HEMOTERAPIA LABORATORIAL

(Hemocomponentes e Hemoderivados) 2012.1

Prof. Dr. Patrick Menezes

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EMENTA

Imunohematologia

7 P.

Histrico da hemoterapia. Conceitos bsicos de imunohematologia, principais grupos sanguneos, Caractersticas do doador. Importncia clnica, Reaes transfusionais, Prova de Coombs. Aulas prticas abordando as principais tcnicas de imunohematologia. Prova cruzada, GSRh, Coombs, PAI, Prova reversa, Pesquisa de D fraco. Estudo dos principais testes sorolgicos empregados em hemoterapia
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Banco de sangue

Hemoterapia

Hemoterapia
Hemoterapia o emprego teraputico dos componentes do sangue; Hemocomponentes ou Hemoderivados).

Eritropoese

Introduo
1 unidade de sangue total = 450 ml de sangue + 50 ml de anticoagulante

Sangue total aps centrifugao

UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO HOSPITAL UNIVERSITRIO GAFFRE E GUINLE UNIRIO / HUGG / LPC

Revisando conceitos...

O que imuno-hematologia

o estudo da compatibilidade imunolgica entre componentes sanguneos e seus receptores

Imuno-hematologia eritrocitria

grupo sanguneo: antgenos de superfcie dos eritrcitos

hoje conhecidos mais de 250 antgenos agrupados em 29 sistemas.

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Antgenos eritrocitrios

Aglutinao
As reaes antgeno-anticorpo so reveladas atravs do fenmeno da aglutinao.

Atuao do biomdico no banco de sangue

Executar o processamento de sangue e suas sorologia; Realizar exames pr e ps transfusionais;

Assumir chefias tcnicas, assessorias e direo de unidades; Manusear equipamentos;

Nivelamento de conceitos

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O sangue e as diferentes culturas

Culto ao sangue nas religies Sacrifcios realizados em diferentes povos: Astecas,Maias, povos da frica, Europeus... Papa Inocncio VIII (1492)

Este arquivo est disponvel em: http://www.ccb.ufsc.br/~cristina/sm_2005_1_med7002.htm

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Histria da Hemoterapia
Na Grcia antiga os nobres bebiam o sangue dos gladiadores mortos na arena. 1492- O papa Inocncio VIII ingeriu o sangue de trs jovens em busca da cura. 1667 - Jean Baptiste Denis , mdico do rei Luis XIV, infundiu sangue de carneiro em um doente mental . 1788 - Pontick e Landois realizaram transfuses entre animais da mesma espcie.
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Histria da Hemoterapia
1818 - James Blundell transfundiu sangue humano em mulheres com hemorragia ps parto, ( primeira transfuso ).

1901 - Karl Landstainer descobre os grupos sanguneos ABO . 1936 - Em Barcelona surgiu o primeiro banco de sangue, durante a guerra civil espanhola. Enfrentavam problemas relacionados a coagulao do sangue.
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Histria da Hemoterapia
1940 - Levine descobre o fator Rh.
Aps a II guerra mundial surgem no Brasil os primeiros bancos de sangue privados. 1970 - Implantao dos HEMOCENTROS, iniciando uma poltica do sangue.

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Karl Landsteiner (1868-1943) Nobel de Medicina em 1930

Gentipos AA AO BB BO AB OO

Grupo Sanguneo A A B B AB O

Anticorpos Anti-B Anti-B Anti-A Anti-A Anti-A e B

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Grupo sanguneo ABO

Antgeno

Antgeno

AB

Anticorpo anti-B

Nenhum anticorpo

Antgeno

Antgeno H(O)
Anticorpo anti-A, Anti-B
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Anticorpo anti-A

Frequncias de ABO
grupo O, 45% grupo A, 41% grupo B, 10% grupo AB, 4%

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Funo dos grupos sanguneos

Receptores de vrus, bactrias e parasitos
Sistema de grupo sanguneo MNS, Duffy e outros

Participao no fenmeno de adeso de molculas

Sistema de Grupo Sanguneo Duffy e outros

Transporte
Sistema de Grupo Sanguneo Kidd e outros

Ao enzimtica
Sistema de Grupo Sanguneo Kell e outros

Funo protica estrutural

sistema de grupo sanguneo Gerbich e outros membrana (estomatcitos)

