INSTITUTO TECNOLOGICO DE TUXTLA GUTIERREZ

MICROBIOLOGIA GENERAL UNIDAD 4 METABOLISMO MICROBIANO ALUMNOS: ALVAREZ ALVAREZ EDITH DEL ROSARIO BECERRA PANIAGUA DULCE KRISTAL GARCIA CRUZ AZALEA GEORGINA LIRA TECO JESUS ERICK

4. METABOLISMO MICROBIANO
1.- Formas de obtencin de nutrientes 2.- Reacciones de hidrlisis y de sntesis. 3.-Procesos: *Respiracin *Fermentacin alcohlica *Fotosntesis *Digestin anaerobia, *Produccin de metabolitos

METABOLISMO MICROBIANO
El metabolismo microbiano es el conjunto de procesos

por los cuales un microorganismo obtiene la energa y los nutrientes (carbono, por ejemplo) que necesita para vivir y reproducirse. Los microorganismos utilizan numerosos tipos de estrategias metablicas distintas y las especies pueden a menudo distinguirse en base a estas estrategias. Las caractersticas metablicas especficas de un microorganismo constituyen el principal criterio para determinar su papel ecolgico, su responsabilidad en los ciclos biogeoqumicos y su utilidad en los procesos industriales.

Los distintos tipos de metabolismo microbiano se pueden clasificar segn tres criterios distintos: 1. La forma la que el organismo obtiene el carbono para la construccin de la masa celular: Auttrofo. El carbono se obtiene del dixido de carbono (CO2). Hetertrofo. El carbono se obtiene de compuestos orgnicos (glucosa, por ejemplo). Mixtrofo. El carbono se obtiene tanto de compuestos orgnicos como fijando el dixido de carbono. 2. La forma en la que el organismo obtiene los equivalentes reductores para la conservacin de la energa o en las reacciones biosintticas: Litotrofo. Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos inorgnicos. Organotrofo. Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos orgnicos. 3. La forma en la que el organismo obtiene la energa para vivir y crecer: Quimiotrofo. La energa se obtiene de compuestos qumicos externos. Fototrofo. La energa se obtiene de la luz.

IV.1.- Formas nutrientes

de

obtencin

de

Los microorganismos deben tomar del ambiente las sustancias para crecer y generar energa. A estas sustancias se las llama nutrientes.

 Algunos nutrientes son empleados como bloques en la

construccin de los constituyentes celulares, mientras que otros sirven como fuente de energa. Los microorganismos toman esos nutrientes del lugar donde se desarrollan, p. ej.: el suelo, la leche, un animal, una planta, etc.

 Cuando

queremos hacer crecer un microorganismo o grupo de microorganismos en laboratorio, hacemos un cultivo de estos microorganismos en condiciones artificiales.

 (Para su crecimiento se usan medios de cultivo: conjunto

de sustancias nutritivas y condiciones determinadas que permiten el crecimiento y multiplicacin de un microorganismo o grupo de microorganismos.) Los medios de cultivo deben contener los nutrientes necesarios para el crecimiento del o los microorganismos para el cual fue creado. Los microorganismos son muy diversos en cuanto a sus requerimientos nutritivos.

 Para construir un medio de cultivo para un organismo o grupo dado, deben

conocerse las necesidades nutritivas de los mismos. Las clulas microbianas tienen entre un 80% a 90 % de su peso en agua, por lo que ste es un nutriente principal. El peso seco restante contiene una serie de elementos en diversas proporciones, de los cuales los principales son: H, O, C, N, P y S. Tabla 2. Tambin se requiere una cantidad mucho menor de K, Mg, Ca, Fe, Mn, Co, Cu, Mo y Zn. En la siguiente tabla vemos qu funcin cumple cada uno de los constituyentes celulares. Algunos de estos elementos (Mn, Co, Cu, Zn, Mo) se los requiere en pequesimas cantidades y se los denomina elementos traza o micronutrientes.

Las bacterias son seres vivos y estn compuestas al igual que las clulas eucariotas por protenas, polisacridos, lpidos, cidos nucleicos, entre otros. Estas molculas a su vez forman parte de estructuras celulares ms complejas, como por ejemplo la pared celular y la membrana citoplasmtica. Una caracterstica de los seres vivos es la capacidad para sintetizar sus propios constituyentes a partir de nutrientes que toman del medio externo.

