Espectrometra de masas

Espectrometra de masas

Es una tcnica instrumental sofisticada que separa y detecta iones en fase gaseosa. Se basa en ionizar molculas gaseosas convirtindolas en iones

(generalmente cationes), que se separan al ser

acelerados por un analizador de masa: la separacin se basa en la distinta relacin m/z de los iones.

ESPECTRMETRO DE MASAS

Componentes del instrumento

Introduccin de la muestra

Fuente de ionizacin

Separador de masas

Detector inico

Procesador de seal El acoplamiento entre CG y HPLC con EM se analizar ms adelante

Registrador

Fuentes de ionizacin

Ionizacin por impacto electrnico

Ionizacin qumica Fuente de bombardeo con tomos rpidos Desorcin con lser Ionizacin a presin atmosfrica:
- Electronebulizacin asistida con un gas: electrospray
- Ionizacin qumica a presin atmosfrica - Fotoionizacin a presin atmosfrica
HPLC

Ionizacin por impacto electrnico

molculas neutras placa de repulsin filamento de W haz de electrones (70 eV) placas focalizadoras

placas aceleradoras (4000 V)

iones

M+e

M.+ + 2e
ion molecular

Fragmentacin del ion molecular

Molcula hipottica ABCD (A, B, C y D = tomos)

ABCD + e
ABCD.+

ABCD.+ + 2 e
A+ + BCD. A. + BCD+ CD. + AB+ AB. + CD+ BC+ + D B + A+ A + B+ D + C+ C + D+ Fragmentacin del ion molecular

ABCD.+ ADBC.+ ABCD.+ + ABCD

BC. + AD+ AD. + BC+ (ABCD)2.+

Reordenamiento seguido de fragmentacin Colisin seguida de fragmentacin

BCD. + ABCDA+

Ionizacin qumica
Gas reactivo metano, isobutano, amonaco (cmara de ionizacin de alta presin a 10 torr) CH4 + e (alta energa) CH4+ y CH3+

CH4+ + CH4
CH3+ + CH4

CH5+ + CH3
C2H5+ + H2

Transferencia protnica entre molcula reactiva y analito

CH5+ + MH
C2H5+ + MH

MH2+ + CH4
M+ + C2H6

Separador de masas

Espectrmetro de masas de sector magntico Espectrmetro de masas de cuadrupolo Espectrmetro de masas de tiempo de vuelo Espectrmetro de masas de trampa inica

Espectrmetro de masas de sector magntico

cmo se separan los iones de distinta masa? m : masa v : velocidad de la partcula m : masa z : carga V : diferencia de potencial FM : fuerza centrpeta FC : fuerza centrfuga B : campo magntico r : radio de curvatura

Ecintica = mv2 = zV v = (2zV/m)

FM = Bzv

mv2/r = Bzv

FC = mv2/r v = Bzr/m

Bzr/m = (2zV/m) m/z = B2r2/2V

Espectrmetro de masas de cuadrupolo

= 6 mm

Espectrmetro de masas de cuadrupolo

Relacin de voltajes durante un barrido de masa con un analizador cuadrupolo

tiempo masa

Potencial de radiofrecuencia

Potencial corriente directa

EM de tiempo de vuelo (TOF: time of flight)

pulsos de 300 V, 3.000-20.000 veces/s

Espectrmetro de masas de trampa inica

Vrf

tapa

electrodo anular central

tapa

Esquema detector de trampa inica (ITP)

Espectros de masas
Dependen de: Energa de ionizacin de la molcula Grupos funcionales de la molcula

Mtodo de ionizacin
Presin y temperatura de trabajo Diseo instrumental

Espectros de masas obtenidos por impacto electrnico

Etilbenceno
pico base

En este ejemplo el pico base se forma por prdida de CH3

ion molecular (ion parent)

fragmento de mayor masa M+

molcula con nmero par de N M+ con masa par molcula con nmero impar de N M+ con masa impar 4 H M-4 CH3 M-15 NH3 M-17 H2O M-18 F M-19 HF M-20 C2H2 M-26

tomos y grupos frecuentemente desplazados

Espectros de masas de cloruro de metileno

Impacto electrnico
pico base prdida de Cl

Picos isotpicos 12C1H 35Cl (m= 84) 2 2

13C1H 35Cl 2 2 12C1H 35Cl37Cl 2 13C1H 35Cl37Cl 2 12C1H 37Cl 2 2

(m= 85) (m= 86) (m= 87) (m= 88)

Espectros de masas de pentobarbital (sedante)

Impacto electrnico

Ionizacin qumica

El ion molecular (m/z = 226) prcticamente no se distingue

Espectros de masas de 1-decanol (PM = 158)

Impacto electrnico

Ionizacin qumica

Cromatografa Gaseosa Espectrometra de Masas

Sistemas de acople

Separador de chorro (columnas rellenas)

Ensamblaje con columnas capilares

hacia la bomba A cmara de ionizacin

cmara de evacuacin desde el CG

constriccin de entrada

tubo de vidrio poroso

constriccin de salida

collarn que se atornilla en el receptculo de fuente inica

Cromatografa Lquida Espectrometra de Masas

Sistema de acople

Sistema de ionizacin

Formacin de iones gaseosos a partir de analitos en solucin

Ionizacin a presin atmosfrica

Electronebulizacin asistida con un gas: electrospray (ESI)

Ionizacin qumica a presin atmosfrica (APCI) Fotoionizacin a presin atmosfrica (APPI)

Electronebulizacin asistida con un gas

Electrospray (ESI)

Electrospray (ESI)
1. La fase mvil y el analito se nebulizan (dispersados en pequeas gotas) 2. El solvente de la fase mvil se evapora de las gotas (desolvatacin) 3. La densidad de carga en las gotas aumenta hasta alcanzar el lmite Raleigh (10e8 V/cm3) y luego la gota sufre explosiones de Coulomb y se rompe en gotas ms pequeas. 4. Bajo la influencia de potenciales electrostticos en la cmara de spray (nube), el ion analito se desorbe de la gota.