***dieta do grupo sanguneo????????????

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Outros sistemas antignicos

Carboidratos
P ABO Lewis GLOB H I

Enzimas

Glicoproteinas de estrutura ou funo desconhecida

Transporte e canais

LW Xg Duffy Lutheran Indian

Raph Molculas de adeso

JMH Oka

Regulao de complemento

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As transfuses podem ser:

Isogrupo quando doador e receptor so do mesmo grupo ABO

Heterogrupo doador e receptor so de grupo sanguneo diferente

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Compatibilidade
Sangue:
tipagem ABO / Rh (D) PAI: C, D,e E, Kell, Duffy, Kidd, MNS.... H > de 500 Ags identificados

Prova Cruzada
Soro do receptor + hemceas do doador= incubao simular RT in vitro

SUBSTITUTOS DO SANGUE
CARREADORES ARTIFICIAIS DE OXIGNIO LIVRE DE CLULAS

FONTE: Dra.Marcia Cristina Zago Novaretti Fundao Pr-Sangue. Disciplina de Hematologia FMUSP

Linhas de Pesquisas
Tipos de substitutos do sangue
Biosinttico

Background
Imita a natureza utilizando a hemoglobina para liberar oxignio aos tecidos

Base para o desenvolvimento dos substitutos de G V

Produo de fluidos injetveis baseados nas modificaes qumicas da hemoglobina (HBOC) Produzindo compostos injetveis de emulso de perfluoroqumicos (PFCs)

Abitico

Uso de produtos qumicos totalmente sintticos para liberar oxignio aos tecidos

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Carreadores artificiais de oxignio em preparados de hemoglobina

Dissociao da hemoglobina (toxicidade renal) Ao vasoconstritora ao se ligar ao xido ntrico

Afeta a liberao de fatores relaxantes pela clula muscular

A HEMOGLOBINA LIVRE DE CLULAS

PRECISA SER MODIFICADA PARA USO TRANSFUSIONAL

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Carreadores de oxignio livre de clulas

Hb Polimerizada

Emulso de Perfluorocarbono

Hb Conjugada
Hb cross-linked
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CARREADORES ARTIFICIAIS DE OXIGNIO EM PREPARADOS DE HEMOGLOBINA (HBOC) Polyheme (Northfield Lab.) Aprovado pela FDA, fase III de testes clnicos 32 centros de trauma >3.000 casos de trauma <mortalidade Solicitado registro ao FDA
(29 de outubro de 2008)
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Carreadores Artificiais de oxignio

Eficcia e segurana
No se conseguiu at o momento obter um substituto de hemcias que seja seguro e eficaz

Possibilidade de uso em situaes extremas (antes do atendimento mdico em casos de acidentes, guerras) com manuteno da volemia . ****AGUARDANDO NOVOS ESTUDOS
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MEDICINA LEGAL
O estudo dos grupos sanguneo tambm tem sua aplicao, atravs da: utilizao das tcnicas moleculares, nos estudos de paternidade e no reconhecimento de cadveres.

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HISTRICO 1939 - LEVINE E STETSON Uma mulher aps ter dado a luz a uma criana com DHRN apresentou reao transfusional grave aps ter sido transfundida com o sangue ABO compatvel do marido. O soro desta mulher aglutinava 80% das hemcias ABOcompatveis.

SISTEMA Rh

1940 - LANDSTEINER and WIENER Soro de coelho imunizados com hemcias do Macaco Rhesus aglutinavam cerca de 85% das hemcias humanas.

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Por homenagem a LANDSTEINER e WIENER a nomenclatura do Sistema foi mantida como Rh. O alo-anticorpo humano foi renomeado anti-D.

Os antgenos Rh esto presentes nas hemcias desde a 6a semana de vida intra-uterina.

Os receptores Rh (D) positivos podem receber hemcias Rh (D) positivo ou Rh (D) negativo;

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 O sistema Rh o maior e mais complexo sistema de grupo sangneo.

At o momento, pelo menos 49 antgenos tm sido definidos por anticorpos Rh especficos . O antgeno D altamente imunognico (antignico), seguido pelos antgenos c e E.

IMPORTNCIA EM OBSTETRCIA**

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O sistema Rh apresenta certa complexidade gentica, alm de variaes qualitativas e quantitativas em sua expresso. Assim, so usadas as seguintes designaes:
O termo Rh Fraco substituiu a designao Du. Este termo representa uma variao quantitativa na expresso do antgeno D.

