HISTOLOGA HUMANA

- Concepto.
- Clasificacin. - Breve historia - Tcnicas histolgicas. - Microscopios y microscopa.

DR HERBERT DANILO ANGELES VILLANUEVA

SISTEMA DE CALIFICACIN

TRES NOTAS DE PROMEDIOS PARCIALES (30 % CADA UNA)+ NOTA DE INVESTIGACIN (5 %)+ NOTA DE PROYECCIN A LA COMUNIDAD (5 %)

PROMEDIO FINAL = [1ET + (1EP+1PF)] = 30%

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PRIMER EXAMEN TERICO (1ET) PRIMER EXAMEN PRCTICO (1EP) PROMEDIO DE FOLDER (1PF)

Histologa
La Histologa (del griego : hists "tejido" y logos "estudio") es la ciencia que estudia todo lo referente a los tejidos orgnicos: su estructura microscpica, su desarrollo y sus funciones.
La Histologa se identifica a veces con lo que se ha llamado anatoma microscpica, pues su estudio no se detiene en los tejidos, sino que va ms all, observando tambin las clulas interiormente y otros corpsculos, relacionndose con la bioqumica y la citologa. Es la rama de la anatoma que estudia los tejidos de animales y plantas. La histologa se ha desarrollado en gran medida con el avance de la microscopa electrnica, la inmuno histoqumica, la tcnica de hibridacin in situ. Las tcnicas recientes sumado a las nuevas investigaciones dieron paso al surgimiento de la biologa celular.

La histologa se clasifica en:

Histologa animal e Histologa vegetal, cada una con contenidos y tcnicas diferenciados.

En la actualidad los tejidos animales (que incluyen naturalmente los humanos) estn divididos en 4 grupos fundamentales:
Tejido epitelial. Tejido conectivo (que incluye varios tipos tisulares, como el seo). Tejido muscular. Tejido nervioso.

Historia
Los estudios histolgicos fueron posibles a partir del ao 1600, cuando se incorpor el microscopio a los estudios anatmicos. Marcello Malpighi es el fundador de la Histologa.

Anton Van Leeuwenhoek, naci en Delft, Pases Bajos, el 24 de Octubre de 1632. Marc un hito en la historia de la Microbiologa. Este devoto calvinista, cuya motivacin naca del afn por descubrir la verdad revelada en la creacin, puso en conocimiento de la ciencia algunas de las maravillas de la naturaleza, hasta ese entonces ocultas en la pequeez invisible al ojo humano.

La necesidad de contar con mejores lupas para controlar la calidad de las telas, lo que impulsara a Leeuwenhoek desarrollar un artefacto que result en un microscopio. Pudo observar las fibras musculares, vasos sanguneos (1668), e incluso lleg a describir y dibujar con precisin algunas estructuras como los glbulos rojos (1674) y espermatozoides humanos (1679). La posibilidad de visualizar a los vasos sanguneos, eritrocitos y otros elementos de la sangre

Estudio de los animculos. As es como los describi, dibuj e incluso clasific en tres tipos: bacilos, cocos y espirilos.

En 1665 se descubre la existencia de unidades pequeas dentro de los tejidos y reciben la denominacin de clulas. En 1830, se logra distinguir el ncleo celular. En 1838 se introduce el concepto de la teora celular.

En los aos siguientes, Virchow introduce el concepto de que toda clula se origina de otra clula (omnis cellula ex cellula).

EL MICROSCOPIO COMPUESTO
Haz de luz que tiene inicio en la fuente luminosa lmpara. Es concentrada y luego proyectada hacia el objeto a examinar. Posteriormente la imagen es dirigida hacia la retina siendo aumentada previamente la imagen por los lentes objetivos y el ocular.

Cmo se observan las clulas y los tejidos?

