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MODULO XI.
cierta concentracin de sustrato para operar, a menudo no parecen tener sustrato suficiente cuando ste se calcula por clula.
En clulas eucariticas, la compartimentalizacin permite a las enzimas asociarse espacialmente en las estructuras membranosas, que pueden dar concentraciones locales de sustrato muy altas. Otros factores necesarios para la actividad como los iones metlicos, co-enzimas, pH y temperatura
2.Control alostrico. Enzimas Alostricas (Alostrico = diferentes formas). TGeneralmente son constitutivas TEstructura cuaternaria de Subunidades Mltiples
Cada subunidad cataltica tiene su propio sitio activo, puede unir ms de una molcula TCambian de forma activa a inactiva como resultado de la unin del sustrato al sitio activo y otras molculas en el sitio regulador. TEl cambio en la velocidad de reaccin con concentraciones aumentantes de sustrato es una curva en S . TNo siguen la cintica MichaelisMenten. 1) Homotrpicas: El sustrato puede actuar como efector positivo sobre la velocidad de la reaccin enzimtica 2) Heterotrpicas:La inhibicin o estimulacin es causada por sustancias de origen natural que no sea el sustrato. 3) Mixtas: Algunas enzimas muestran ambas caractersticas.
Sistema por el cual las enzimas reguladoras con comportamiento alostrico controlan varias vas. Forma ms simple, retroinhibicin o inhibicin por producto final. Estas enzimas alostricas se localizan en o cerca del comienzo de una va enzimtica y que son inhibidas o estimuladas por el producto final de esa va. Muchos de estos tipos de control han sido investigados en la sntesis de aminocidos en E. coli y se pueden identificar en muchos sistemas. A. Retroinhibicin simple. Sntesis de Isoleucina: Treonina Desaminasa TREONINA Treonina desaminasa Acido -cetobutrico Acido -auto--hidroxibutrico Acido ,-dihidroxi--metilvalrico Acido -ceto--matilvalrico
ISOLEUCINA
Acido shikmico 5 P Acido 3-enolpiruvilshikmico 5 P cido corsmico 2.Corismato mutasa TyrA,PheA Acido prefnico Acido fenilpirvico FENILALANINA TIROSINA 3. Antranilato cintasa TrpE Acido antranlico TRIPTOFANO
forma (isoenzima).
Cada isoenzima es inhibida por cada uno de los productos finales. Ejemplo: E.coli control de la lisina, metionina y la isoleucina sobre las isoformas de asparto cinasa, que se presenta en tres formas, las cuales son afectadas en forma separada.
Aspartato
1 2 3
Homoserina-P
METIONINA
LISINA
Homoserina-P
TREONINA
ATP
c arg a energtica
5. Modificacin de la enzima. Las enzimas pueden activarse o desactivarse, a menudo por otras enzimas, por modificaciones ya sea reversibles o irreversibles
Modificacin irreversible. Proteinasas: Algunas enzimas se sintetizan en una forma inactiva (zimgeno). ejemplo quimotripsingeno, la forma inactiva de la quimiotripsina,
Modificacin reversible. Fosforilasa cinasa: inactivas a activas, fosforilacin de un residuo especfico de serina. Bajo diferentes condiciones, el grupo fosfato es removido de la enzima activa por una segunda enzima especfica, fosforilasa fosfatasa, para producir la enzima inactiva.
Inhibicin competitiva El inhibidor es una molcula que tiene una forma similar a la del sustrato pero no reacciona de la misma forma que ste, en su lugar bloquea la actividad de la enzima
Inhibicin no competitiva El inhibidor es una molcula que se une a un sitio diferente del sitio activo e inhibe el reconocimiento
Regulacin de la expresin gentica en los procariotes. Control en la sntesis (nmero) de molculas de la enzima
1. Control de la transcripcin. 1a. Al inicio Por unidades sigma alternativas 1b. Por protenas reguladoras Control negativo con induccin: operon lac Control ne gativo con represin:opern trp Control positivo con induccin: represin catablica Atenuacin de la transcripcin 2. Control traduccional.