O termo Rhnull designa uma condio rara, em que os antgenos do sistema Rh esto completamente ausentes.

O termo "CDE " designa a determinao, recomendada para os pacientes Rh negativos, de outros antgenos menos freqentes do sistema
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Legislao brasileira
Em 1980, criado o programa nacional de sangue e derivados ( Pr - sangue )

Lei de proibio da comercializao do sangue: Pelos artigos 197 e 198 da constituio federal de 1988, o poder pblico responsvel pelas aes referentes ao uso de derivados;

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CICLO DO SANGUE

SUBSISTEMA COLETA

SUBSISTEMA LABORATRIO

SUBSISTEMA HEMOCOMPONENTES

Recepo Pr-triagem Triagem Clnica Coleta Externa

Registro Triagem Hematolgica Coleta Servio Social

Imunohematologia
Recepo Laboratrio

Sorologia

Processamento Estoque/ Rotulagem

Expurgo Distribuio

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Tipos de Doadores
Doadores espontneos

Doadores de reposio
Doadores autlogos

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Tipos de Transfuso
Programada: Para determinado dia e hora.
No urgente: A se realizar dentro das 24 hs. Urgente: A se realizar dentro das 3hs. De extrema urgncia: Quando o retardo do incio da transfuso coloque a vida do paciente em risco.

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Transfuso autloga
descrita em 1921

Binmio doador/receptor constitudo pelo mesmo indivduo.

doao autloga pr-operatria requer a autorizao do mdico.

O sangue retirado pode ser mantido preservado de 30 a 42 dias em geladeira. No existe excluso permanente; NO correto por crenas religiosas *
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Protocolo AUTOTRANSFUSO
Qualquer indivduo adulto no perodo de at 5 a 45 dias antes de cirurgia eletiva; Protocolo de retirada e reinfuso: - 1u - 7 dias antes da cirurgia - 2 u - 14 dias antes da cirurgia - 3 u - 21 dias antes da cirurgia - 4 u - 28 dias antes da cirurgia - 5 u - 35 dias antes da cirurgia - 6 u - 42 dias antes da cirurgia

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Rotina de admisso para o doador

Cadastro

Pr-triagem (triagem hematolgica)

Triagem clnica
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Seleo clnica de doadores

Idade : entre 18 e 65 anos 18 anos completos e 65 anos
completos, 11 meses e 29 dias.

Peso > 50 kg - mnimo de 400ml de sangue. AC/Bolsa Estar bem de sade No estar em jejum Homens: de 2 em 2 meses, at 4 vezes/ano Mulheres: de 3 em 3 meses, at 3 vezes/ano
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RESOLUO VIGENTE

RDC N 57, DE 16 DE DEZEMBRO DE 2010

RDC 153 DE 14/06/04 anterior

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DOAO
Voluntria

Annima
Altrusta No remunerado Sigilosa Consentimento por escrito
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 2/2 meses 4 doaes/ano 3/3 meses 3 doaes/ano

INTERVALO

Autloga protocolo Acima de 60 anos - a cada 6 meses ** A reposio do plasma pelo organismo ocorre em 24 horas e a
dos glbulos vermelhos em 4 semanas.
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 Gravidez: Inapta at 12 semanas ps parto

Aborto: Inapta at 12 semanas

Lactao: Inapta at 12 meses ps parto

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ANEMIA
Hb 12,5 Ht 38 Hb 13 Ht 39
O doador atinge o estoque de ferro que apresentava antes da doao, 40 a 60 dias para os homens e de 50 a 90 dias para as mulheres.

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ALERGIAS
APTOS Assintomticos INAPTO TEMPORRIO at 72 h ps medicao INAPTO DEFINITIVO - atopias severas
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INAPTOS DEFINITIVOS
HIV Chagas Doena de encelopatia espongiforme humana Transplante crnea ou material biolgico base de dura mter Uso drogas injetveis ilcitas
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INAPTOS TEMPORRIOS 12 M
Aps cura de DST e sexo por troca e seus parceiros Sexo com parceria desconhecida sem preservativo

Vtimas estupro
que tiveram relao com outros homens ou as parceiras sexuais destes Percing ou tatuagem *
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 e que tiveram relao sexual com pessoa c/ exame reagente p/ HIV ou Hepatite C ou B ou outra infeco sexual ou sangunea

Detidos por mais de 24 horas

Exposio sangue ou material biolgico

Parceiros hemodialisados ou transfundidos

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CIRURGIAS
GRANDE PORTE 6m a 12 m

PEQUENO PORTE 3m TRATAMENTO DENTRIO 72 h

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TRIAGEM CLNICA DE DOADORES DE SANGUE

Mtodo importante capaz de captar o verdadeiro doador de sangue.

