Rita Viviane

A coleta, a conservao e o transporte de material ou amostra clnica constituem a base do trabalho microbiolgico, que culmina com a identificao do agente infeccioso e o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos. A padronizao desses procedimentos reflete na melhor utilizao dos recursos da microbiologia, com maior qualidade dos resultados e economia de recursos.

Pedido de exame

O processo microbiolgico feito de etapas interpretativas. As decises em cada uma das etapas podem interferir no resultado final, da a necessidade de uma interao entre as equipe da assistncia e do laboratrio de microbiologia. A primeira comunicao feita por meio do pedido de exame.

O pedido de exame microbiolgico (formulrio prprio) deve informar:

Nome, data de nascimento e registro do paciente; Clnica, enfermaria, setor; Dados clnicos, hiptese diagnstica e o uso de antimicrobianos; Material (precisar o tipo e a tcnica e/ou o local da coleta); Data da solicitao e assinatura e nome legvel do requisitante (informar o telefone de contato, facilita a comunicao do laboratrio com a equipe de assistncia); Data, horrio da coleta e o nome do responsvel pela coleta; As amostras devem ser rigorosamente identificadas com rtulo, contendo: Nome, registro do paciente e material, especificando a topografia.

Especificar os exames: microscopia direta (a fresco, campo escuro), com colorao (Gram, pesquisa de BAAR), cultura e antibiograma para bactrias, cultura e pesquisas especiais (anaerbio, fungo, micobactria, vrus).

A coleta deve ser realizada, sempre que possvel, antes do incio ou da modificao da terapia antimicrobiana. O material colhido deve ser representativo do processo infeccioso investigado, devendo ser eleito o melhor sitio da leso. Por exemplo: as crostas das feridas devem ser removidas, uma vez que a melhor amostra localizase abaixo dessa crosta. A coleta deve ser feita dentro de tcnica assptica, utilizando recipientes de boca larga e materiais estreis e evitando ou diminuindo ao mximo a contaminao com a microbiota no representativa do processo infeccioso.

Conforme as normas de biossegurana, todo material ser colhido, acondicionado, transportado, processado e descartado como potencialmente infectante, independentemente do diagnstico do paciente. Para evitar a exposio de risco biolgico, observar as rotinas de cada procedimento e usar os EPI (luvas, mscara, culos de proteo, avental) indicados.

Todo material deve ser enviado ao laboratrio em recipiente apropriado para o tipo de exame e material (conforme indicado pelo Laboratrio) e devidamente acondicionado para evitar extravasamento do material durante o transporte. Para maior segurana no transporte do material, os frascos com sangue ou qualquer material devem ser transportados dentro de recipientes resistentes perfurao e com tampa. Evitar a contaminao da superfcie externa do frasco de coleta (se acontecer, fazer a desinfeco da superfcie, com trs aplicaes de lcool 70%). No contaminar o pedido de exame. Aps a coleta, o material deve ser transportado ao laboratrio no menor tempo possvel. Quanto mais cedo iniciar o processamento da amostra no Laboratrio de Microbiologia, maior a chance de recuperar o agente infeccioso e de beneficiar o paciente. Observar o tempo mximo para recepo da amostra . O ato de recepo deve ser protocolado com registro do horrio e conferncia da adequao do pedido e do material, cabendo recusa conforme protocolo especfico.

Amostra Respiratria escarro, aspirado traqueal, LAB : Lavado broncoalveolar, BEP : Broncoscopia com escovado protegido)
Hemocultura Fezes Fezes em meio de transporte

Tempo

Acondicionamento

30 minutos

Frasco seco estril

30 minutos (no refrigerar)

30 minutos 12 horas

Frascos com meio de cultura

Frasco seco estril Meio Cary Blair

Urina
Urina refrigerada (4 C )

30 minutos
4 horas

Frasco seco estril

Frasco seco estril

Amostra Swab em transporte meio

Tempo Conforme o meio e de a especificao do laboratrio de Imediatamente

Acondicionamento Meio Stuart, Amies

Swab sem transporte

meio

Cateter (segmento)
Lquor

vascular

Imediatamente
Imediatamente (no refrigerar)

Frasco seco estril

Frasco seco estril

Lquido pleural e outros Imediatamente (no lquidos de cavidade refrigerar) estril

Fragmento sseo de tecido, Imediatamente

Frasco seco estril ou frascos com meio de cultura

Frasco seco estril

Meio de transporte serve para manter a viabilidade das bactrias, porm sem permitir a multiplicao. Exemplos de meios especiais: Stuart, Amies, Cary Blair. Material colhido com swab deve ser processado imediatamente ou imerso em meio de transporte. O swab conservado em meio de transporte mantido, geralmente, em temperatura ambiente at o momento do processamento. No ultrapassar o tempo indicado pelo laboratrio (em geral, 8 horas). Material em que h suspeita da presena de bactrias mais sensveis s variaes de temperatura ou de umidade como: Neisseria meningitides, Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae e Streptococcus pneumoniae devem ser colhidos em meio de transporte ou no prprio meio de cultura. No refrigerar e enviar imediatamente ao Laboratrio de Microbiologia.

