Los Flavonoides y sus Propiedades UniversidadAntioxidantes de San Carlos de Guatemala | Fitoqumica

Que son los Flavonoides?

Los flavonoides son pigmentos naturales presentes en los vegetales y que protegen al organismo del dao producido por agentes oxidantes, como los rayos ultravioleta, la polucin ambiental, sustancias qumicas presentes en los alimentos, entre otros.

Historia
Fueron descubiertos por el premio Nobel Szent-Gyrgy, quien en 1930 aisl de la cscara del limn una sustancia, la citrina, que regulaba la permeabilidad de los capilares. Los flavonoides se denominaron en un principio vitamina P (por permeabilidad) y tambin vitamina C2 (porque se comprob que algunos flavonoides tenan propiedades similares a la vitamina C)2. Sin embargo, el hecho de que los flavonoides fueran vitaminas no pudo ser confirmado, y ambas denominaciones se abandonaron alrededor de 1950.

Distribucin
Los flavonoides se encuentran en frutas, verduras, semillas y flores, los cuales son consumidos en la dieta humana de forma habitual y tambin pueden utilizarse en forma de suplementos nutricionales, junto con ciertas vitaminas y minerales.

Flavonoides en la Dieta
Los flavonoides por sus caractersticas poseen una accin protectora y la imposibilidad del organismo humano de producirlos merecen ser incorporados al grupo de los nutrientes esenciales.

Sntesis, Absorcin y Metabolismo

Los flavonoides se sintetizan en las plantas y participan en la fase dependiente de luz de la fotosntesis, durante la cual catalizan el transporte de electrones. El metabolismo de los flavonoides es intenso y una parte importante se excretan por la orina.

Sntesis, Absorcin y Metabolismo

La transformacin de los flavonoides tiene lugar en dos localizaciones: 1. Hgado, por medio de reacciones de biotransformacin de fase I en las que se introducen o exponen grupos polares; 2. Colon mediante reacciones de biotransformacin de fase II, en las que los microorganismos degradan los flavonoides no absorbidos.

Estructura
Los flavonoides son compuestos de bajo peso molecular que comparten un esqueleto comn de difenilpiranos (C6-C3-C6), compuesto por dos anillos de fenilos (A y B) ligados a travs de un anillo C de pirano (heterocclico). Los tomos de carbono en los anillos C y A se numeran del 2 al 8, y los del anillo B desde el 2' al 6..

Estructura
C6

C6

C3

Caractersticas estructurales importantes para su funcin

a)La presencia en el anillo B de la estructura catecol u O-dihidroxi b) La presencia de un doble enlace en posicin 2,3 c) La presencia de grupos hidroxilo en posicin 3 y 5.

Clasificacin de los Flavonoides

Clasificacin

Flavanos Flavonoles Flavonas Antocianidinas

Flavanos
Con un grupo -OH en posicin 3 del anillo C. Ejemplo: Catequina

Flavonoles
Representados por la Quercitina, que posee un grupo carbonilo en posicin 4 y un grupo OH en posicin 3 del anillo C.

Flavonas
Como la Diosmetina, que poseen un grupo carbonilo en posicin 4 del anillo C y carecen del grupo hidroxilo en posicin C3.

Antocianidinas
Que tienen unido el grupo -OH en posicin 3 pero adems poseen un doble enlace entre los carbonos 3 y 4 del anillo C.

Clasificacin

Tipos de Flavonoides

Tipos de Flavonoides
Se han identificado ms de 5.000 flavonoides, entre los que se pueden destacar.
Citroflavonoides Isoflavonoides Proantocianidinas Antocianidinas Acido Elgico Catequina Kaemferol

Citroflavonoides
Quercitina, Hesperidina, Rutina, Naranjina y Limoneno. La Quercitina es un flavonoide amarilloverdoso presente en cebollas, manzanas, brcolis, uvas o repollo.

Citroflavonoides
La Hesperidina se encuentra en los hollejos de las naranjas y limones. La Naranjina da el sabor amargo a frutas como la naranja, limn y toronja, y el limoneno se ha aislado del limn y la lima

Isoflavonoides
O flavonoides de la Soja. Estn presentes en los alimentos con soja tales como porotos, tofu, tempeh, leche, protena vegetal texturizada, harina, miso. Los dos ms conocidos son la Genistena y la Daidzeina

Proantocianidinas
Se localizan en las semillas de uva, vino tinto.