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Finalidade da entrevista
Avaliar os antecedentes patolgicos e

os possveis fatores de risco daquele candidato doao.

So investigados dados que protegem tanto o doador quanto o receptor.

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VOTO DE AUTO-EXCLUSO
Esta informao prestada por voc confidencial e ser mantida sob sigilo. No tem qualquer implicao pessoal. Tem a finalidade de proteger a pessoa que ir receber seu sangue.
RESPONDA COM SINCERIDADE MARCANDO COM X UMA DAS ALTERNATIVAS.

Meu sangue PODE SER USADO PARA TRANSFUSO. Meu sangue NO PODE SER USADO PARA TRANSFUSO, pois estou ou passei por situao de risco (homossexual, bissexual, heterossexual com mltiplos(as) parceiros(as) e/ou viciado em drogas.

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Afrese
Leucafrese Trombocitaferese Eritrocitaferese Plasmafrese

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A hemafrese pode ser realizada com 2 objetivos

Transfusional: Definido como a obteno de um hemocomponente a partir de um doador nico. Ex.: 8u de plaquetas
O principal hemocomponente coletado o concentrado de plaquetas

Teraputico: Tratamento de um grande nmero de patologias Objetivo de remover um elemento patognico ou uma substncia fisiolgica presente em concentraes indesejveis na circulao.
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Alguns doadores de sangue, normalmente devido ansiedade, podem apresentar efeitos adversos doao, sendo mais freqente a ocorrncia de: A) tetania B) vmitos; C) lipotimia. Provas anteriores D) parestesia E) convulso;

Lipotmia vulgarmente designada por perda dos sentidos, desmaio ou desfalecimento. Tetania / espasmos musculares; Parestesia / sensaes cutneas subjetivas (ex., frio, calor, formigamento, presso, etc.) Convulso/ contraes involuntrias dos msculos, de inicio sbito.
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PROCESSAMENTO DO SANGUE
Fracionamento do sangue

Obteno de Componentes

Testagem do sangue coletado

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FRACIONAMENTO
PREPARAO DOS HEMOCOMPONENTES Concentrado de Hemcias Plasma Concentrado de Plaquetas Crioprecipitado ENCAMINHAMENTO PARA ESTOCAGEM ( aguardar liberao)
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Processamento em Sistema Fechado

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SOROLOGIA
TRIAGEM SOROLGICA: Testes de Alta sensibilidade Hepatite B: HBSAg, Anti-HBc Hepatite C : Anti-HCV VDRL Elisa Chagas Elisa HTLV 1-2 Elisa HIV1-2
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Segurana Transfusional (rastrear)

Coleta de amostra e administrao de hemocomponentes

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LIBERAO
Devem ser mantidos em quarentena, ou seja, separados dos produtos liberados. somente liberar aps o trmino de todos os testes laboratoriais e autorizados pelo controle de qualidade.
Os produtos devem ser liberados somente por pessoas autorizadas.

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Condies de Armazenamento

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PR ESTOQUE:
- aguarda resultado sorolgico e tipagem

DESCARTE:

- sorologia positiva
ESTOQUE:
- de acordo com a data de validade

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Separao

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Armazenamento

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O que TRANSFUSO????
a administrao de produtos sangneos (hemoderivados) que podem ter origem autloga ou alognica
Indicao:
reposio de clulas necessrias para funes especficas ou protenas

Hemoderivados
Sangue total: coletado em soluo com cido ctrico + glicose Indicaes RESTRITAS Prtica Fracionamento/ Processamento

Fracionamento

Concentrado de Hemcias
Volume: 280-400ml Massa de Clulas:150-250ml Estocagem: 42d (1-6C) Hematcrito da Bolsa: 50% Indicaes
Sangramento Agudo Anemia Normovolmica

