Universidade Federal de Campina Grande Centro de Sade e Tecnologia Rural Unidade de Cincias Biolgicas Monitoria de Biofsica

Eletroforese

Rafael Rodrigues

Para que serve a eletroforese?

uma tcnica analtica com macromolculas como sangue, carboidratos, protenas e cidos nuclicos.

Rafael Rodrigues

Histrico

Arne Tiselius 1937;

1902 - 1971

Rafael Rodrigues

O que eletroforese?
a migrao de espcies qumicas ionizadas, de acordo com suas cargas e massas molares, atravs da aplicao de um campo eltrico.

Rafael Rodrigues

Caractersticas gerais da eletroforese

Em alguns tipos de eletroforese ocorrem fenmenos de peneiramento.

Rafael Rodrigues

Caractersticas gerais da eletroforese

Mantm as caractersticas fsicas e qumicas; Usa pequenas quantidades de amostras; Tcnica relativamente simples, rpida e de alto valor informativo quanti e qualitativo:
Evidenciao de protenas taxonomia, fisiologia e bioqumica dos seres vivos; Ferramenta indispensvel para caracterizar os cidos nuclicos.
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Fundamentos fsicos da eletroforese

A tcnica de eletroforese utiliza princpios ou leis elementares da eletricidade, como a lei de Coulomb, lei de Cooper , lei de Stokes e lei de Ohm.

LEI DE COULOMB:
I+ plo negativo (ctodo)

I- plo positivo (nodo)

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LEI DE COOPER:
F = Vq/d
F fora que atua sobre o on V voltagem entre os eletrodos q carga lquida do on d distncia entre os eletrodos

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LEI DE STOKES:
f = 6..r.n.v
f fora que se ope migrao r raio do on

n viscosidade da soluo
v velocidade de migrao do on

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Lei de Cooper + Lei de Stokes

Fora que atua sobre o on igual a fora que se ope migrao

F=f
V.q/d = 6..r.n.v

v = Vq/6rnd
Rafael Rodrigues

 LEI DE OHM:
V = RI
V voltagem em Volts R resistncia em Ohms () I intensidade da corrente eltrica em ampares.

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Princpio do Mtodo

QUANTITATIVO X QUALITATIVO

Rafael Rodrigues

Princpio do Mtodo
QUALITATIVO

Rafael Rodrigues

Princpio do Mtodo
QUANTITATIVO

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Na eletroforese temos:
V ~I~P
Voltagem constate; Corrente constate; Potncia constate ;

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MEIOS DE SUPORTE
Qumico e fsico:
Papel de filtro Gel de Agar Acetato de celulose Gel de amido Gel de poliacrilamida
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Na eletroforese em gel de poliacrilamida

aumento da resistncia:

e reduo de I

I = V/R
V: 100 200 v

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ATENO
O gel de poliacrilamida usado para protenas; O gel de agarose usado para cidos nuclicos; Caractersticas gerais dos gis

1. Funciona como uma peneira molecular, separando por tamanho e massa molecular;
1. Inibe a propagao do calor , proveniente do atrito do deslocamento das partculas e o calor produzido pelo campo eltrico;
Rafael Rodrigues

Rafael Rodrigues

Equipamentos da eletroforese vertical e as substncias inseridas.

Fonte; Pente; Placa de slica; Placa de vidro; Separador; Gel de concentrao; Gel de corrida; Amostra;

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Anlise da eletroforese

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Aplicao das amostras na cuba de eletroforese vertical

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Tipos de eletroforese
1. Eletroforese em Gel; 2. Eletroforese com SDS em gel de poliacrilamida; 3. Focalizao isoeltrica de protenas em gel SDS( eletrofocalizao); 4. Eletroforese bidimensional ou 2D; 5. Imunoeletroforese; 6. Eletroforese de alta voltagem;

SDS = dodecilsulfato de sdio

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ATENO
Para que serve o SDS?
Possui ima parte hidrofbica e outra hidroflica!

uma molcula anfiflica usada como desnaturante, ou seja, um detergente que adicionado a soluo com o objetivo de proporcionar uma carga liquida negativa para a biomolcula de interesse, de modo que ele agrega-se ao redor desta.
Rafael Rodrigues

Eletroforese com SDS em gel de poliacrilamida

1 Passo: Coloca-se a amostra de referncia e depois as outras amostras nos poos; 2 Passo: Aplicar uma corrente eltrica; 3 Passo: Retira-se o gel da cuba eletrofortica e coloca uma soluo corante;

Rafael Rodrigues

Focalizao isoeltrica de protenas em gel SDS( eletrofocalizao)

Rafael Rodrigues

Eletroforese bidimensional ou 2D

Rafael Rodrigues

Valeu

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