Antocianidinas
Son pigmentos vegetales responsables de los colores rojo y rojo-azulado de las cerezas.

Acido Elgico
Es un flavonoide que se encuentra en frutas como la uva y en verduras.

Catequina
El t verde y negro son buenas fuentes.

Kaemferol
Aparece en puerros, brcolis, rbano y remolacha roja.

Accin Antioxidante de Los Flavonoides

Accin Antioxidante
Los criterios qumicos para establecer la capacidad antioxidante de los flavonoides, son:
Presencia de estructura O-dihidroxi en el anillo B; que confiere una mayor estabilidad a la forma radical y participa en la deslocalizacin de los electrones. Doble ligadura, en conjuncin con la funcin 4- oxo del anillo C. Grupos 3- y 5-OH con funcin 4-oxo en los anillos A y C necesarios para ejercer el mximo potencial antioxidante.

Accin Antioxidante
La Quercitina es el flavonoide que mejor rene los requisitos para ejercer una efectiva funcin antioxidante

Los flavonoides retiran oxgeno reactivo especialmente en forma de aniones superxidos, radicales hidroxilos, perxidos lipdicos o hidroperxidos

Accin Antioxidante
Diversos flavonoides han mostrado su eficiencia para eliminar los procesos de peroxidacin lipdica del cido linoleico o de los fosfolpidos de las membranas, la peroxidacin de los glbulos rojos o la autooxidacin de los homogeneizados de cerebro.

Accin Antioxidante
Se ha comprobado su potente capacidad de inhibir in vitro la oxidacin de las lipoprotenas de baja densidad (LDL) por los macrfagos y reducir la citotoxicidad de las LDL oxidadas.

Accin Antioxidante
Las poblaciones que consumen productos ricos en flavonoides estadsticamente presentan menores riesgos de afecciones cardiovasculares.

Accin Antioxidante
En estudios epidemiolgicos se ha demostrado que con el consumo incrementado de frutas y vegetales se experimenta una reduccin del 50% en el riesgo de cnceres digestivos y de las vas respiratorias.

Accin Antioxidante
La gensteina bloquea el desarrollo de tumores al prevenir la formacin de nuevos vasos impidiendo con ello la llegada del oxgeno y nutrientes a las clulas neotumorales. Tambin modula la reaccin de los estrgenos ligndose a sus receptores con lo que disminuye el riesgo de cncer de mama.

Accin Antioxidante
La capacidad antioxidante de los flavonoides depende, entre otros factores de La capacidad de eliminar el hierro.

Accin Antioxidante
Se ha comprobado recientemente en clulas U937 tratadas con el agente txico terbutilhidroperxido que aun a muy bajas concentraciones son capaces de evitar la rotura y la oxidacin del ADN y que una parte importante de su potente accin protectora est relacionada directamente con su lipofilicidad.

Mtodos de Extraccin de Flavonoides

Mtodos de Extraccin El mtodo a elegir depende bsicamente de la parte de la planta que se utilice y la cantidad de agua que contenga.

Partes Aeras

Ptalos
Extraccin con etanol y separacin con brax Extraccin y separacin con sales de plomo

Ptalos

Ptalos

Tallos y Hojas
Tallos y Hojas
Triturar 500g de tallos y hojas

Macerar con etanol

Concentrar el extracto a presin reducida

Filtrar en caliente sobre carbn activado y dejar enfriar

Tallos y Hojas
Extraer en frio con ter la masa gelatinosa Extraer varias veces con acetona helada

Disolver en H2O caliente la porcin insoluble y hervir

Aadir gota a gota, solucin de acetato bsico de plomo hasta que no se forme ms ppt

Recoger por filtracin

Tallos y Hojas
Suspender en etanol el ppt de plomo y burbujear el exceso de H2So4 y luego concentrarla

Dejar reposar en un lugar fro y recristalizar en etanol

Mtodo de la Farmacopea Brasilea

Pesar exactamente 0.4 g de droga pulverizada (800m)
Colocar la muestra en un baln de fondo redondo de 100 ml para reflujo

Aadir 1 ml de solucin acuosa de metenamina SR, 20 ml de acetona y 2 ml de cido clorhdrico