Cada Unidade de CH: Hb em 1g e o Ht em 3%

Concentrado de Plaquetas
Comuns: derivados do ST em que PRP d origem ao CPl 35-60ml = 1U Plaquetas Por Plaquetafrese: 1U de 1 nico doador= 5-8 U Plaquetas Indicaes:
Trombocitopenias Trombocitopatias

Dose: 1U/ 10Kg

Plasma
PFC: separado do ST e congelado at 8h ps coleta 1U= 200/225ml Dose: 10-15ml/Kg Indicaes:
Coagulopatia

Crioprecipitado
Derivado do Plasma descongelado lento 1U: 5-15ml Rico em: FVIII, FXIII, fibrinognio, FvW Indicaes
Hipofibrinogenemia Deficincia de Fator XIII

Dose: 1U/ 10kg de peso

Outros Hemoderivados
Albumina Gamaglobulina Fatores de Coagulao Especficos

 HEMODERIVADOS
FATOR VIII
FATOR IX

ALBUMINA

IMUNOGLOBULINA

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VALIDADE DOS HEMOCOMPONENTES

HEMCIAS depende do tipo de anticoagulante: - CPDA 1 35 dias (mais usada)
cido ctrico,Citrato de sdio.Fosfato de Sdio,Dextrose e Adenina

- CPD SAG Manitol 42 dias

Aumenta a sobrevida e possibilita o armazenamento das hemcias por at 42 dias entre 2C a 6C cido ctrico,Citrato de sdio,Fosfato de Sdio,Dextrose,glicose, NaCl..

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VALIDADE DOS HEMOCOMPONENTES

PLASMA - 1 ANO a -20C PLAQUETAS - 3 a 5 DIAS
CRIOPRECIPITADO - 1 ANO

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90

Comit Transfusional
LEGISLAES MANUAL DA QUALIDADE REGULAMENTOS

PROCEDIMENTOS OPERACIONAIS PADRO

DOCUMENTOS REGISTROS

TREINAMENTO CONTNUO

Reaes transfusionais

Aproximadamente 10% dos receptores apresentam reaes transfusionais. Toda a reao transfusional deve ser registrada e notificada.

Classificao: Agudas ou imediatas Tardias

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Complicaes transfusionais
Imune Reao febril no-hemoltica Reao hemoltica aguda Reao alrgica (leve, moderada, grave) Imediatas TRALI (Transfusion Related Lung Injury) No -imune Sobrecarga volmica Contaminao bacteriana Hipotenso por inibidor da ECA Hemlise no-imune Hipocalcemia Embolia area Hipotermia Tardias Aloimunizao eritrocitria Doenas infecciosas

Reaes transfusionais agudas

Hemolticas imunes
Erro na identificao da amostra colhida. Erro na identificao da bolsa. Erro na identificao do paciente.
Febre, mal estar, agitao, dispnia, nuseas, cefalia, hipotenso, perda da conscincia.
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Febris no hemolticas
Pode ocorrer logo aps o incio da transfuso ou at 4hs aps o trmino. Presena de anticorpos citotxicos. Tremores, calafrio, cefalia, nusea e vmitos, febre, calafrios, alteraes respiratrias, como taquipnia e ou dispnia.

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Alrgicas e anafilticas
Pode ocorrer aps o incio da transfuso ou at 2hs aps o
trmino. Anticorpos ou desconhecidas. Urticria, eritema, tosse, cefalia, dispnia, hipertenso, edema de glote e at o quadro de anafilaxia.

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Hipervolemia
Quando recebe infuso de grande volume de sangue ou a
infuso muito rpida. Pacientes com ICC ou insuficincia renal.

Hipertenso, dispnia, cianose, tosse, dor precordial e at edema pulmonar.

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Contaminao bacteriana Bactrias que resistem s temperaturas de refrigerao.

A gravidade depende do microorganismo contaminante e do estado geral do paciente.
Febre, Vmito, hipotenso, dor abdominal, choque sptico.

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Paciente 20 anos, vtima de acidente automobilstico, d entrada no pronto socorro com mltiplos ferimentos, perda sangunea estimada maior que 40% da volemia. Foi solicitada transfuso de dois concentrados de hemcias.

O banco de sangue deve: Liberar as bolsas tipo O negativo, se o termo de responsabilidade estiver assinado. Dar continuidade s provas de compatibilidade..

