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QUE ES UN HEMOCULTIVO?
Antes de la administracin de la terapia antimicrobiana sistmica Siempre que exista sospecha clnica de sepsis Meningitis Osteomielitis Pielonefritis Infeccin intraabdominal Artritis Infecciones graves de la piel y tejidos blandos Neumona Endocarditis y fiebre de origen desconocido (absceso oculto, fiebre tifoidea, brucelosis, etc.).
IDENTIFICACIN DE LA BOTELLA
Cada hemocultivo con la sangre inoculada debe ser debidamente identificado con los datos del paciente:
Nmero de historia clnica Nombre y apellidos Servicio
En la orden
Nmero de cama
La muestra de sangre para hemocultivo debe extraerse de una vena, utilizndose generalmente las del antebrazo. La utilizacin de sangre arterial no ha demostrado ventajas sobre la venosa.
Sangre extrada de catter solo debe ser utilizada cuando se sospecha bacteriemia asociada a este.
Cada muestra de sangre se obtendr de lugares de venopuncin diferentes.
PREPARACION DE LA PIEL
EXTRACCION DE LA MUESTRA
Insertar la aguja en la vena elegida y extraer el volumen de sangre sin utilizar anticoagulante. Los frascos de hemocultivo deben inocularse rpidamente para evitar la coagulacin de la sangre en la jeringa, atravesndolos con la aguja en posicin vertical.
Se inocular en primer lugar el frasco anaerobio, evitando la entrada de aire, seguido del aerobio, invirtindolos varias veces para mezclar la sangre y el medio de cultivo.
adultos
Volumen de medio en botellas pediatricas: 10-20 ml sangre: 1-4 ml Lactantes de 1 mes a 2 aos: 2 a 3 ml Nios mayores de 2 aos : 3 a 5 ml
Menos de un mililitro de sangre en caso de bacterias como la Neisseria , puede ser afectada por agentes lizantes como el SPS (polianetol sulfonato sdico) .(PEDIATRICOS)
NUMERO DE HEMOCULTIVOS
En adultos se toman tres botellas, lo que incrementa la posibilidad de detectar el agente infeccioso. En nios se toman de dos a tres botellas , preferiblemente de diferentes sitios para aumentar la probabilidad de deteccin. En neonatos se toman uno o dos antes de comenzar con el tratamiento.
Slo deben mantenerse a temperatura ambiente durante cortos periodos de tiempo para no afectar la posterior recuperacin de los microorganismos.
Si no pueden ser enviados inmediatamente al laboratorio se incubarn en una estufa a 35-37C hasta ese momento. Los hemocultivos que van a ser procesados en sistemas automticos pueden mantenerse a temperatura ambiente. Sin superar las 18 h. Los hemocultivos nunca deben ser refrigerados.
MEDIOS DE CULTIVO
Los ms frecuentemente utilizados son:
Caldo triptosa soja Caldo Columbia Infusin cerebro corazn
Caldo Brucella
Caldo Tioglicolato Caldo de peptona suplementado
Actualmente se estn utilizando los medios con resinas para neutralizar los antimicrobianos cuando el paciente est recibiendo tratamiento antibitico previo.
El medio de cultivo se Uno de los frascos se embotella al vaco con una ventila por medio de atmsfera que contiene cantidades variables de una aguja, permitiendo CO2. la entrada de oxgeno El potencial de xidoreduccin del medio, si no se ventila, es lo suficientemente bajo como para permitir el crecimiento de bacterias anaerobias.
slida y otra lquida. Al inclinar el frasco, el medio lquido cubre totalmente el medio slido, realizando un subcultivo en el mismo cuantas veces se desee, sin necesidad de abrir la botella.
BBL SEPTI-CHEK
En este mtodo, tras la lisis de las clulas sanguneas, se procede a filtrar la sangre para retener las bacterias. El filtro utilizado, o fragmentos del mismo, se siembra en distintos medios de cultivo.
Tras la inoculacin de la sangre, sta se mezcla con el contenido del tubo para conseguir la lisis de las clulas. A continuacin, para separar los microorganismos y los elementos sanguneos, se centrifuga el tubo a 3.000xg. durante 30 minutos. Despus se desecha el sobrenadante y se siembra el sedimento en distintos medios de cultivo.
MEZCLAR
INCUBAR
POSITIVO
SISTEAS AUTOMATIZADOS
SISTEMAS AUTOMTICOS DE
MONITORIZACIN CONTINUA.