Aadir 1 ml de solucin acuosa de metenamina SR, 20 ml de acetona y 2 ml de cido clorhdrico

Filtrar la mezcla con algodn en bao volumtrico de 100 ml

Mtodo de la Farmacopea Brasilea

Regresar el residuo de la droga y el algodn al baln de fondo redondo y adicionar 20 ml de acetona
Calentar hasta ebullicin bajo reflujo por 10 min

Filtrar con algodn en el baln de fondo redondo para reflujo y adicionar 20 ml de acetona

Calentar nuevamente bajo reflujo por 10 minutos

Filtrar de nuevo recibiendo el filtrado en el mismo baln volumtrico de 100 ml

Mtodo de la Farmacopea Brasilea

Filtrar de nuevo recibiendo el filtrado en el mismo baln volumtrico de 100 ml En una ampolla de decantacin tratar 20 ml de la solucin A con 20 ml de agua y extraer con 15 ml de acetato de etilo

Extraer 3 veces ms con porciones 10 ml de acetato de etilo

Reunir las porciones de acetato de etilo y lavarlas con 2 porciones de 50 ml de agua fra

Mtodos de la Farmacopea Brasilea

Filtrar de nuevo recibiendo el filtrado en el mismo baln volumtrico de 100 ml En una ampolla de decantacin tratar 20 ml de la solucin A con 20 ml de agua y extraer con 15 ml de acetato de etilo

Extraer 3 veces ms con porciones 10 ml de acetato de etilo

Reunir las porciones de acetato de etilo y lavarlas con 2 porciones de 50 ml de agua fra

Mtodos para Evaluacin de la Actividad Antioxidante

Mtodo del TLC

Aplicar 10 L de muestra y 5 L del estndar antioxidante (Beta-caroteno, Rutina, Quercetina) en una placa cromatogrfica de silica gel 60F254. Fase mvil: Acetato de etilo:cido actico:cido frmico:agua (100:11:11:26).

Mtodo del TLC

Dejar y luego asperjar con solucin de DPPH (1mg/mL en metanol). Resultados: Si los extractos presentan actividad antioxidante se observar la decoloracin del DPPH en las bandas respectivas.

Mtodo del DPPH (Marco)

Preparar el extracto a ensayar pesando aproximadamente 0.1 g de extracto seco, luego diluirlo en 5 mL de metanol, y finalmente agitar vigorosamente hasta diluir completamente el extracto.

Mtodo del DPPH (Marco)

Curva de lectura: Varias diluciones del extracto de la siguiente forma 1 ml extracto + 4 ml metanol = dilucin 0.2 2 ml extracto + 3 ml metanol = dilucin 0.4 3 ml extracto + 2 ml metanol = dilucin 0.6 4 ml extracto + 1 ml metanol = dilucin 0.8.
.

Mtodo del DPPH (Marco)

Recubrir tubos de 10mL con papel aluminio para proteger de la luz. Preparar tubos con los reactivos de la siguiente manera Blanco Control: 1 ml buffer de acetatos + 2 ml metanol; Control: 1 ml buffer de acetatos + 1.5 ml metanol + 0.5 ml DPPH Blanco de Ensayo: 1 ml buffer de acetatos + 1.9 ml metanol + 0.1 ml muestra Ensayo: 1 ml buffer de acetatos + 1.4 ml metanol + 0.5 ml DPPH + 0.1 ml muestra.

Mtodo del DPPH (Marco)

Agitar los tubos en un vortex durante 30 segundos e incubar a temperatura ambiente protegidos de la luz durante 30 minutos. Leer a 517nm. Tomar la absorbancia del control y del ensayo versus el blanco respectivo.

Mtodo del DPPH (Mirco)

Utilizar placas de 96 pozos de fondo plano. Prepararlas bajo luz indirecta, tratando de proteger la reaccin de la luz. Curva de lectura con 8 pozos de reaccin utilizando para cada pozo el blanco respectivo (muestra+metanol).