Provas anteriores

99

Impresso I

100

Testes laboratoriais - tcnicas

101

Apresentao das tcnicas Imunohematolgicas

Tcnica em lmina

Ainda utilizada Baixa sensibilidade Grande margem de erro

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Tcnica em tubo

Mais utilizado Custo acessvel Boa sensibilidade

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TCNICA DE GELCENTRIFUGAO EM COLUNA DE AGAROSE Alta sensibilidade; Utiliza pouca quantidade de amostra; O resultado pode ser armazenado; Custo elevado.
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Microplaca
Alta sensibilidade; proporciona agilidade em grandes rotinas; Alto custo. "leitor fotomtrico de microplacas"
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 As reaes antgeno-anticorpo so reveladas atravs do fenmeno da AGLUTINAO ; A mais importante ferramenta de trabalho dos imunematologistas.

106

Antgenos dos eritrcitos / Anticorpos sricos

O fenmeno da aglutinao a reao antgeno-anticorpo

107

Controle de qualidade dos reagentes p/ imunohematologia

Positivo 4+

Fracamente positivo

Positivo 3+ negativo Positivo 2+ HEMLISE

Positivo 1+

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LAVAGEM DE HEMCIAS
Quando uma tcnica prev a utilizao de hemcias lavadas, devemos realizar esta lavagem da forma correta efetuando-a pelo menos 3 vezes. 1 Centrifugar a amostra a 4000 rpm por 5 min. 2 Separar o plasma ou soro para outro tubo previamente etiquetado; 3 Identificar outro tubo e pingar 4 gotas do concentrado de hemcias da amostra a ser preparada 4 Encher o tubo com salina fisiolgica at 1 cm da borda. Tampar. 5 Homogeneizar e Centrifugar a amostra a 3.400 rpm durante 1 minuto e 30 segundos 6 Retirar completamente o sobrenadante aps a lavagem invertendose o o tubo rapidamente 7 Repetir os itens 4, 5 e 6 por mais 2 vezes 8 Preparar a suspenso de hemcias.

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PREPARO DAS SUSPENSES

SUSPENSO DE HEMCIAS A 2% 0,1 ml de concentrado de hemcias + 4,9 ml de salina 1 gota de concentrado de hemcias + 49 gotas de salina SUSPENSO DE HEMCIAS A 5%*** 0,1 ml de concentrado de hemcias + 1,9 ml de salina 1 gota de concentrado de hemcias + 19 gotas de salina SUSPENSO DE HEMCIAS A 10% 0,1 ml de concentrado de hemcias + 0,9 ml de salina 1 gota de concentrado de hemcias + 9 gotas de salina SUSPENSO DE HEMCIAS A 50% 0,4 ml de concentrado de hemcias + 0,8 ml de salina 4 gotas de concentrado de hemcias + 8 gotas de salina
110

111

INTENSIDADE DAS REAES

4 + boto slido com pequenos grumos e fundo claro 3 + grumos grandes e numerosos com fundo claro 2 + grumos pequenos e numerosos com fundo rseo 1 + grumos pequenos e fundo bastante rseo W presena de minsculas aglutinaes em fundo bastante rseo 0 ausncia de aglutinao, fundo bastante rseo com hemcias em suspenso. CM campo misto caracteriza-se pela presena de aglutinaes e de hemcias em suspenso, com fundo rseo He hemlise total ou parcial das hemcias. indicador de positividade
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DETERMINAO DO GRUPO ABO

PROVA DIRETA OU GLOBULAR (BETH VINCENT)
Consiste em por em contato soros-teste conhecidos, anti-A, antiB e anti-AB, com glbulos vermelhos (GV) a serem testados, para se identificar a presena ou no dos antgenos A e B.

PROVA REVERSA, SRICA (SIMONIN)

Consiste em colocar em contato o soro a testar com pelo menos GV conhecidos A1 e B, permitindo reconhecer a presena ou no de anticorpos dirigidos contra estes antgenos.