2a. Sntesis de las protenas ribosmicas. 2b. RNA antiparalelo 3. Sistemas reguladores globales 4. Degradacin de la enzima. .
Regulacin de la expresin gentica en los procariotes. Control en la sntesis (nmero) de molculas de la enzima
Regulacin al inicio de la transcripcin por unidades sigma alternativas
Subunidad sigma (s)
s (s ) s (s ) s (s ) s (s )
s (s )
28 F
70
54
38
32
24
(s )
202
RpoE
18
(s
Fecl
173
fecl
Un Opern es un grupo de genes estructurales cuya expresin est regulada por los mismos elementos de control (promotor y operador) y genes reguladores
Los genes estructurales: Se trata de los genes cuya expresin est regulada, suelen
contener varios genes estructurales, son polignicos o policistrnicos. Algunos operones bacterianos tienen un solo gene estructural. Los operones eucariticos suelen contener un slo gen estructural siendo monocistrnicos.
El promotor (P): es un elemento de control, es una regin del ADN con unas secuencias que
son reconocidas por la ARN polimerasa para comenzar la transcripcin. Se encuentra inmediatamente antes de los genes estructurales.
El operador (O): otro elemento de control, es una regin del ADN con una secuencia que es
reconocida por la protena reguladora, se sita entre la regin promotora y los genes estructurales.
El gen regulador (i): secuencia de ADN que codifica para la protena reguladora que reconoce
la secuencia de la regin del operador. El gen regulador est cerca de los genes estructurales del opern pero no est inmediatamente al lado. Abreviadamente se le denomina gen i.
Protena reguladora: protena codificada por el gen regulador. Est protena se une a la regin del operador. Inductor: sustrato o compuesto cuya presencia induce la expresin de los genes.
http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Operon/Operon.htm
Regulacin de la expresin gentica a nivel de transcripcin en los procariotes. Participacin de protenas reguladoras.
Opern: secuencia de nucletidos divididos en dos regiones, reguladora y estructural. Su expresin permite una funcin fisiolgica ya sea anablica o catablica.
Regin reguladora
R
Gen regulador
Genes estructurales
O P
Promotor
Operador
Elementos de control
Promotor
Operador
Protenas reguladoras
Elementos que intervienen en la regulacin de la expresin gnica en bacterias. Elementos del Opern.
Molculas difusibles
Efectores
Inductores
Con base en la actividad de la protena reguladora, los operones pueden estar sujetos a dos tipos de control general sobre la transcripcin
Control positivo: Se dice que un sistema est bajo control positivo cuando el producto del gen regulador activa la expresin de los genes, acta como un activador. Control negativo: se dice que un sistema est bajo control negativo cuando el producto del gen regulador reprime o impide la expresin de los genes, acta como un represor.
Con base en el efecto del sustrato y el producto final, los operones se dividen en sistemas inducibles y sistemas represibles.
Sistemas inducibles: el sustrato sobre el que va a actuar la enzima provoca la sntesis del enzima, se le denomina induccin positiva. Al
compuesto que desencadena la sntesis del enzima se le denomina Inductor. Estn relacionados a sistemas catablicos. ejemplo, efecto de galactsido sobre la galactosidasa en E. coli , opernes arabinosa,maltosa.
Sistemas represibles (represin por producto final): el producto final de la reaccin o de la va metablica que cataliza la enzima, impide la sntesis de la misma. Este fenmeno recibe el nombre de induccin negativa. El producto final que impide la sntesis del enzima se le denomina correpresor. El gen regulador sintetiza una protena inactiva,aporrepresor Estn relacionados con procesos de sntesis o anablicos, por ejemplo el
opern triptfano y el opern histidina.