Electrospray

aerosol

lquido

Cundo es apropiado trabajar en ESI?

- Solutos ionizables de alto y bajo peso molecular. El analito de inters debe ser capaz de portar carga en solucin Ejemplos: a) Muestras que contienen heterotomos: carbamatos, benzodiacepinas b) cidos o bases

c) Especies inicas: fosfatos, conjugados con grupos sulfato, aminas, etc

d) Muestras que se multi-cargan en solucin (ej: pptidos, proteinas, oligonucleotidos)

e) Compuestos que pueden aceptar carga inducida

A evitar: muestras con grupos no polares en los que la induccin de carga no sea un proceso eficiente

Ionizacin qumica a presin atmosfrica

APCI

Ionizacin qumica a presin atmosfrica (APCI)

1. La fase mvil y el analito se nebulizan (dispersados en pequeas gotas) 2. Las gotas se evaporan. 3. Las molculas de fase mvil se ionizan por electrones provenientes de una descarga elctrica. 4. Las molculas de analito se ionizan por los iones de la fase mvil.

La muestra y el solvente
vaporizados entran en la regin corona entre la aguja y el capilar

Las molculas de solvente se

ionizan en la regin corona de descarga, transformndose en iones gaseosos reactivos

Estos iones reactivos

reaccionan con las molculas de muestra, ionizndolas

Ionizacin qumica a presin atmosfrica

H3O+(H2O)16

Cundo es apropiado trabajar en APCI?

Muestras: Compuestos de peso molecular/polaridad intermedias: PAHs, PCBs, cidos grasos, ftalatos. Compuestos que no contienen grupos cidos/bsicos (ej: hidrocarburos, alcoholes, aldehidos, cetonas y esteres) Muestras con heterotomos: ureas, benzodiacepinas, carbamatos Muestras que exhiben un mal comportamiento ESI Parmetros en solucin

Mucho menos sensible a las condiciones de disolucin que ESI

Tolera mayores flujos que ESI Acomoda algunos solventes no compatibles normalmente con ESI Muestras a Evitar Debido a la evaporacin previa: muestras trmicamente lbiles, muestras cargadas en solucin, biomolculas (habitualmente no voltiles).

Fotoionizacin a presin atmosfrica

APPI

APPI (modo positivo)

El solvente y la muestra se nebulizan y son completamente vaporizados por calefaccin.

La ionizacin del solvente y la muestra ocurre por bombardeo con fotones a partir de una lmpara UV

La molcula de analito M se ioniza a ion molecular (si el potencial de ionizacin del analito es menor a la energa del fotn). El ion M.+ puede extraer un hidrgeno del solvente para formar [M+H]+

Un dopante fotoionizable en exceso y rinde muchos iones moleculares. El analito se ioniza por transferencia protnica a partir del dopante o solvente El in molecular del dopante ioniza al analito por transferencia electrnica

Cundo usar APPI?

Puede ionizar compuestos que no se ionizan bien con ESI

o APCI (ej: PAHs).

Tiene mejor sensibilidad global para algunos compuestos

(THC-tetrahidrocanabinol, cido benzoico, vitaminas no hidrosolubles).

Tiene mejor sensibilidad a bajas velocidades de flujo que

APCI.

Es robusto y altamente reproducible.

Seleccin del sistema CL/EM

100.000

Peso molecular

ESI

10.000
APPI

1.000

APCI

No polar

Muy polar

Polaridad del analito

Registros grficos CG-EM y CL-EM

Cromatograma de corriente inica total Cromatograma de in seleccionado Arreglo tridimensional: seal en funcin del tiempo (informacin cromatogrfica) y en funcin de la relacin m/z (informacin espectroscpica)

Sntesis de 1Br-butano a partir de butanol (CG-EM)

CH3(CH2)3OH + BrCH3(CH2)3Br + OH-

1-butanol 1-bromobutano

cromatograma

EM pico 1

EM pico 2

Combustin de tela tratada con producto ignfugo

Cromatograma de corriente inica total (TIC)

EM de pico 12 (benceno)

Confirmacin presencia de cocana en orina por CG-masa

Cromatograma de corriente inica total

EM de testigo de cocana (m = 303) a igual tiempo de elucin EM del pico a 11.5 min

Mezcla de 6 herbicidas resuelta por HPLC-masas

Cromatograma convencional con deteccin UV

Deteccin de un ion seleccionado m/z = 312 (corresponde a MH+ formado a partir de imazaquina de masa = 311)

Cromatograma de masas de corriente inica total

Representacin de la estructura tridimensional de datos CG-EM en modo barrido completo (full-scan)

Se obtiene: el cromatograma inico total, el cromatograma inico de un in seleccionado (a determinada masa) y los espectros de masas (a determinados tiempos de retencin)