113

DETERMINAO DO GRUPO ABO

114

DETERMINAO DO TIPO Rho (D)

1. Identificar dois tubos de ensaio, como D e CTL. 2. No tubo identificado como D, colocar uma gota de soro anti Rho (D) e no tubo identificado como CTL, uma gota de Controle Rh; 3. Aos dois tubos adicionar uma gota de suspenso de GV a 5% em soluo salina. Essa suspenso, pode ser feita no prprio plasma ou soro; 4. Misturar bem e centrifugar os dois tubos a 3400 rpm por 15 segundos ou 1000 rpm por 1 minuto; 5. Ressuspender o sedimento, agitando delicadamente os tubos e ler macroscopicamente a aglutinao; 6. Se o teste for negativo (aglutinao ausente), proceder conforme indicado no teste para pesquisa de D fraco.

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Controle Rh
um reagente que contm o meio macromolecular utilizado na fabricao de soro anti-Rho (D), mas que imunologicamente inerte (isto , no contm anticorpos).

Em virtude do meio com alto peso molecular (AC IgG e potencializadores) q o anti-D apresenta - podem ocorrer reaes falso positivas.

um testemunho negativo, e deve ser do mesmo fabricante do anti-D utilizado.

116

Pesquisa de D fraco
1. Incubar ambos os tubos (D e CTL) por 15 minutos em banho-Maria a 370C; 2. Lavar os GV de cada tubo por trs vezes, em soluo salina fisiolgica. Decantar completamente por inverso rpida dos tubos, aps a ltima lavagem; 3. A cada tubo, acrescentar duas gotas de soro anti-globulina humana de amplo espectro ou soro de Coombs; 4. Centrifugar 3400 rpm por 15 segundos ou 1000 rpm por 1 minuto; 5. Ressuspender o "boto" de GV, por agitao delicada e examinar para aglutinao macroscpica; 6. Anotar os resultados
117

A reao das hemcias com o controle de Rh0 deve ser: A) positiva B) Negativa. C) positiva se o Rh0 for negativo D) negativa se o Rh0 for negativo E) positiva se o Rh0 for positivo
Provas anteriores

Se a reao com o soro-controle de Rh for positiva, a tipagem Rh considerada invlida.

118

TCNICA DO COOMBS DIRETO (CD)

1. Coletar a amostra de sangue 2. Preparar uma suspenso de hemcias a 5%. 3. Colocar uma gota desta suspenso em um tubo de hemlise. 4. Lavar trs vezes com salina fisiolgica. 5. Adicionar 2 gotas da antiglobulina humana poliespecfica (anti-IgG e anti-C3d) 6. Centrifugar 3400 rpm 15 segundos 7. Ressuspender suavemente o boto de hemcias 8. Observar a presena ou no de aglutinados 9. Anotar os resultados
119

As principais indicaes para a prova de Coombs direta incluem: a) deteco de certos antgenos fracos nas plaquetas; b) diagnstico de anemia hemoltica em adultos c) demonstrao de anticorpos anti-B; d) deteco de certos antgenos fracos nas plaquetas; e) deteco de anticorpos incompletos, no soro, para triagem pr-transfusional.

Provas anteriores

120

 As hemcias do sangue devem ser lavadas em soro fisiolgico pelo menos trs vezes antes da adio do reagente AGH para: A) Eliminar as clulas hemolisadas B) remover traos de globulinas sricas livres C) neutralizar o excesso de reagente D) aumentar a ligao do antgeno ao anticorpo

Provas anteriores

121

As principais indicaes para a prova de Coombs indireta incluem: a) deteco de anticorpos desconhecidos no soro, para triagem pr-transfusional; b) deteco de anticorpos no soro, para finalidades de titulao; c) deteco de certos antgenos fracos nas plaquetas; d) demonstrao de auto-anticorpos do tipo crioaglutinina;
Provas anteriores

122

Referncias bibliogrficas
BAIN, Barbara J. Clulas Sanguneas: Um guia Prtico. Artmed, 3a ed., Porto Alegre, 2004. BLOODLINE - Site de Hematologia (www.bloodline.net) CARVALHO, William de Freitas. Tcnicas mdicas de hematologia e imunohematologia. 7a ed. Coopmed: Belo Horizonte, 1999 FAILACE, R. Hemograma. Manual e interpretao. 3a ed. Editora Artes Mdicas Porta Alegre, 1995

HENRY, John Bernard. Diagnsticos clnicos e conduta teraputica por exames laboratoriais.
Manual Sistema Vacutainer Pequeno guia para coleta de sangue. Becton-Dickinson