a + Negativo a + Granular grueso, mazacote Negativo Fino granular + Fosfatasa Alcalina Negativo Negativo a + Negativo a + Negativo a + Negativo a + Negativo Negativo Negativo Negativo Fosfatasa Acida Negativo Difuso + Difuso + Difuso + Difuso + Difuso ++ Negativo Negativo Clulas T, focal + Negativo Difuso +++ Esterasa sin Fluor Dbil + + ++ + + + Negativo +++ Dbil positivo Esterasa con Fluor Dbil + + ++ + + + Negativo Negativo a + Dbil +
Normoblasto Megacariocito
Negativo Negativo
Negativo Negativo
++ +++
++ Negativo a +
esta en desuso. Para nuestro contexto es til por su bajo costo. Orienta muy acertadamente el diagnstico de las leucemias AGUDAS. Provee informacin sobre los depsitos de Hierro, MODULO III.
Inmunohistoqumica
Tcnica basada en la reaccin antgeno anticuerpo, altamente especifca, donde el complejo formado se hace microscpicamente visible. En razn de revelar el marcado enzimtico de los anticuerpos por microscopa de luz, las reacciones enzimasustrato, emplean cromgenos incoloros cuyos productos finales son coloreados, entre ellos se emplea:
Diaminobenzidine (DAB) 3-amino-9-ethylcarbazole (AEC) 4-chloro-1-naphthol (CN)
Procedimiento
Cortes de parafina: 3 - 4 micras, dejar secar a 37 C.
1. 2. 3. 4. 5. 6.
Desparafinar e hidratar con agua destilada. Incubar con perxido de hidrgeno 3% 10 minutos. Enjuagar con buffer TRIS 3 minutos Incubar con el 1er Ac 30-45 minutos Enjuagar con buffer TRIS 3 minutos Incubar con el 2do Ac biotinilado 16 minutos
Anticuerpo Secundario: Debe ser de especie diferente sobre la especie de donde provienen las clulas o tejidos o al anticuerpo primario. Debe reconocer especficamente la inmunoglobulina de la especie en la cual se ha extraido el anticuerpo primario (Fc).
AFINIDAD AVIDEZ - TITULO
7. Enjuagar con buffer TRIS 3 minutos 8. Incubar con el complejo estreptavidina-peroxidasa 16 9. Enjuagar con buffer TRIS 3 minutos. 10.Colocar el cromgeno DAB 3-5 minutos. 11.Enjuagar con agua destilada. 12.Contrastar con hematoxilina 10-30 segundos 13. Deshidratar y aclarar con xilol. 14. Montar en un medio resinoso.
minutos.
MTODO DIRECTO
ENVISION
CD 3
CD 20
CD 30
Aplicaciones
Antgenos intracelulares: Ig de la membana basal del
glomrulo.
Marcadores Tumorales
Citometra de Flujo
Metodo analtico por el que se mide la emision de
lquida laminar, pasan una a una, a gran velocidad frente a un haz de luz laser de longitud de onda adecuada.
Procedimiento
dx. presuntivo Lisado de glbulos rojos no nucleados Aplicacin de Ac : paneles (postlizado) Adquisicin y almacenamiento de data Anlisis e interpretacin Impresin e informe
Preparacin de la Muestra
Paneles de Procesamiento
tdt
antgeno de inmadurez
Promielocit Mielocito o CD 13 CD 33 CD 11 b CD 13
Eosinfilo CD 11b CD 15
Basfilo CD 13 CD 11b CD 33 CD 38
Aplicaciones en el Laboratorio
Diagnstico basado en el Anlisis Celular
Pronstico basado en el Anlisis Celular Evaluacin y Monitorizacin del tratamiento Anlisis de Lesin y Muerte Celular
Inmunofenotipo
Se identifica una proliferacin clonal inmadura de estirpe mieloide, corresponde al 78,02% del total celular evaluado, son de tamao intermedio, parcial y levemente granulares. Expresan CD45, CD13, CD34, HLA-DR. CD117, parcial CD15, CD33, MPO, CD64, CD71, siendo negativas a CD11b, CD4, CD14, marcadores linfoide T y B. Los granulocitos fueron del 7,18%, linfocitos T policlonales del 6,63% con CD4/CD8 de 1,21 (normal).
9,66%
CD3-APC
7,02%
CD3-APC
10,61%
CD3-APC
Cariotipo - Fundamento
El conjunto de cromosomas de una clula.
Se mantiene inalterable en todas las clulas de un
Procedimiento
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.
Cultivo Celular 48 -72 horas Aadir un mitgeno que estimula la divisin celular Aadir un inhibidor de la mitosis las clulas se detienen en metafase Cosechar las clulas Aadir solucin hipotnica hincha las clulas. Se fijan las clulas con metanol y acetona. Se resuspenden las clulas. Se extienden en los portaobjetos. Se tien las preparaciones. Se observa al microscopio.
Resultados
Nomenclatura ISCN 95
FISH Fundamento
Tcnica que utiliza sondas de DNA marcadas con un fluorforo para
Procedimiento
PREPARACION PREVIA DE LA MUESTRA PREPARACION DE LAS PLACAS PREPARACION DE LAS SONDAS HIBRIDACION LAVADOS POST-HIBRIDACION DETECCION TINCION DE CONTRASTE (yoduro de propidium o DAPI) VISUALIZACION (microscopio de epifluorescencia)
Procedimiento
Resultados