Material naturalmente rico em flora microbiana (fezes e escarro) ou obtido de stios de difcil descontaminao (urina, secrees de orofaringe, leses superficiais) deve ser transportado com os cuidados necessrios manuteno da proporo da flora original. Se o material for mantido temperatura ambiente por perodo superior a 30 minutos, pode ocorrer multiplicao bacteriana (microbiota endgena) e, conseqentemente, prejudicar o isolamento do agente infeccioso. Material clnico proveniente de stios estreis (sangue, lquor, lquido asctico, sinovial, etc.) deve ser colhido e semeado diretamente em meios de cultura, transportado temperatura ambiente ao laboratrio e colocado em estufa entre 35 a 37C. Na impossibilidade deste procedimento, coletar o material em frasco esterilizado e conserv-lo temperatura ambiente, at o momento do processamento.

Para todas as rotinas, observar:

Explicar o procedimento ao paciente e posicion-lo adequadamente. Aps anti-sepsia cutnea com lcool ou solues alcolicas de PVP-I ou clorexidina, sempre aguardar at completa secagem espontnea. Verificar antecedente de alergia ao antisptico, especialmente ao iodo.

Momento da coleta

Nmero de amostras

Coletar antes do incio do tratamento com antimicrobiano ou, se j estiver em uso de antimicrobiano,imediata mente antes da prxima dose.

O nmero de amostras e o intervalo entre as amostras so relacionados ao diagnstico e condio clnica do paciente.

Em adulto, observar as seguintes recomendaes:

Sepse, endocardite e infeces localizadas (meningite, osteomielite, artrite, pneumonia, pielonefrite): Duas ou trs amostras em punes diferentes. Caso exista urgncia quanto ao incio do tratamento antimicrobiano, coletar as amostras ao mesmo tempo, em locais diferentes (Ex: brao esquerdo e brao direito). No caso de endocardite, registrar a suspeita no pedido de exame (neste caso, o Laboratrio de Microbiologia prolonga o perodo de cultivo). Sepse relacionada ao cateter vascular: Coletar duas ou trs amostras de sangue em vaso perifrico antes da retirada do cateter vascular. Enviar tambm a ponta do cateter para cultura.

Material

Hemocultura BD.

Para coleta de hemocultura so utilizados frascos/meios de cultura com aspirao vcuo. Verificar o volume a ser coletado diretamente no frasco, lembrando que este um requisito primordial para execuo dos testes.

1
1. 2. 3. 4. BD BD BD BD

Aerbico/ Leveduras Anaerbico Peditrico Myco/Fungos

Tcnica de coleta

Higienizar as mos. Desinfectar a tampa do meio de cultura com lcool 70%, deixando a o algodo at o momento do uso. Escolher a veia adequada. Calar as luvas de procedimento. Fazer a antissepsia do local da puno com gaze estril e Clorexidina Alcolica 0,5%, em movimentos circulares. Essa antissepsia dever ser realizada atravs de movimentos circulares, iniciando no ponto de insero da agulha e ampliando em movimentos circulares para as bordas, at atingir aproximadamente 2cm acima e 2cm abaixo do local da insero. Deixar a regio secar por aproximadamente 30 segundos.

Garrotear o brao do cliente. Puncionar a veia com agulha ou escalpe (no esquecer que no podemos mais encostar no brao). Aspirar o volume necessrio de acordo com cada meio. Introduzir a agulha (a mesma que foi utilizada para puncionar) no meio, onde o sangue ser aspirado por vcuo. Homogeneizar o frasco com movimentos circulares (no agitar fortemente).

Procedimento de assepsia para coleta de hemocultura.

Cuidados Gerais

Em todo frasco de Hemocultura obrigatrio anotar o acesso que foi utilizado para a coleta, PERIFRICO ARTERIAL CATETER - PORT-A-CATH. Coletar o volume especificado pelo fabricante. Anotar no frasco o horrio da coleta. Anotar a temperatura do paciente (se apresentar pico febril). Quando solicitado mais de uma amostra, anotar o nmero da amostra e coletar em stios com intervalo de no mnimo 15 minutos.

