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Inoculacin de Virus

En huevos embrionados

RIOS AROSTEGUI Carolina

TCNICAS PARA EL CULTIVO DE VIRUS


Los sistemas celulares utilizados para propagar los virus en el laboratorio son: 1. Animales de experimentacin 2. Embriones animales 3. Cultivos celulares artificiales

EMBRIONES ANIMALES
Los ms utilizados son los embriones de pollo Los huevos fecundados se incuban hasta su inoculacin (6-14d) Las inoculaciones, que pueden realizarse en diversas zonas del embrin

UTILIDAD Fuente de tejido vivo conveniente y fcil de manipular que se utiliza en la propagacin, titulacin e identificacin de virus, as como en la preparacin de algunas vacunas virales.

TIPOS DE VIRUS QUE SE PUEDEN INOCULAR EN EMBRION DE POLLO


MIXOVIRUS -Influenza -Parotiditis

HERPESVIRUS Herpes simplex

POXVIRUS Viruela

IMPORTANCIA
La oncognesis viral La patologa de los padecimientos virales La respuesta inmune a los virus El efecto de los factores ambientales sobre infecciones virales

Lugares de inoculacin - EP
Membrana Corioalantoidea: Embriones 10 12 das Cantidad de inculo: 0.1 0.5 ml. Aislamiento y cultivo de virus que producen lesiones localizadas

Provocan focos, pstulas fcilmente visibles

laringotraqueitis aviar enfermedad de Beyer (Pseud orrabia)

Cavidad Alantoidea: Embriones 9 12 das cantidad de inoculo:0.1 0.2 ml Desarrollo de virus hemaglutinantes

peste New Castle bronquitisinfecciosa encefalitis equina occidental y oriental Parotiditis

Ventaja: simplicidad de la inoculacin y toma de muestra

Cavidad Amnitica: embriones 7 15 das Cantidad de inculo: 0.1 0.2 ml. Primoaislamiento de cepas de influenza

Saco Vitelino: embriones 5 8 das cantidad de inculo: 0.2 1 ml. aislamiento y cultivo de virus:
enfermedades venreas Neumona clamidias rickettsias

Uso: preparacin de vacunas y como antgeno para reacciones serolgicas

Va Intravenosa: embriones 10 - 15 das cantidad de inculo: 0.02 -0.05 ml. membrana corialantoidea est irrigada por vasos sanguneos, es susceptible de inoculacin para casos especiales, virus que ocasionan cambios hematolgicos
virus de la Leucemia.

Va Intracerebral (embrin): embriones 8 14 das, Cantidad de inoculo: 0.01 0.02 ml especficamente para virus que producen alteraciones cerebrales:
Rabia herpes

Tambin influye: la dilucin, la cantidad del inculo, la temperatura y tiempo de incubacin tras la inoculacin

PROCEDIMIENTO Va Alantoidea

Visualizar al embrin en el ovoscopio

Marcar embrin y cmara de aire

Perforar la cscara: borde de la cmara de aire

Inocular 0.1mL de la muestra


(ngulo de 45 en relacin al eje longitudinal del huevo y alejado del embrin, en zona libre de vascularizacin)

PROCEDIMIENTO Va Amnitica
Visualizar al embrin en el ovoscopio
Sostener el huevo en el ovoscopio

Inocular 0.1mL de la muestra en la cmara amnitica

Marcar embrin y cmara de aire

Perforar la cscara: centro de la cmara de aire

Limpiar de la cscara del huevo con

COSECHA Va Alantoidea

alcohol.

Cortar la cscara por encima de la cmara de aire y retirar la membrana corioalantoidea

Con baja lengua estril empujar el contenido del huevo hacia separndolo de la cscara (para que el lquido
alantoideo se deposite en este espacio)

Retire el lquido alantoideo con pipeta de 5cc y depostelo en un tubo 13x100.

Guardar en refrigeracin

COSECHA Va Amnitica

Retirar aspticamente la cscara y la membrana.

Tirar hacia atrs la membrana alantoidea y sacar el lquido de esta cavidad con pipeta de 5cc.

Retirar el lquido amnitico con una pipeta Pasteur en un tubo 13x100

Guardar en refrigeracin