Diagnostic de laborator

Coci gram pozitivi

Genul Staphylococcus
Stafilococi coagulaz-pozitivi: S. aureus
Staphylococcus aureus Microscopie electronic Sursa: CDC/Janice Haney Carr Jeff Hageman, M.H.S.

Stafilococi coagulazo-negativi (SCN) cu importan clinic: ex. S. lugdunensis, S. epidermidis, S. haemolyticus, S. saprophyticus (mai uor ALB i CITRIN)
stafilococul secreta enzima coagulaza: care activeaz coagularea plasmei Si este un marker al virulentei.

Produs patologic
- portaj: cavitatea nazal, faringe, tegumente (zona axilar, perianal) - infecii tegumentare puroiul (S. aureus) - infecii urinare urin (SCN) - pneumonie sput - meningite LCR - sepsis - toxiinfecii alimentare materii fecale, vomismente, alimente. (provocate de exotoxinele preformate, existente n alimente n care s-au multiplicat stafilococi enterotoxigeni) - infecii nosocomiale - S. aureus meticilino-rezistent (MRSA)

Examenul direct al produsului patologic

- macroscopic: puroi cremos, filamentos, glbui. - microscopic: coloraia Gram: coci gram (+), dispui n grmezi asemntoare ciorchinilor de strugure

Staphylococcus spp. Cultur pur Coloraie Gram, 100x

Staphylococcus spp. Produs patologic Coloraie Gram, 100x

Cultivare pe medii in vederea obtinerii de colonii izolate

- mediul de mbogire: mediul hiperclorurat Ex. Chapman - nepretenios, poate fi cultivat pe geloz simpl Incubare aerob la 37C, 18 24 ore.

Identificarea bacteriei
- Caractere morfotinctoriale: frotiu din cultur pur coci Gram (+), n grmezi. - Caractere de cultur: col S cu pigment auriu

Staphylococcus aureus Cultur pur, geloz simpl Colonii S, pigment galbenauriu

Staphylococcus aureus Cultur pur, geloz simpl

- Caractere biochimice:

- catalaz +

(catalaza descompune peroxidul de hidrogen in apa si oxigen)

- coagulaza liber +: S. aureus; - coagulaza legat + (clumping factor - CF): S.aureus, S. Lugdunesis
- producerea de DN-az: S. aureus

testul DN-azei

- Caractere biochimice:

- producere de pigment:
- auriu la S. aureus - alb S. epidermidis - citrin S. saprophiticus

- Caractere biochimice:

- producerea de hemolizine pe geloz-snge

- hemoliza (S. aureus, S. haemolyticus, .a.) - nu prezint hemoliz (majoritatea tulpinilor SCN)

Staphylococcus aureus Cultur pur, geloz snge Colonii S, -hemolitice

Staphylococcus aureus Cultur pur, geloz snge Lumin incident, 2x

Staphylococcus aureus Cultur pur, geloz snge, se evideniaz hemoliza Lumin transmis, 2x

Hemoliza = zone largi de hemoliz clar.

Determinarea patogenitii
- in vitro: producerea de coagulaz

- in vivo: inoculare la animale de laborator

Tipizarea bacteriilor
pentru identificarea sursei de infecie - prin lizotipie (determinarea sensibilitii stafilococului fa de bacteriofagi) - prin metode de biologie molecular

Testarea sensibilitii la antibiotice

obligatorie se realizeaza prin metode difuzimetrice

Exist fenomenul de rezisten nti la penicilin (PENICILINAZ) apoi la oxacilin apoi la meticilin ...

- nc sensibil la Vancomicin (dar nu 100%)

stafiloccocul secreta penicilinaze sau beta-lactamaze: enzime care inhiba penicilina si antibioticele beta-lactaminice, ceea ce-i confera rezistenta bacteriei la tratamentul cu penicilina si alte antibiotice similare.

