Sunteți pe pagina 1din 35

Cariotipul uman

Cromozomi = elemente esentiale ale nucleului celular, suportul genelor.

Genes per chromosome

Numarul lor intr-un nucleu este fix pentru fiecare specie.

Organism

Nr. cromozom
46 48 78 64 78 38 40 60 8

OM CIMPANZEU CAINE CAL PUI PISICA SOARECE BOVINE DROSOPHILA

Perechi autozomi
Diploid (2n) Pisica Caine Porc Capra Oaie Vaca Cal 38 78 38 60 54 60 64 Nr. de metacentrici 16 0 12 0 3 0 13 Nr. de acrocentrici 2 38 6 29 23 29 18

Sex cromozomi
X Y

M M M A A M M

M A M M M M A

M Metacentric; A Acrocentric

Telomeres

Telomeres

p arm

Centromeres

q arm

Telomeres

Satelit

CONSTRICTIE SECUNDARA

CENTROMER

TELOMER

morphology of chromosomes.
Satellite

arm Centromere (primary constriction)

Secondary constriction telomere Chromatid

Criterii de identificare, numerotare si clasificare a cromozomilor.


Talia cromozomilor (1,5-10 microni) L.r.c = p+q/22A+X .1000 Pozitia centromerului si lungimea bratelor. i.c = p/p+q .100 r = q/p d = q-p Prezenta constrictiilor secundare si a satelitilor.

TIPURI DE CROMOZOMI (dupa raportul lungimii bratelor)


cromozomi metacentrici q=p cromozomi submetacentrici (p=1/3L) cromozomi acrocentrici (p=1/10L) q= (lungimea) bratul(ui) lung al cromozomului p= (lungimea) bratul(ui) scurt al cromozomului

Cu ocazia conferintei de citogenetica umana de la Denver-California din anul 1960 s-a stabilit un sistem unic de clasificare a cromozomilor omului, numit sistemul Denver. In conformitate cu acest sistem, cei 46 de cromozomi sunt impartiti in sapte grupe, fiecare dintre ele cuprinzand un numar variabil de cromozomi. Dupa descoperirea cariotipului uman, cercetarile de citogenetica umana au luat un mare avant, reusind sa stabileasca nu numai aspectele normale ale cariotipului ci si o serie de aberatii cromozomale in cazul unor maladii ereditare, ale tumorilor maligne etc.

Chromosomes in a somatic cell

autosome
Sex chromosomes

Pentru analiza cromozomilor si intocmirea cariotipului este necesara stimularea diviziunii celulelor prin cultura celulara in vitro. Tehnica intocmirii cariotipului se face pornind de la limfocite stimulate cu phytohemaglutinina, diviziunea e blocata in matafaza cu ajutorul colchicinei ( inhibitorul fusului de diviziune), celulele sunt supuse apoi hipotonizarii ( clorura de potasiu) in vederea eliberarii nucleilor si dispersarii cromozomilor si in final sunt fixate cu solutie de alcool-acid acetic glacial, etalate pe lama si colorate.

Metoda citogenetica de rutin foloseste culturi de limfocite din sngele periferic (produsul cel mai accesibil pentru studiu).

O prob de 0.5 ml snge heparinat (recoltat steril) este incubat 4872 ore (la 37o) ntr-un mediu nutritiv, la care se adaug ser uman sau de viel (pentru a mbogi coninutul n proteine i factori de cretere) i fitohemaglutinin (pentru a stimula multiplicarea limfocitelor T). Cu puin timp nainte de terminarea culturii, mitozele sunt blocate n metafaz cu colchicin, substan ce inhib formarea fusului de diviziune i trecerea n anafaz. Apoi, mediul este nlocuit cu o soluie salin hipoton, care "umfl" celulele i disperseaz cromosomii; Urmeaz fixarea celulelor, etalarea lor pe o lama microscopic i colorarea (cu Giemsa). Preparatele sunt examinate la microscop, se numr cromosomii (obinuit 16 metafaze; 32 n cazul suspiciunii unui mozaic cromosomic) i se analizeaz morfologia lor; metafazele selecionate sunt fotografiate. Cromosomii, din fotografiile obinute dup mrire, sunt decupai, identificai i apoi aranjai n cariotip, pe baza criteriilor morfologice, n perechi de omologi i grupe. Se analizeaz atent morfologia i modelul n benzi a fiecrui cromosom.