Se basan en la deteccin de la produccin de CO2 por los microorganismos Los datos obtenidos en cada lectura se transmiten a un ordenador donde se almacenan y se analizan segn sofisticados algoritmos que determinan cundo se produce crecimiento bacteriano.
Es un sistema totalmente automtico, no invasor, de agitacin continua, que se compone de un incubador, un detector y un ordenador. El CO2 producido por el metabolismo bacteriano reacciona con un material fluorescente situado en el fondo del frasco del hemocultivo, lo que modula la cantidad de luz que es absorbida por un sensor. Los fotosensores miden el nivel de fluorescencia, que se corresponde con la cantidad de CO2 producida por el microorganismo. Este sistema realiza una lectura de todos los frascos cada 10 minutos
BACTEC 9240
BacT/Alert
Monitorizac in contnua
No
Bactec 460
Produccin de CO2
Bactec 660
Bactec9240 BacT/Alert Vital ESP
Produccin de CO2
Produccin de CO2 Produccin de CO2 Produccin de CO2, cambio de pH o potencial redox Produccin y/o consumo de gas
Infrarrojos
Fluorescenci a Colorimtrico Fluorescenci a Manomtrico
No
S S S S
SUBCULTIVOS
Cultivar en distintos medios Se incubarn a 35-37C en diferentes atmsferas Perodos de tiempo (24 h el agar sangre y el agar chocolate, y 48-72 h el agar sangre enriquecido en anaerobiosis) En agar Sabouraud si se observan levaduras en el Gram, e incubar a diferentes temperaturas, 30C en caso de sospecha de hongos.
HEMOCULTIVO POSITIVO
Tincin de Gram Identificacin preliminar
Cocos
TSI, DNAsa o coagulasa, novobiocina, antibiograma en agar Mueller Hinton Optoquina, bacitracina, bilis-esculina, antibiograma en agar sangre Antibiograma en agar chocolate incubado en CO2(Neisseria)
Bacilos
Esculina, antibiograma en agar sangre Pruebas bioqumicas de identificacin, antibiograma en agar Mueller Hinton
Cocobacil os
Gram (-)
Levadura s
Flora mixta
INTERPRETACION DE RESULTADOS
VERDADERA BACTEREMIA
Crece el mismo microorganismo en varios hemocultivos, aunque sean microorganismos de la piel. Tiempo de positividad con un rango de 48 horas. Cuando en la punta del catter se asla un recuento significativo (<15 O >15 ufc) del mismo microorganismo que en el hemocultivo.
FALSA BACTEREMIA
Un hemocultivo puede ser positivo sin que ello represente un episodio verdadero de bacteriemia.
La presencia de un solo hemocultivo positivo de extracciones seriadas en un corto perodo de tiempo sugiere una contaminacin.
MICROORGANISMOS CONTAMINANTES
Clostridium
Se siembra la superficie de la punta mediante la TECNICA DE MAKI. Comparacin entre los recuentos obtenidos de hemocultivos por sangre perifrica y de sangre por el catter .
INTERPRETACION Infeccin posible: hemo perifrico (+) Infeccin probable: hemo perifrico y trans catter (+) Infeccin definitiva: cultivo de punta de catter positiva
La procalcitonina (PCT) es un precursor de la hormona activa biolgica. (CALCITONINA). Se produce normalmente en las clulas C de la glndula tiroides y su nivel en condiciones normales en un sujeto sano es prcticamente indetectable
En condiciones de infeccin grave se origina tambin en los macrfagos, especialmente de origen heptico y en las clulas neuroendocrinas del pulmn e intestino, por una induccin del FNT e IL-2.
Se ha reportado tambin la elevacin de la protena en cuestin despus de estados inflamatorios, no necesariamente relacionados a infeccin como el postoperatorio inmediato y el traumatismo severo, sin embargo no se eleva en otro tipo de infecciones como las virales, en neoplasias, enfermedades alrgicas o del tejido conjuntivo
CONCLUSIONES
ITEMS A TENER EN CUENTA PARA QUE EL RESULTADO DE UN HEMOCULTIVO SEA CONFIABLE: El volumen de sangre utilizado. La dilucin MEDIO/SANGRE Numero de cultivos tomados La tcnica de hemocultivo ,incluso la preparacin superficial, y el sitio de la toma de muestra Tiempo de incubacin El tipo de botella y sistema utilizado (incluyendo si identifica anaerobios o aerobios)