CLASIFICACIN NUTRICIONAL BSICA

 El crecimiento bacteriano se define como el aumento

ordenado de todos los constituyentes qumicos de la clula. Se trata de un proceso complejo, que supone la replicacin de todas las estructuras y componentes celulares a partir de los nutrientes exgenos

Crecimiento bacteriano en Agar

El conocimiento de la fisiologa y del metabolismo bacteriano tiene algunas aplicaciones prcticas:

- Permite conocer el modo de vida y el hbitat de diferentes especies bacterianas. El ser humano actuando como huesped por ejemplo, ofrece una variedad de nichos ecolgicos que se diferencian entre s por aspectos fsicos y qumicos (temperatura, concentracin de O2, pH, presin osmtica, etc.) en los cuales pueden crecer y multiplicarse distintas especies bacterianas, de acuerdo a sus requerimientos nutricionales.

- Permite formular medios de cultivo para el aislamiento e identificacin de los patgenos participantes. - Desde el punto de vista teraputico nos permite conocer y entender el modo de accin de algunos antimicrobianos que bloquean una va metablica o la sntesis de alguna macromolcula esencial para la bacteria.

SUMINISTRO ENERGETICO
Las clulas bacterianas, poseen una gran variedad de

sustancias como fuente de energa, ilimitada I. Las bacterias necesitan de un aporte energtico para desarrollarse. II. El xito evolutivo de las bacterias se debe en parte a su versatilidad metablica. III. Todos los mecanismos posibles de obtencin de materia y energa podemos encontrarlos en las bacterias.

En los seres vivos, la utilizacin de la energa potencial contenida en los nutrientes se produce por reacciones de oxido-reduccin.

IV.2.- Reacciones de hidrlisis

ATP: Adenosina Trifosfato Su hidrlisis proporciona de forma directa e inmediata Energa Libre para impulsar reacciones bioqumicas endergnicas.

ATP Existen enzimas especficas que facilitan la hidrlisis del ATP ATP tiene un potencial de transferencia de grupos fosfato intermedio, por lo cual puede transportar grupos fosforilo desde compuestos con mayor E a compuestos con menor E.

IV.3.-Procesos: Respiracin Aerobia

La respiracin puede definirse como el proceso metablico productor de energa en el que los donadores de electrones son compuestos orgnicos y el aceptor final de electrones es el oxgeno molecular. Una caracterstica distintiva de la mayora de los procesos respiratorios es la presencia en la clula de un equipo de enzimas transportadoras, que constituyen la cadena respiratoria de transporte de electrones.

La gluclisis es una va comn para la produccin de energa puesto que ste es un proceso activo, tanto cuando hay presencia de oxgeno ( Gluclisis aerbica), como cuando no hay oxigeno disponible en la clula (gluclisis anaerbica). Esta caracterstica de la gluclisis es crucial porque es la que permite que las clulas sobrevivan y realicen trabajo, durante un determinado perodo de tiempo, en condiciones anaerbicas o en situaciones " anxicas. Cuando termina la gluclisis la reaccin puede seguir en dos vas : La respiracin aerbica, en presencia de oxgeno, o la respiracin anaerbica (fermentacin), en ausencia de oxgeno

La glucosa es la fuente de energa ms importante para la mayor parte de las clula microbianas. Sin embargo, otras sustancias como lpidos y protenas, pueden utilizarse como fuentes alternativas

Almidn Glucosa 6C

Azcares complejos

Glicerol 3C Gliceraldehdo 3 P 3C Aminocidos 3C cido Lctico 3C cido pirvico 3C cidos Grasos

RUTAS DE OTROS COMPUESTOS EN LA RESPIRACIN AERBICA

Aminocidos 2C

Acetil CoA 2C

Alcohol 2C

Otros aminocidos de ms de 3C

Ciclo de los cidos tricarboxlicos

La energa que se libera durante la oxidacin completa de un compuesto orgnico (respiracin), es mucho mayor que la que procede su fermentacin. El rendimiento total de ATP por mol de sustrato respirado es de 38 ATP; mientras que en la fermentacin, es de 2 ATP.