Cada coleta dever ser em veias (locais) diferentes. A coleta de hemocultura dever ser realizada, quando possvel, antes de iniciar o tratamento com antibitico. Quando o mdico no especifica coleta no pico febril, a coleta pode ser realizada a qualquer hora do dia.

Momento da coleta

Preferencialmente, coletar material aps lavar a leso com soro fisiolgico e/ou desbridamento. A secreo pode ser coletada de duas maneiras: por aspirao da secreo ou da coleo no-drenada utilizando seringa e agulha estreis ou somente a seringa (o material deve ser encaminhado imediatamente ao laboratrio). com swab ( a tcnica menos recomendada), tendo o cuidado de imergi-lo no meio de transporte ou encaminh-lo imediatamente ao laboratrio.

O termo secreo de ferida no apropriado para informar o tipo de material. Relatar no pedido o stio anatmico e as informaes adicionais (tipo de leso, secreo superficial ou profunda, fstula, etc.).

Material

Ilustrao do Meio de Aymes

Ilustrao do Meio de Aymes haste fina.

Tcnica de coleta

Calar as luvas de procedimento; Antes de iniciar a coleta da regio solicitada, realizar a limpeza do local a ser coletado com gaze estril e soro fisiolgico para retirar a secreo em excesso; Abrir o invlucro do meio de cultura retirar o swab; Coletar a secreo do local solicitado; Realizar a coleta do leito da leso; Aps a coleta da secreo, inserir o swab dentro do tubo de transporte emergindo-o dentro do gel.

Tcnica de Coleta

Material
Ilustrao do meio de Tioglicolato.

Calar as luvas de procedimento. Antes de iniciar a coleta da regio solicitada, realizar a limpeza do local a ser coletado com gaze estril e soro fisiolgico para retirar a secreo em excesso. Abrir o invlucro do swab. Abri a tampa do meio de cultura. Coletar a secreo do local solicitado. Realizar a coleta do leito da leso. Aps a coleta da secreo, inserir o swab dentro do tubo de transporte imergindo-o dentro do gel, e quebrando a raste. Fechar a tampa. Este material tambm pode ser utilizado para cultura de tecidos.

OBS: O material adequado para cultura de anaerbio o material coletado por puno aspirativa, atravs de agulha e seringa, aps antissepsia cuidadosa da pele com lcool e Clorexidina Alcolica 0,5%.

Tcnica de Coleta

Material

Calar as luvas de procedimento. Fazer a antissepsia do local da insero do cateter com o swab de lcool isoproplico 70, em movimentos circulares. Refazer a antissepsia com gaze estril e Clorexidina Alcolica 0,5%, em movimentos circulares. Realizar a antissepsia realizando movimentos circulares, iniciando no ponto de insero com o cateter e ampliando em movimentos circulares para as bordas, at atingir aproximadamente 2cm acima e 2cm abaixo do local da insero. Deixar a regio secar por aproximadamente 30 segundos. Retirar o cateter e cortar com tesoura estril aproximadamente 2cm do cateter, em seu tero distal, colocar no frasco e fechar a tampa. Encaminhar o material imediatamente ao laboratrio.

Ilustrao do tubo Falcon .

Tcnica de Coleta

Material
Procedimento correto e o errado para coleta de secreo em seringa.

Realizar anti-sepsia do local (pele ntegra). Se leso aberta, fazer limpeza com soro fisiolgico, de acordo com a tcnica do curativo. Aspirar o material com seringa e agulha estreis ou somente com a seringa. As colees drenadas podem ser aspiradas diretamente na seringa tipo insulina ou por meio de um pequeno cateter. Quando no houver secreo suficiente, injetar pequena quantidade de soro fisiolgico estril e aspirar com a mesma seringa. O material deve ser transportado na prpria seringa, com eliminao do ar e vedao (principalmente nos casos de cultura para anaerbio) ou em frasco estril. Anotar o horrio da coleta, identificar o material e encaminhar ao laboratrio

Tcnica de coleta do jato mdio:

Material

A coleta de urina deve seguir tcnica rigorosa, evitando ao mximo a contaminao da urina com a microbiota da genitlia. O ideal a coleta da primeira urina da manh, se no for possvel, coletar de 2 a 3 horas de reteno urinria.