CITOGENETICA

The chromosome under high objective lens, Chromosomes in a somatic cell under oil objective lens,

Male karyotype ( 46, XY)

female karyotype (46 ,XX)

GRUPELE DE CROMOZOMI LA OM

Grupa A = per 1+ per 2+ per 3


per 1 si 3 - metacentrici per 2 submetacentrici

Grupa B (submetacentricii) = per 4 + per 5 Grupa C = per 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 + + cromozomul/cromozomii X, metacentric(i)

per 6 metacentric per 7, 8, 9, 10, 11, 12 - submetacentrici Grupa D (acrocentricii) = per 13, 14, 15

Grupa E = per 16, 17, 18

per 16 - metacentrici per 17, 18 - submetacentrici Grupa F (metacentricii) = per 19, 20

Grupa G (acrocentricii) = per 21, 22 + cromozomul Y

Cariotiparea (alcatuirea cariotipului) respecta urmatoarele reguli: cromozomii sunt asezati in ordinea descrescatoare a marimii; cromozomii omologi formeaza perechi; perechile sunt grupate dupa morfologie.

Pentru a descrie un cariotip normal sau anormal, s-a stabilit un sistem de nomenclatur i o serie de abrevieri. Formula de baz cuprinde 3 itemuri, separate prin virgul: primul precizeaz numrul de cromosomi, al doilea constituia (normal / anormal) a cromosomilor sexuali, iar al treilea (prezent n funcie de situaie) anomaliile de numr sau structur.
46,XX sau 46,XY Monosomie X 45,X Trisomie 47,XXY Trisomie 47,XX,+21 21); - cariotip normal feminin sau masculin; - 45 cromosomi, un singur cromosom X; - 47 cromosomi cu doi X i cu un Y; - 47 cromosomi, la o persoan cu un cromosom 21 suplimentar (trisomie

BANDAREA CROMOZOMILOR

Dupa 1970 s-au dezvoltat tehnici moderne de citogenetica care permit prin metode de bandare identificarea precisa a fiecarui cromozom. Tehnicile de bandare au ca principiu afinitatea pe care o manifesta unii coloranti sau agenti fluorescenti fata de AND.

Astfel clorhidratul de quinacrina manifesta afinitate fata de AND bogat in A-T care maresc intensitatea fluorescentei in timp ce GC o reduc. S-a observat ca si gradul de condensare al cromatinei influenteaza intensitate coloratiei benzilor.

Bandarea Q: - benzile Q se obtin prin colorare cu quinacrina care se fixeaza preferential pe regiuni ADN bogate in A-T - prezinta polimorfism ( variatii individuale ca marime si fluorescenta a benzilor) Bandarea G: - a devenit cea mai uzuala tehnica pentru cromozomii umani - benzile G se obtin prin digestie enzimatica controlata cu tripsina urmata de colorarea Giemsa

Bandarea GTG

Soluii utilizate: Soluie de atac enzimatic: tripsin 0,02g cu 50 ml PBS 1X; Soluie de colorare: Giemsa 2% n ap distilat; Ap distilat. Protocolul utilizat pentru realizarea bandrii a fost urmatorul: Preparatele au fost introduse direct de pe placa histologic fierbinte n soluie de atac enzimatic (aflat la temperatura camerei) timp de 12-15 secunde; Timpii optimi se testeaz pe o prim lam pentru fiecare caz n parte; Urmeaz o trecere rapid prin soluia de cltire intermediar rece (+4C); Colorare la temperatura camerei timp de 2-3 minute; Cltire cu ap distilat; Uscare la aer.

Bandarea R:
se obtine prin denaturare termica controlata ( 85) a preparatelor intro solutie salina inaintea colorarii cu acridin oranje sau Giemsa benzile G negative devin prin aceasta tehnica benzi R pozitive si invers

Bandarea T:
evidentiaza telomerele utilizeaza acridin oranje

Bandarea C:
evidentiaza centromerii cu exceptia cromozomului Y, la care banda intens colorata e localizata in regiunea distala a bratului q utilizeaza Giemsa

Benzi G

Benzi R

Benzi C

Tip de cromatina
Localizare

Heterocromatina
Brate cromoz. Bogate in A-T

Eucromatina Heterocromatina
Brate cromoz. Bogate in G-C Centromere

Compozitie baze

Bogate in AT, unele in GC