C6H12O6 + 6 O2
Enzimas

6CO2 +6 H2O+Energa (38 ATP)

G = -686 Kcal

La definicin ms precisa de respiracin aerbica es: la serie de reacciones que suministran energa, en las cuales el oxigeno es el aceptor final de electrones. La respiracin aerbica realizada por las clulas microbianas o por preparaciones de tejidos puede medirse al registrar el grado de consumo de oxigeno.

Respiracin Aerobia.

El concepto de respiracin se deriva del clsico proceso respiratorio de Lavoisier, segn el cual los organismos vivos consumen oxgeno de un modo anlogo a la combustin de la materia orgnica. De hecho, muchos microorganismos llevan a cabo dicho proceso en el cual el oxgeno molecular se convierte en agua en tanto que algn sustrato orgnico desaparece el medio y todo su carbono se recupera como CO2. El desarrollo de muchos microorganismos en cultivo puro en un medio con glucosa se realiza de acuerdo con la estequiometra:

Respiracin Aerobia. Metabolismo energtico ms eficiente. Eucariotas, mayora de bacterias y 50 % de archaeas

El mecanismo de la respiracin aerobia consiste de una va de reacciones enzimticas de las cuales los principales productos de la respiracin anaerobia son oxidados para proporcionar energa, agua y bixido de carbono. Aunque el oxgeno es un reactivo solamente en el paso final del proceso aerobio, es una reaccin indispensable y el mecanismo podra cesar si el oxgeno fuera retenido.

Enzimas participantes en la Respiracin

Respiracin Anaerobia
En los organismos aerobios el oxgeno es el receptor final de los electrones durante la respiracin. Esto es muy eficiente pues el oxgeno tiene un potencial muy bajo de reduccin. Los organismos anaerobios utilizan receptores de electrones que tienen un potencial ms alto de reduccin que el oxgeno, lo que significa que la respiracin es menos eficiente y conduce generalmente a tasas de crecimiento ms lentas que en los aerobios. Muchos anaerobios facultativos pueden utilizar tanto oxgeno como receptores finales de electrones alternativos para la respiracin dependiendo de las condiciones ambientales. La mayora de los organismos de respiracin anaerobia son hetertrofos, aunque hay algunos auttrofos. Todos los procesos que describiremos a continuacin son disimilativos, es decir que proporcionan energa pero no nutrientes para la clula (lo que sera asimilativo). Se conocen tambin las rutas asimilativas de muchas formas de respiracin anaerobia.

Desnitrificacin La desnitrificacin es la utilizacin del nitrato (NO3- ) como receptor terminal de electrones. Es un proceso extensamente distribuido y utilizado por muchos miembros de Proteobacteria. Muchos anaerobios facultativos utilizan la desnitrificacin porque el nitrato, como el oxgeno, tiene un bajo potencial de reduccin. Muchas bacterias desnitrificadoras pueden tambin utilizar el hierro frrico (Fe3+ ) y algunos compuestos orgnicos como receptores de electrones. La desnitrificacin implica la reduccin paso a paso del nitrato al nitrito (NO2- ), al xido ntrico (NO), al xido nitroso (NO2) y al nitrgeno (N2) mediante las enzimas nitrato reductasa, nitrito reductasa, xido ntrico reductasa y xido nitroso reductasa, respectivamente. Los protones son transportados a travs de la membrana por la NADH reductasa, las quinonas y el xido nitroso reductasa para producir el gradiente electroqumico crtico para la respiracin. Algunos organismos (por ejemplo, E. coli) producen solamente nitrato reductasa y, por lo tanto, solo pueden realizar la primera reduccin, lo que lleva a la acumulacin del nitrito. Otros (por ejemplo, Paracoccus denitrificans o Pseudomonas stutzeri) reducen el nitrato totalmente.

Reduccin del sulfato

La reduccin del sulfato es un proceso energtico relativamente pobre usado por muchas bacterias Gram negativas (Proteobacterias gamma) y por organismos Gram positivos relacionados con Desulfotomaculum o con la archaea Archaeoglobus. Como producto final metablico se obtiene sulfuro del hidrgeno (H2S) . Muchos organismos reductores del sulfato son hetertrofos, empleando compuestos del carbono tales como lactato y piruvato (entre muchos otros) como donadores de electrones mientras que otros son auttrofos, con el gas hidrgeno (H2) como donador de electrones. Algunas bacterias reductoras del sulfato auttrofas inusuales pueden utilizar el fosfito (HPO3- ) como donador de electrones (por ejemplo, Desulfotignum phosphitoxidans) o son capaces de generar dos compuestos a partir del azufre, en este caso un donador de electrones y un receptor de electrn) usando el tiosulfato (S2O32-, por ejemplo, Desulfovibrio sulfodismutans). Todos los organismos reductores del sulfato son anaerobios obligados.

