HPLC

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M. en C. Harlem Hayde Cruz Bailn

Tania G. Garca Mendoza Lizet Nez Pea Karina Ortega

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tcnica analtica ampliamente verstil Utilizado para el anlisis de productos farmacuticos, biomolculas, polmeros, y muchos

Cromatografa liquida de alto rendimiento (HPLC)

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HPLC
Una

Tcnica

de separacin realizada en la fase lquida

fsica

muestra se separa en sus componentes mediante la distribucin entre la fase mvil (solventes orgnicos) y una fase estacionaria (columna empaquetada de partculas pequeas adsorbentes).
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Ventajas y limitaciones
Anlisis

de mltiples compuestos de muestras reales y mezclas complejas <0,5% (RSD).

La separacin es menos eficiente que CG capilar. Mas difcil para novatos

Precisin HPLC

es altamente

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Modalidades de HPLC

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Cromatografa de fase normal (NPC)

Cromatografa lquido-slido o Cromatografa de adsorcin
Fase

mvil no polar y la fase estacionaria es polar (gel de slice) polares, no polares e ismeros, muestras complejas. contaminacin, para reducir este problema se utilizan grupos amino-o ciano enlazados a los grupos silanol.
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Compuestos Fcil

Cromatografa en Fase Reversa (RPC)

Se basa en la interaccin del analito entre las dos fases, una fase mvil polar y un fase estacionaria no polar

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Cromatografa de Intercambio inico (IEC)

RCOO- + R4 N+ RNH3+ + RSO3 [R4 N+, -OOCR]0 Par inico [RNH3+, - O3SR]

Se basa en el intercambio de analitos inicos con los contra iones de los grupos inicos unidos al soporte solido.

Analiza componentes inicos, aminocidos,

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Cromatografia de Exclusion molecular (SEC)

Se basa nicamente en el tamao molecular del analito.

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Cromatografa

de permeacin en gel (GPC): se utiliza para la determinacin de pesos moleculares de polmeros orgnicos. de filtracin en gel (GFC): se utiliza para la separacin de materiales biolgicos solubles en agua.
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Cromatografa

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Cromatografa quiral:
Columnas quirales: Protenas, polisacrido, ciclodextrinas, tipo Pirkle, esteres corona y polmeros quirales
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Cromatografa de interaccin hidroflica:

Parecida a fase normal Utiliza una fase estacionaria polar tales como slica y materiales de intercambio inico pero eluyen con Se utiliza para fase mvil polar separar analitos de Polares y solventes pptidos orgnicos y hidroflicos Buffers acuosos.
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Cromatografa de interaccin hidrofbica:

Anloga a RPC pero utiliza bajo contenido de solventes orgnicos y altas concentraciones de sales Se usa para la separacin de protenas que fcilmente se desnaturalizan.

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Electrocromatografa:
Utiliza simultneamente la electroforesis y la cromatografa La diferencia es que utiliza un campo elctrico y el eluyente es capaz de separar por s mismo los componentes

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Utiliza columnas de relleno y una fase mvil de fluido presurizado supercrtico como dixido de carbono modificado con un solvente orgnico polar Se utiliza principalmente para analitos no polares

Cromatografa de fluidos supercrticos

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Algunos corolarios de sentido comn

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