Genul Streptococcus
S. pyogenes S. agalactiae S. grup viridans S. pneumoniae (Pneumococ)
Streptococcus spp. (SGC) Microscopie electronic Sursa: CDC/Janice Haney Carr

Produs patologic
S. pyogenes: - secreie faringian (angina eritemato-pultacee) - puroi (leziuni cutanate) S. agalactiae: - secreie vaginal, secreia canalului cervical la mam - LCR, snge, aspirat bronic la nou-nscut Pneumococ: - sput, LCR, snge

Examen direct
a. Examen macroscopic - S. pyogenes (amigdale cu puroi ) - Pneumococ sput ruginie b. Examen microscopic - col GRAM: coci Gram(+) S. pyogenes: coci rotunzi, dispui n lanuri S. de grup viridans: coci rotunzi sau ovalari

Streptococcus spp. Hemocultur Coloraie Gram, 100x

Streptococcus pyogenes Cultur pur Coloraie Gram, 100x

 Pneumococii: coci lanceolai, dispui diplo, nconjurai de o capsul proprie

Streptococcus pneumoniae Cultur pur Coloraie Gram, 100x Streptococcus pneumoniae Hemocultur Coloraie Gram, 100x

Izolarea bacteriei - geloz-snge - bulion-snge

Identificare: - Caractere morfo-tinctoriale - Caractere de cultur - Caractere biochimice (ex. sens. la bacitracin) - Caractere antigenice (r. Ag-Ac)

Caractere de cultur:
Streptococcus pyogenes Geloz snge; se evideniaz hemoliza

Streptococcus pyogenes (SGA) Hemoliz Identificarea speciei - testul la bacitracin

Streptococcus pyogenes (sus) - sensibil la bacitracin Streptococcus agalactiae (jos) - rezistent la bacitracin

IDENTIFICARE SGA

Streptococcus agalactiae (SGB) Geloz snge, test CAMP pozitiv Hemoliz extins testul CAMP: - orizontal: S. aureus - verical: S. agalactiae IDENTIFICARE SGB

Streptococcus spp. (non-B) Geloz snge, test CAMP negativ Lipsa hemolizei extinse

Streptococcus pyogenes (sus) Streptococcus agalactiae (jos) Geloz snge, test CAMP

Factorul CAMP: Christie, Atkins, Munch-Petersen

Daca cele doua microorganisme sunt cultivate n 2 striuri perpendiculare (fr s se ating), acolo unde cele 2 striuri se nvecineaz, liza hematiilor (de berbec ) apare mrit, n form de vrf de sgeat.

Caractere de cultur:
Streptococcus pneumoniae Geloz snge

Colonii S sau M (capsul), cu hemoliz alfa Caractere biochimice pneumococul SENSIBIL la bil i optochin s. viridans REZISTENT la bil i optochin

Hemoliza : incompleta, de culoare verde datorita reducerii Hb la MethHb

Streptococcus pneumoniae Hemoliz alfa Identificarea speciei - testul la optochin

Streptococcus pneumoniae (sus) - sensibil la optochin Streptococcus grup viridans (jos) - rezistent la optochin

Antibiograma
- Streptococul de grup A i B sensibilitate la penicilin - nu se efectueaz ABG dect n situaii speciale, de ex. hipersensibilitate la penicilin) - Pentru ceilali streptococi se efectueaz ABG

Diagnostic serologic - evidenierea Ac (n bolile post-streptococice) - Streptolizina O = SLO (Ag) determin formarea de Ac anti-SLO = ASLO - ASLO crete n primele 7 zile pn n sptmnile 3-4 cnd se menine n platou i apoi scade

titrul general acceptat 200-250 unitti ASLO/ml

dg serologic reactia ASLO

Cand? Ce determinam?
Cum?

dg serologic reactia ASLO

Se utilizeaza in dg retrospectiv al infectiilor streptococice sau pt dg bolilor poststreptococice; determinam titrul de anticorpi anti streptolizina O. PRINCIPIU SLO are efect hemolitic asupra hematiilor de berbec. Daca in serul pacientului exista anti-SLO actiunea hemolitica a SLO e neutralizata. Prin dilutii in tuburi se determina titrul ASLO. TEHNICA 1. O cantitate constanta de SLO + serul pacientului in dilutii binare in tuburi 2. Incubam 15minute la 37 C 3. Se adauga suspensia de hematii 4. Incubam 45 minute la 37 C 5. Centrifugam si pastam tuburile la frigider pana a doua zi

RSN dg serologic reactia ASLO

12

50

100

125

166

250

INTERPRETARE Titrul reactiei ASLO e dat de cea mai mare dilutie de ser in care lipseste complet hemoliza.

- Dg (+) la titrul de 1/200 UI/ml - Val < 1/200 UI/ml nu exist infecie streptococic - Val > 1/200 UI/ml este infecie streptococic n evoluie.