Acetognesis La acetognesis es un tipo de metabolismo microbiano que utiliza hidrgeno (H2) como donador de electrones y dixido de carbono (CO2) como receptor de electrones para producir acetato (en esto es similar a la metanognesis). Las bacterias que pueden sintetizar autotrficamente acetato se denominan homoacetgenas. La reduccin del dixido de carbono en todos los homoacetgenos se produce por la ruta del acetilo-CoA. A menudo, los homoacetgenos pueden tambin ser fermentantes, usando el hidrgeno y dixido de carbono producidos como resultado de la fermentacin para producir acetato, que se secreta como producto final.

Reduccin del hierro frrico (Fe3+) El hierro frrico es un receptor terminal de electrones extensamente utilizado por los organismos anaerobios auttrofos y heterotrfos. El flujo de electrones en estos organismos es similar a los que usan como receptores terminales oxgeno o nitrato, salvo que en los organismos reductores de hierro frrico la enzima final es la hierrofrrico reductasa. Los organismos modelo incluyen Shewanella putrifaciens y Geobacter metallireducens. Algunas bacterias reductoras del hierro frrico (tales como G. metallireducens) pueden utilizar hidrocarburos txicos tales como el tolueno como fuente de carbono, por lo que hay un gran inters en usar estos organismos como agentes de biorremediacin en acuferos contaminados ricos en hierro frrico.

Fermentacin alcohlica
Proceso productor de energa en el que los compuestos orgnicos actan como donadores y aceptores de electrones. Los procesos fermentativos siempre mantienen un estricto control en su balance de xido-reduccin. El nivel promedio de oxidacin de los productos finales es igual al del sustrato.
COOH 2 C O + 2 NADH + 2 H+

COOH 2 H C CH +2NA D+ CH3

3

CH3 cido pirvico

cido lctico

Cuando el aceptor de electrones es un cido orgnico se le llama fermentacin, cuando el aceptor es una sustancia inorgnica como NO2, NO3, SO4, CO3 y fumarato.

La principal contribucin de la fermentacin es la produccin de ATP. La nica forma de producir ATP durante la fermentacin es por fosforilacin a nivel del sustrato. La fosforilacin oxidativa es una serie de eventos qumicos que llevan a la sntesis de ATP. El evento vital se lleva a cabo en la membrana plasmtica bacteriana, en la membrana interna mitocondrial y en los tilacoides de los cloroplastos

Los microorganismos que obtienen la energa por procesos fermentativos son anaerobios estrictos o facultativos. En general los organismos facultativos cambian su modo de metabolismo productor de energa cuando son expuestos al aire, aunque existe un grupo de microorganismos (bacterias del cido lctico) a las que el oxgeno no les modifica el metabolismo productor de energa prosiguiendo con la fermentacin an cuando crecen con aire. Las fermentaciones alcohlica es propia de algunos hongos, especialmente de las levaduras.

Numerosos hongos, bacterias, algas y algunos protozoos, fermentan azcares, transformndolos en etanol y CO2. Este es el proceso que se conoce como fermentacin alcohlica. La fermentacin alcohlica, al igual que otro tipo de fermentaciones, como es el caso de la fermentacin lctica, es de gran utilidad para el hombre, pues por ejemplo, la fermentacin alcohlica llevada a cabo por las levaduras, sirve para la fabricacin de bebidas alcohlicas (como el vino o la cerveza), y el CO2 procedente de la fermentacin, es utilizado para hacer crecer el pan y otros alimentos.

La principal finalidad de una fermentacin alcohlica, es la produccin de energa de tipo anaerbica (con ausencia de oxgeno) para microorganismos como las levaduras, en el caso de ver el proceso desde la perspectiva microbiana, pero si lo hacemos desde la perspectiva humana, el proceso es de tipo bioqumico, con la finalidad de producir etanol.