CONTROL NEGATIVO DE EL OPERN LACTOSA es un sistema inducible que est bajo control negativo. la protena reguladora, producto del gen regulador i, es un represor que impide la expresin de los genes estructurales en ausencia del inductor. El inductor del sistema es la lactosa. Es reconocido por la protena represora la cual se inactiva
www.acsu.buffalo.edu/~jbarnard/LacOperonII.html
El opern de arabinosa: Ellis Englesberg: la expresin esta regulada de manera positiva. Mecanismo de regulacin. Cuando no hay arabinosa en el medio: AraC se une simultaneamente a los sitios araI y araO2. El DNA es doblado (looped). Se bloquea el acceso al promotor PBAD
En presenica de la arabinosa
Ara + protena AraC, cambia de forma y de afinidad reconoce a araI en vez de araO2. Si tampoco hay glucosa, CRP se une a su sitio entre araO1 y araI ayudando a deshacer el loop en el DNA y ayuda a que AraC se une a araI: El opern ara muestra tanto control positivo como negativo. Muestra una funcin diferente para CRP. Tambin muestra que puede actuar como un switch cuya actividad se altera radicalmente despus de la unin de una pequea molcula. Arabinosa es otro azucar que es usado solo cuando no hay glucosa en el medio.
AraC tambin evita su propia expresin, es un autorregulador de su propia expresin, tiene sentido, no se requiere sobre expresar AraC. Si su concentracin decae a niveles muy bajos, la transcripcin de araC se reasume hasta que la cantidad de AraC es suficiente para evitar ms transcripcin de PC otra vez.
Mutante i Q: mutacin en el promotor del gen regulador que codifica para la protena represora (iQ): no aparece protena represora y siempre se estn
expresando los genes del opern lactosa tanto en ausencia como en presencia del inductor. mutante de tipo constitutivo.
que codifica para el extremo amino terminal, es la encargada de reconocer la regin operadora. La protena mutante se une al inductor (al IPTG) pero no se une al operador, es dominante sobre la i+ en los diploides parciales (i+/i-d). En los diploides parciales la protena represora mutante no se une a
Las mutaciones i-d e i S en los diploides parciales se explica mejor considerando que la protena represora del opern lac. es un tetrmero (protena constituida por cuatro cadenas polipptdicas idnticas con un peso molecular cada una de 38.000). En el diploide parcial (i+/iS) ,los polipptidos mutantes estaran unidos a las regiones operadora de forma permanente impidiendo la transcripcin.
En el diploide parcial (i+/i-d) los polipptidos normal y mutante se unen al azar para formar tetrmeros, de manera que la mayora de los tetrmeros tienen al menos un polipptido mutante (15/16) y solamente una pequea fraccin de los tetrmeros tiene todos los polipptidos normales (1/16), por tanto, la mayora de los tetrmeros no son capaces de unirse a las regiones operadoras y se transcribiran los genes estructurales.
alteracin en la secuencia de bases nitrogenadas de la regin del Operador, la protena reguladora producto del gen i ya no sea capaz de unirse al operador, la regin promotora queda asequible para la ARN polimerasa y se produce la transcripcin de los genes estructurales en ausencia de inductor (lactosa).
El estudio de diferentes mutantes del operador ha permitido determinar que el operador es una regin de 17 a 25 nucletidos situada justo antes del gen z y despus del promotor. Esta regin muestra una enorme especificidad por la protena represora.
La obtencin de mutantes que afectaban tanto a los genes estructurales, a los elementos de control (promotor y operador) y al gen regulador, permitieron dilucidar el funcionamiento del opern lactosa.
z+
NO
y+
NO
a+
NO
z+
SI
y+
SI
a+
SI
i+ p o z+y+a+
Mutantes constitutivos
Genotipo i- P OC z+y+a+ i+P OC z+y+a+
Expresin de los genes estructurales del Opern lactosa Ausencia de inductor (Sin lactosa)
z+
SI SI
y+
SI SI
a+
SI SI
z+
SI SI
y+
SI SI
a+
SI SI
parciales o merocigotos. permiti conocer con ms precisin la naturaleza y mecanismo de algunos elementos de control.