Mtodo del DPPH (Mirco)

Blanco Control: 50 L metanol; Control: 150 L de DPPH (500M) Ensayo1: 50 L de muestra + 150 L Solucin de DPPH Ensayo 2: 45 L de muestra + 5 L de metanol + 150 L de DPPH Ensayo 3: 40 L de muestra + 10 L de metanol + 150 L de DPPH Ensayo 4: 35 L de muestra + 15 L de metanol + 150 L de DPPH; Ensayo 5: 30 L de muestra + 20 L de metanol + 150 L de DPPH Ensayo 6: 25 L de muestra + 25 L de metanol + 150 L de DPPH; Ensayo 7: 20 L de muestra + 30 L de metanol + 150 L de DPPH; Ensayo 8: 15 L de muestra + 35 L de metanol + 150 L de DPPH.

Mtodo del DPPH (Mirco)

Agitar la microplaca en un vortex para placas durante 30 segundos e incubar a temperatura ambiente protegida de la luz durante 30 minutos. Leer en un lector de microplacas de 96 pozos a una longitud de onda de 490 nm.

Plantas Guatemaltecas con Accin Antioxidante

Toronja (Citrus paradisi)

Mteria mdica: concentrados sobre todo en la cscara Flavonoides: Naringina Hesperedina Diosmina Hesperidina Canferol Quercetina Rutina

Manzana (Malus domestica)

Materia mdica: pulpa y cscara Flavonoides:
Quercetina Canferol Catequina

Brcoli (Brassica oleracea)

Materia mdica: partes areas Flavonoides:
Quercitina Canferol Cianidina Catequinas

Puerro (Allium ampeloprasum var. Porrum)

Materia Medica: Jugo, bulbos, tallo. Flavonoides: Contiene 4 Variantes de Quercitina
Isoquercetina Quercetina Diglucsido Quercetina Monoglucosido Kampferol

Rabano (Raphanus sativus)

Materia Medica: Cscaras.
Flavonoides: Kampferol (Mayoritario) Apigenina Vitexina Bartramiaflavona

Ans (Pimpinella anisum)

Materia medica: frutos.
Flavonoides: Apigenina Isoorientina Isovitexina Rutina Luteolina quercetina

Apazote (Chenopodium ambrosioides)

Materia mdica: Hojas y flores
Flavonoides: Quercetina kampferol

Cacao (Theobroma cacao)

Materia mdica: Semillas Flavonoides:
Glucsidos de Apigenina Luteolina Isovitexina Luteolina Galactsido de Quercetina.

Cardo Mara (Silybum marianum)

Materia mdica: hojas y semillas Flavonoides: En semillas: flavanolignanos, apigenina, quercetina En hojas: apigenina, Kampferol.

Cebolla (Allium cepa)

Materia mdica: bulbo
Flavonoides: Quercetina kampferol

Materia mdica: botn floral

Flavonoides: Rhamnetina Kampferol Eugenitina isoeugenitina.

Clavo (Eugenia caryophyllata)

Cola de caballo (Equisetum arvense)

Materia mdica: tallos frescos o secos
Flavonoides: Galuteolina Dihidroquercetina Equisetrina Dihidrokampferol naringenina

Fenogreco (Trigonella foenum graecum)

Materia mdica: Semilla Flavonoides: Kampferol y quercitina

Guayaba (Psidium guajava)

Materia mdica: hojas secas y flores (en extracto etanlico).

Flavonoides:
Derivados de quercetina como guayaverina (3--arabopiransido) y avicularina (3-arabinsido), miricetina, luteolina, kaempferol, apigenina.

Hierba del toro (Tridax procumbens)

Materia mdica: Flores frescas Flavonoides:
luteolina, glucoluteolina, quercetina e isoquercetina

Limn (Citrus aurantifolia)

Materia mdica: hojas, flor, cascara y pulpa del fruto.

Flavonoides:
Hespersidos Eriodictsido Diomsido Citina Diosmenina

Sen (Cassia angustifolia)

Materia mdica: hojas y frutos. Flavonoides:
Kampferol Isorhamnetina

T de limn (Cymbopogon citratus)

Materia mdica: hojas frescas o secas. Flavonoides: luteolina isoorientina, y derivados

Tilo (Tilia platyphyllos)

Materia mdica: flores secas. Flavonoides: Quercetin -3gluco-7-rhamnsido, kampferol-3-gluco-7rhamnsido, quercetinrhamnoxilsido, isoquercetina, astragalina, afzelina, rutina, tilirsido.

(O: Gracias