EN ESTUDIOS CITOLGICOS
Biopsias por aspiracin con aguja fina (BAAF), Improntas y Biopsia por Puncin Aspiracin - con aguja gruesa- (BIPA) y Aspiracin de Mdula sea. Las clulas son fijadas con alcohol al 95 %, o solucin alcohlica de ter. Luego las coloreamos y las montamos para finalmente observarlos a tras luz. Los tejidos para ser observados a tras luz deben ser cortados de 3 a 5 milsimas de milmetro (3 a 5 m). Por este motivo podemos:

1.- Congelarlo y cortarlo, usando un criostato. 2.- Impregnarlos en parafina previamente fijados con formaldehdo al 10%, y luego cortarlos en un micrtomo. 3.- Impregnarlos en resinas tipo epoxi: Epon o Araldita previamente fijados con glutaraldehdo y cido smico, y luego ultra cortarlos con ultramicrtomo.

Si usamos parafina (la ms usada).

Cmo hacemos ingresar al intracelular la parafina, si esta es slida a temperatura ambiente e insoluble en agua? Usamos solventes intermedios:

El tejido fijado en solucin acuosa de formol al 10 %, es DESHIDRATADO con alcoholes.

Luego usamos el Xilol para ACLARAR los tejidos. Finalmente los tejidos son embebidos por la parafina calentada a 60 C, y como el punto de ebullicin del Xilol es de 23 C, la parafina IMPREGNA los tejidos. Posteriormente el tejido en montado en un bloque, enfriado y cortado. Luego se colorean. y finalmente, se montan en la lmina porta objetos y se cubren y pegan con Entelln o Blsamo de Canad.

TCNICAS USADAS EN HISTOLOGA

El Microscopio electrnico de transmisin (MET), se basa en un sistema de luces y sombras. Se fundamenta en que los metales pesados como el Osmio, afn por las protenas, impide el paso del haz de electrones (sombras).

MICROSCOPA ELECTRNICA DE BARRIDO

A la izquierda, ultra microfotografa electrnica de Transmisin. A la derecha, ultra microfotografa electrnica de Barrido.

Tcnicas de coloraciones
La coloracin ms comn en la Heatoxilina Eosina, pudiendo usarse tambin la Giemsa, Leishman, Azul de Metileno, FucsinaResorcina, Coloraciones de Plata o Argnticas, fosfotungsticas, Tricrmica de Mallory, Hematoxilina Frrica, etc.

Una vez de obtenidos los cortes, Cmo podramos ver los secretos escondidos en las partes de las clulas que conforman los tejidos?. Para eso usamos la HISTOQUMICA, INMUNOCITOQUMICA, INMUNOHISTOQUMICA, INMUNOFLUORESCENCI A, P.C.R. (Reaccin en cadena de la polimerasa). Flechas: PAS ( + ).

Coloracin de PAS que resalta la mucina de las clulas caliciformes.

COLORACIN ARGNTICA Utiliza plata en su procesamiento.

Osificacin endocondral
El color negro sirve para observar los depsitos de Calcio.

COLORACIONES ENZIMTICAS Coloracin de Gomori Siendo la presencia de grnulos de en el polo luminal de las clulas del Tbulo contorneado proximal.

El Osmio, es un metal pesado que fija a las protenas presentes en las enzimas de los lisosomas.

INMUNOHISTOQUMICA
El Antgeno Carcino embrionario (CEA125), tie de color marrn el citoplasma de las clulas neoplsicas malignas que expresan dicha protena. As pueden encontrarse entre las clulas y tejidos sanos este tipo de cncer de colon.

El mtodo de purificacin proteica por ULTRA CENTRIFUGACIN selectiva.

La REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA o PCR

Se basa en que a partir del hallazgo de una patologa visible (en nuestro caso papiloma virus humano), queremos reconocer que grupo es el infectante, y descartar as la capacidad maligna del grupo viral de este papiloma.

INMUNOLUORESCENCIA

Utiliza un cuerpo fluorescente, el cual se adhiere a un elemento especfico. Requiere un microscopio especial.

Inmunofluorescencia indirecta a la izquierda. A la derecha, neuronas marcadas por el mtodo de inmunofluorescencia directa.

Los mtodos antes mencionados ayudaron a desentraar los misterios de la clula y sus organelas. Ms aun, de las organelas se estudian actualmente molculas aportando conocimiento a travs de la Biologa Molecular.

Esquema que sirve para entender que en nuestro curso, entender de forma tridimensional es muy importante. El corte transversal, el corte oblicuo, el corte longitudinal, etc. Se presentar segn cmo haya sido orientado el tejido en taco para ser cortado.