Tcnica de coleta do jato mdio

Explicar o procedimento ao paciente, que dever lavar a genitlia com gua e sabonete (No usar antisptico, pois interfere com o crescimento bacteriano); Na mulher, afastar os grandes lbios para melhor higiene do meato uretral; Lavar a regio genital de frente para trs e no usar duas vezes a mesma gaze; No homem, expor a glande para melhor higiene; Enxaguar com bastante gua ou com gaze umedecida para retirar o excesso de sabonete e enxugar com toalha limpa ou gaze.

Coletar a urina do jato mdio, isto , desprezando a primeira e a ltima poro de urina, diretamente em frasco estril de boca larga: No homem, expor bem a glande; Na mulher, manter os grandes lbios afastados (o procedimento deve ser supervisionado por enfermeira ou auxiliar treinada). Anotar o horrio e identificar o frasco; Transportar ao laboratrio imediatamente, ou refriger-la (a 4 C) at no mximo 4 horas, mantendo a refrigerao durante o transporte (manter a temperatura com gelo ao redor do vasilhame).

Tcnica de coleta por meio do cateter vesical:

Paciente sem sonda vesical; O prprio cateterismo para coleta de urina implica em risco de infeco, porm esta tcnica pode ser utilizada quando no possvel obter urina espontnea ou a puno suprapbica contra-indicada. Fazer o cateterismo vesical dentro da tcnica assptica; Pacientes com sonda vesical (pacientes cateterizados em sistema de drenagem fechada); Trocar o cateter dentro da tcnica assptica e coletar a urina diretamente da luz do novo cateter, utilizando um recipiente estril. No havendo troca de cateter, aps a desinfeco com lcool a 70% do local, coletar a urina (20 ml) diretamente do cateter, por meio da puno com seringa e agulha estril na proximidade da juno do cateter com o tubo de drenagem.

Tcnica de coleta por puno suprapbica:

Contra-indicao de cateterizao

uma tcnica invasiva, a ser utilizada nos casos: Resultados repetidamente duvidosos de cultura de urina obtida por outras tcnicas; Recm-nascidos ou crianas pequenas suspeita de infeco por anaerbios;

Fazer a anti-sepsia da pele e coletar por meio de seringa e agulha. Obs: Para a pesquisa de BAAR e cultura para micobactria, recomenda-se: coletar a primeira urina da manh em trs dias consecutivos (trs amostras). Solicitar sempre a cultura uma vez que a pesquisa de BAAR fornece, muitas vezes, resultados falso negativos.

Tcnica de retirada do cateter:

Os mesmos cuidados de antisepsia utilizados na introduo do cateter devem ser adotados no momento da retirada do fragmento do cateter para cultura: Fazer anti-sepsia da pele ao redor do cateter; Remover o cateter utilizando uma pina estril, com cuidado para no tocar o cateter na pele; Assepticamente, com tesoura ou lmina estril, cortar cerca de 5 cm da extremidade distal do cateter.

Colocar o pedao do cateter num frasco estril de boca larga e sem meio de cultura. Anotar o horrio e identificar o frasco. Transportar ao laboratrio imediatamente, evitando a excessiva secagem.

Tcnica de Coleta

Fazer anti-sepsia da pele (soluo alcolica de clorexidina ou PVP-I); Realizar a aspirao do material com seringa e agulha estril, dentro de tcnica assptica; Inocular o material em um frasco de hemocultura-adulto (coletar 10 ml, de preferncia);

Na impossibilidade da semeadura direta do material em meio de cultura ou quando o objetivo pesquisar fungo ou micobactria, colocar o material em frasco estril e adicionar heparina para evitar coagulao do lquido; Anotar o horrio e identificar o frasco; Enviar ao laboratrio imediatamente (conservar em temperatura ambiente)

Tcnica de Coleta

A puno lombar deve ser feita sob condies estritas de assepsia. Recomenda-se que o material seja colhido diretamente no meio de cultura, j que uma demora na semeadura implica em grande queda das taxas de isolamento de bactrias. Tanto Neisserias como Haemophilus no resistem s temperaturas baixas, da porque o lquor para cultura no deve ficar em geladeira. Fazer anti-sepsia da pele (soluo alcolica de clorexidina ou PVP-I).

Realizar a puno lombar e coletar no tubo de ensaio (com o meio de cultura) 5 gotas de lquor, de preferncia diretamente da agulha que se encontra introduzida no espao subaracnideo. Anotar o horrio e identificar o frasco. Enviar todo o material imediatamente ao laboratrio de Emergncia. Obs: Para pesquisa de BAAR ou Cryptococcus (colorao com tinta da China), coletar pelo menos 3 ml de lquor.