La principal caracterstica de los microorganismos que realizan este tipo de fermentacin es el lugar donde viven, que suelen ser ambientes libres de oxgeno, sobretodo mientras se realiza la reaccin qumica, por lo cual se dice que la fermentacin alcohlica es un proceso totalmente anaerbico.

 Existen diferentes tipos de fermentaciones alcohlicas,

las cuales dividimos en dos grandes grupos, la fermentacin industrial, y la fermentacin natural. Adems podemos hablar de fermentaciones especficas, las cuales son manipuladas para conseguir ciertas cantidades de etanol con la finalidad de realizar algunas bebidas. Dentro de este grupo destacamos la fermentacin del vino, de la cerveza, del arroz, de la leche, etc.

Adems de la utilizacin de los procesos fermentativos, con la finalidad de producir bebidas, u otros alimentos, la fermentacin alcohlica hoy en da tiene usos diversos en la industria, donde forma para de la produccin de cosmticos, productos de limpieza, biocombustibles, pesticidas biolgicos, etc.

Fotosntesis

CO2 + 2 H2O
En presencia de luz y clorofila

(CH2O )x + O2 + H2O
Carbohidrato

La fotosntesis es el proceso que convierte la energa lumnica en energa qumica

Estructura del cloroplasto y de las membranas

fotosintticas. Los organismos fotosintticos procariotes y eucariotes poseen sacos aplanados o vesculas llamadas tilacoides, que contienen los pigmentos fotosintticos Pero solamente los cloroplastos de los eucariotes estn rodeados por una doble membrana.

FASES DE LA FOTOSNTESIS

 Fase lumnica

Clorofila

12 H2O ADP
NADP

18 ATP+ 12 NADPH2 + 6 O2

Productos de la fase lumnica y reacciones de la fase oscura 6CO2 + 18 ATP + 12 NADPH2 Enzima C6H12O6P+ 18 ADP + 17 P inorgnico + 12 NADP Hexosa

Ciclo de Calvin o del C3

Ribulosa 1 fosfato

CO2

Ribulosa 1,5 difosfato

H2O
Compuesto inestable Fructosa 6-fosfato

H2O

Acido 3-difosfoglicrico

3-fosfo gliceraldehdo

ATP NADPH2
ADP +NADP

Acido 1,3-difosfoglicrico

GLUCOSA

Pi

Funciones de la fotosntesis Formar compuestos orgnicos durante la fotosntesis Utilizar energa procedente de la luz Aumentar la cantidad total de compuestos orgnicos. Sintetizan biomasa.

Digestin anaerobia
La digestin anaerbica es el proceso en el cual microorganismos descomponen material biodegradable en ausencia de oxgeno. Este proceso genera diversos gases, entre los cuales el dixido de carbono y el metano son los ms abundantes (dependiendo del material degradado). En biodigestores se aprovecha esta liberacin de gases para luego ser usados como combustible.

 La intensidad y duracin del proceso anaerbico varan

dependiendo del diversos factores, entre los que se destacan la temperatura y el pH del material biodegradado. La digestin anaerobia (DA) es un proceso multietapas que puede ser resumido en 4 etapas.

En la primera se debe hidrolizar los compuestos de mayor peso molecular, tanto los disueltos como los no disueltos, por medio enzimas (por ejemplo, amilasas y proteasas), en esta primera etapa se hidrolizan polmeros tales como polisacridos, lpidos, protenas y cidos nucleicos, formndose los correspondientes oligmeros y monmeros (azcares, alcoholes, cidos grasos, glicerol, polipptidos, aminocidos, bases pricas, y compuestos aromticos).

 La segunda etapa la llevan acabo bacterias acidognicas

que transforman los oligmeros y monmeros a cidos grasos voltiles (cidos: actico, propinico, butrico y valrico principalmente).

 Las

bacterias acetognicas en la tercera etapa transforman a los cidos grasos voltiles (AGV) a cido actico, para que a su vez las bacterias metanognicas acetoclastas.

 En la ltima etapa, los transformen a metano (CH4) y

bixido de carbono (CO2), en esta cuarta etapa participan tambin las bacterias hidrogenotrficas, que mantienen el equilibrio del hidrgeno (H2) en el medio, utilizndolo para reducir el CO2 a CH4.