Bacteria diploide parcial o merocigoto. tiene parte de sus genes en dos dosis .
habitualmente en las bacterias los genes estn en una sola dosis, haploides. Es posible mediante conjugacin entre una donadora F+ y una receptora F-, obtener bacterias descendientes diploides parciales o merocigotos. Estos diploides parciales son inestables. Las bacterias F' tienen en el factor sexual (plsmido) parte del cromosoma principal bacteriano. Se construyeron F' que tenan incorporado exclusivamente genes del opern lactosa. Estas F' tienen dos veces los genes del opern lactosa, una en el cromosoma principal y otra en el factor F'. Las primeras mutantes aislados por Lederberg y cols y afectaban a los genes estructurales (z, y, a). Se dedujo que estos genes estaban juntos y en el orden z-y-a. Los mutantes en estos genes se denominan z-, y- e a- y ,dan lugar a alteraciones en la estructura de las enzimas codificadas por estos genes. Jacob y Monod aislaron bacterias mutantes constitutivas i- y OC que afectan al gen regulador (i) que lleva informacin para la protena reguladora y a la regin operadora (O), respectivamente.
En estos diploides parciales, se ha comprobado: El operador constitutivo es dominante en posicin CIS, es decir, ejerce su efecto solamente sobre los genes estructurales que estn en su misma molcula de ADN que la mutacin del operador, pero no acta sobre los genes estructurales de otra molcula de ADN. Esto significa que el operador es una secuencia de bases en el ADN que no codifica para ninguna molcula difusible. Esto explica el porque en el siguiente diploide parcial i+ P O z+y+a+/ i+ P OC z+y+a+ tanto en ausencia como en presencia de lactosa se produce la expresin de los tres genes estructurales del opern.
En los diploides parciales con un gen regulador normal y un gen regulador mutante constitutivo, es decir, en baterias diploides parciales i+/i-, el gen regulador normal i+ es dominante en posicin TRANS. ejerce su efecto sobre los genes estructurales de la misma molcula de ADN en que est la mutacin del gen regulador y tambin sobre los genes estructurales de otra molcula de ADN diferente. Por tanto, el gen regulador codifica para una protena o producto difusible que puede ejercer su efecto en diferentes molculas de ADN. El diploide parcial i+P O z+y+a+/ i- P O z+y+a+ en ausencia de lactosa no hay expresin de los genes estructurales mientras que en presencia de lactosa si se expresan. Esto se debe a que la protena represora normal producida por el gen i+ al ser difusible se puede unir a ambas regiones operadoras.
En presencia de triptofano ste acta como correpresor y acticva al aporrepresor el cual ahora reprime la transcipcin
http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Operon/Operon.htm
REGULACIN POR ATENUACIN DE LA TRANSCRIPCIN EL OPERN TRIPTFANO C.Yanofsky. mutantes en trpR producan mRNA an en presencia de triptofano la eliminacin del triptofano en el medio de cultivo incrementa la produccin de mRNA incluso sin protena reguladora activa. Demostr que estos mutantes tenan una delecin entre el operador y el primer gen estructural. aisl el ARN-m multignico del opern trp y secuenci la regin del extremo 5 encontrando una regin lder del 160 bases que no se traduce a aminocidos. Esta secuencia se encuentra antes del primer triplete que se transcribe
http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Operon/Operon.htm
REGULACIN POR ATENUACIN DE LA TRANSCRIPCIN EL OPERN TRIPTFANO C.Yanofsky. analiz la secuencia correspondiente en el mutante que siempre produce niveles mximos de trp, detect una delecin de una 30 bases que se extenda desde la posicin 130 a la 160 llam atenuador a la regin del ADN inactivada por la delecin, ya que su presencia conduce aparentemente a disminuir la tasa de transcripcin.
http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Operon/Operon.htm
C.Yanofsky. La regin lder del opern triptfano se caracteriza por tener una sede de reconocimiento para los ribosomas y los codones de 14 aminocidos, entre ellos dos residuos de triptfano. La siguiente regin puede formar una estructura secundaria palindrmica en forma de lazo u horquilla.
http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Operon/Operon.htm
Porcines que se traducen de las regiones lder de los operones de Fenilalanina (a) e Histidina (b)
http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Operon/Operon.htm