PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD

PRUEBA DE LISS

PRUEBA DE LISS
Para requerir una ptima transfusin actualmente se requiere de aceptaciones inmunolgicas receptor donante, ya que la transfusin de sangre o la de sus componentes celulares de un donante a un receptor, es una forma de transplante.

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Pruebas de Compatibilidad
Seleccionar el componente con el mas mnimo riesgo. Buscamos anticuerpos libres en suero.

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Pruebas cruzadas.

Es una prueba inmunohematolgica cuyo principio es la hemaglutinacin y su objetivo es evitar la destruccin eritrocitaria en un receptor.

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Sensibilizacin: Es el proceso mediante el cual el anticuerpo se une al antgeno en la superficie del hemate.

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Aglutinacin: tiene lugar cuando el anticuerpo fijado se une a los hemates adyacentes formando grumos.

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La prueba de LISS es utilizada para reducir la fuerza inica del medio de reaccin en los procedimientos de deteccin e identificacin de anticuerpos y en las pruebas de compatibilidad. La presencia de este reactivo refuerza la interaccin antgeno - anticuerpo durante la incubacin.

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Cuando los hemates estn en suspensin en una suspensin salina de potencial inico bajo (Liss), la nube de cationes que rodea los hemates es menos densa que si estos estn en suspensin en suero salino isotnico normal.

Solucin salina isotnica.

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La concentracin reducida de cationes alrededor de los hemates, permite a las molculas de anticuerpo cargadas positivamente, tener mas fcil acceso a los lugares antignicos de la membrana eritrocitaria, aumentando as la tasa de sensibilizacin.
Solucin de Liss.

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La tasa de sensibilizacin aumenta cuando los hemates estn en suspensin con la solucin de Liss, la aglutinacin de estos hemates sensibilizados se ve desfavorecida por un aumento del potencial zeta.

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La densidad de la nube inica alrededor del hemate disminuye con solucin Liss, por lo tanto el espesor de la nube aumenta por ser menor la concentracin de iones en el medio.

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Lo anterior se traduce en un aumento del potencial zeta y por tanto la aglutinacin se hace mas difcil; para aumentarla es preciso separar la solucin Liss despus de la incubacin, lavando los hemates con solucin isotnica normal.

Lavado con sol. isotnica.

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Cuando la tcnica de la antiglobulina se efecta con los hemates del donante suspendidos en solucin salina normal es preciso un tiempo de incubacin de 30 a 60 min. para lograr un mximo de fijacin de los anticuerpos a los antgenos de los hemates.

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Si los hemates se suspenden en una solucin salina de bajo potencial inico (Liss), el periodo de incubacin puede reducirse de 5 a 10 minutos.

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Material y equipo:

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Material biolgico:

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Reactivos:

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Tcnica:
1.- Lavar los eritrocitos: Separar el suero del paquete de glbulos rojos. Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo de ensayo y agregarle solucin salina. Centrifugar y decantar. Repetir este proceso 3 veces.

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2.- Realizar la Prueba de LISS: Enumerar los tubos. Poner dos gotas de LISS en cada tubo, agregar una gota de eritrocitos lavados y al 3 - 5%, segn el nmero de tubo correspondiente. Mezclar y centrifugar un minuto, decantar el sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar el exceso del reactivo. Poner nuevamente 2 gota de LISS, resuspender por agitacin, agregar 2 gotas de suero problema, mezclar, incubar 15 minutos a 37 C. centrifugar 15-20 seg. A 3500 R.P.M. Anotar los resultados.

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3.- A las pruebas negativas realizar Coombs: Lavar 3 veces las clulas, agregar suero de Coombs, centrifugar 30 seg. Leer aglutinaciones y anotar resultados.

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INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS La hemlisis o la aglutinacin representan un resultado positivo e indican la presencia de una reaccin antgenoanticuerpo. Los resultados negativos no se vera aglutinacin o hemolisis.