Tcnica de Coleta

A orientao para a coleta deste material deve ser clara, evitando ao mximo coletar saliva ou material de vias areas superiores, preferencialmente a coleta deve ser feita sob superviso direta da equipe de assistncia. Coletar pela manh com o paciente em jejum, aps higiene oral (escovar os dentes sem o uso de pasta dental e fazer gargarejos); O escarro deve ser coletado aps tosse profunda e depositado diretamente em frasco esterilizado de boca larga com tampa rosqueada; Encaminhar ao laboratrio por perodo no superior a 30 minutos;

Obs: Nos casos de suspeita de infeco por micobactria ou fungo, coletar pelo menos trs amostras, em dias consecutivos (1 amostra diria). Nos casos de suspeita de pneumocistose ou quando a expectorao escassa, esta pode ser induzida por meio de inalao.

Tcnica de coleta

Material

Procedimento realizado em unidades hospitalares para pacientes internados. Material coletado atravs de aspirao (sonda de aspirao),dever ser realizado por fisioterapeutas e/ou enfermeiros. Vestir a mscara facial e se necessrio, o protetor ocular; Higienizar as mos Calar luvas estreis; Realizar aspirao traqueal, com tcnica assptica e desprezar este primeiro aspirado; Utilizar nova sonda para a aspirao do material a ser coletado; Transferir o material com tcnica assptica para o frasco estril, com o auxlio da aspirao. Higienizar as mos; Encaminhar imediatamente ao laboratrio.

Tcnica de Coleta

Orientar higiene oral no utilizando anti-sptico ou pasta dental ; Explicar o procedimento ao paciente e orient-lo a abrir bem a boca; Usar abaixador de lngua e com swab estril fazer esfregaos sobre as amgdalas e faringe posterior, evitando tocar na lngua ou na mucosa oral; Coletar material nas reas com hiperemia, adjacentes aos pontos de supurao ou remover o pus ou placas coletando o material na mucosa logo abaixo; Colher dois swabs e enviar imediatamente ao laboratrio para evitar a excessiva secagem.

Tcnica de Coleta

secreo do conduto auditivo externo: Retirar o excesso de secreo de drenagem espontnea com salina e gaze estril; Introduzir o swab estril no conduto auditivo externo; secreo do ouvido mdio com membrana timpnica rota ou ntegra, necessrio spculo e coleta por meio de swab ou aspirao com seringa.

Tcnica de Coleta

Introduzir o swab esterilizado cuidadosamente na poro ntero-superior de uma das narinas com movimento giratrio delicado e desliz-lo lateralmente pela asa nasal interna. Repetir o procedimento na outra narina com o mesmo swab; Inserir o swab no invlucro especial ou no meio de transporte; Anotar o horrio da coleta e encaminhar o swab ao laboratrio.

Tcnica de Coleta

Coletar o material do saco conjuntival, evitando contato com a plpebra ou os clios. Limpar a secreo purulenta superficial com gaze estril; Afastar a plpebra e coletar com o swab o material do saco conjuntival, evitando coletar a secreo acumulada nos cantos; Introduzir o swab em meio de transporte, se no for possvel a semeadura imediata. Anotar o horrio e identificar o frasco.

Tcnica de Coleta

Usar swab de algodo, certificando-se de que a ponta da haste que suporta o algodo est bem revestida; Umedecer o algodo em salina estril (no usar gel lubrificante); Inserir no esfncter anal, fazendo movimentos rotatrios; Ao retirar, verificar se existe colorao fecal no algodo; Anotar o horrio da coleta e encaminhar o swab ao laboratrio imediatamente ou usar meio de transporte.

Meio de Cary- Blair

Calar as luvas de procedimento. Abrir o invlucro do meio de cultura retirar o swab. Mergulhar o mesmo nas fezes coletas e deixar por 2 min. Aps a coleta das fezes, inserir o swab dentro do tubo de transporte imergindo-o dentro do gel.

Tcnica de Coleta

Material

Identificar o recipiente de transporte de lminas com a etiqueta cdigo de barras. Anotar manualmente na etiqueta o local/regio a ser coletado quando necessrio. Identificar com lpis a borda fosca da lmina com o n da FAP. Higienizar as mos. Calar as luvas de procedimento. Coletar com swab haste plstica estril ou de haste fina estril a secreo solicitada e semear de (forma circular) em 1 lmina (para cada regio solicitada). Colocar no recipiente de transporte de lminas.

Lmica fosca Swab de algodo estril