 La digestin anaerobia es un proceso complejo desde el punto

de vista microbiolgico; al estar enmarcado en el ciclo anaerobio del carbono, es posible en ausencia de oxgeno, transformar la substancia orgnica en biomasa y compuestos inorgnicos en su mayora voltiles: CO2, NH3, H2S, N2 y CH4 (Soubes, 1994).

 Naturalmente ocurre en el tracto digestivo de animales y debajo de

aguas estancadas o pantanos, pero tambin puede realizarse en depsitos cerrados hermticamente, llamados digestores. Estos se utilizan cuando se quiere captar todos los productos obtenidos de la descomposicin anaerobia (gases y slidos), ya que al haber en su interior un ambiente obscuro y sin aire se favorece el medio ptimo para el cultivo intensivo de bacterias anaerobias (Salazar, 1993).

 En esta

condicin, cuando se acumulan polmeros naturales orgnicos como protenas, carbohidratos, celulosa, etc., se produce un rpido consumo de oxgeno, del nitrato y del sulfato por los microorganismos, producindose la metanognesis; en estas condiciones, el nitrato se transforma en amonio y el fsforo queda como fosfato. Tambin se reducen los iones frrico y mangnico, debido a la ausencia de oxgeno.

El mtodo bsico consiste en alimentar al digestor con materiales orgnicos y agua, dejndolos un perodo de semanas o meses, a lo largo de los cuales, en condiciones ambientales y qumicas favorables, el proceso bioqumico y la accin bacteriana se desarrollan simultnea y gradualmente, descomponiendo la materia orgnica hasta producir grandes burbujas que fuerzan su salida a la superficie donde se acumula el gas (Verstegui, 1980).

La digestin anaerobia, a partir de polmeros naturales y en ausencia de compuestos inorgnicos, se realiza en tres etapas: 1) Hidrlisis y fermentacin, en la que la materia orgnica es descompuesta por la accin de un grupo de bacterias hidrolticas anaerobias que hidrolizan las molculas solubles en agua, como grasas, protenas y carbohidratos, y las transforman en monmeros y compuestos simples solubles.

2) Acetognesis y Deshidrogenacin, donde los alcoholes, cidos grasos y compuestos aromticos se degradan produciendo cido actico, CO2 e hidrgeno que son los sustratos de las bacterias metanognicas; 3) Metanognica en la que se produce metano a partir de CO2 e hidrgeno, a partir de la actividad de bacterias metanognicas (Marty, 1984).

La concentracin de hidrgeno juega un papel fundamental en la regulacin del flujo del carbono en la biodigestin. Los microorganismos que en forma secuencial intervienen en el proceso son: 1) bacterias hidrolticas y fermentadoras; 2) bacterias acetonognicas obligadas reductoras de protones de hidrgeno (sintrficas); 3) bacterias sulfato reductoras (sintrficas facultativas) consumidoras de hidrgeno; 4) bacterias homoacetognicas; 5) bacterias metanognicas; 6) bacterias desnitrificantes (Soubes, 1994).

Para que las bacterias aseguren su ciclo biolgico en el proceso de digestin anaerobia es necesario que se presenten en condiciones ptimas los siguientes factores: Temperatura. Las bacterias mesfilas completan su ciclo biolgico en el mbito de 15 a 40C con una temperatura ptima de 35 oC. Las bacterias termoflicas cumplen sus funciones en el mbito de 35 a 60 oC con una temperatura ptima de 55C.

Hermetismo. Para que el proceso de digestin se lleve a cabo en forma eficiente, el tanque de fermentacin debe estar hermticamente cerrado. Presin. La presin subatmosfrica de 6 cm de agua dentro del biodigestor se considera la presin ptima (Kennedy y Berg, 1982).

Tiempo de retencin. Es el tiempo promedio en que la materia orgnica es degradada por los microorganismos. Se ha observado que a un tiempo corto de retencin se produce mayor cantidad de biogas, pero un residuo de baja calidad fertilizante por haber sido parcialmente digerido.

Pero para tiempos largos de retencin se obtendr un rendimiento bajo de biogas, pero con un efluente (residuo) ms degradado y con excelentes caractersticas como fuente de nutrimentos.

Produccin de metabolitos