PROTENAS Y AMINOCIDOS

Dr. Amrico Castro Luna

PROTENAS
Llamadas biomolculas, biopolmeros o poliamidas de elevado peso molecular que por hidrlisis dan unidades llamadas alfa aminocidos.

Los -aminocidos se encuentran enlazados en cadenas largas a travs del grupo amino bsico y el grupo carboxilo cido mediante enlaces peptdico.

Las protenas se hallan presente en todo organismo viviente y desempea notable importancia en la estructura y funciones de las clulas: Estructurales.- piel, pelo, uas y tendones (queratina, colgeno). Enzimtica.- replicacin y reparacin del ADN (ADN polimerasa). Transporte.- transporte de oxgeno a las clulas (hemoglobina). Contractiles.- contraccin de los msculos (miocina, actina). Protectoras.- compleja las protenas extraas (anticuerpos). Hormonales.- regula el metabolismo de la glucosa (insulina). Toxinas.- incapacita a las presas (veneno de las serpientes)

Las cadenas con menos de 50 aminocidos se denominan pptidos y las protenas propiamente dichas presentan cadenas ms largas, de all su elevado peso molecular

Pptido

Protena

Estructura y estereoqumica de los amonicidos Todos los aminocidos de las protenas son cidos -aminocaboxlicos que contienen un grupo cido y un grupo amino.

Al estado slido, cristalino y seco existen como iones dipolares o zwitterin o ion zwitter (del alemn in dipolar, hbrido). En esta forma el grupo carboxilo est presente como in carboxilato (COO-) y el grupo amino como in amonio (NH3+).

H3O+

-OH

Son anfteros, dependiendo de la solucin acuosa cida o de la solucin acuosa bsica en que se encuentren, reaccionando como cidos o bases. As en solucin acuosa cida, el in dipolar de un aminocido es una base que acepta un protn para formar la parte catinica y en solucin acuosa bsica, el in dipolar de un aminocido es un cido que pierde un protn para formar la parte aninica.

En solucin cida

H3N+ - CH - COO- + H3O+ R

H3N+ - CH - COOH + H2O R H2N - CH - COO- + H2O R

En solucin bsica

H3N+ - CH - COO- + -OH R

Poseen puntos de fusin altos y constantes dielctricas elevadas. Predominan dentro de las clulas a pH 7.3 Con excepcin de la glicina, todos los -aminocidos son quirales, de configuracin (S) en el carbono alfa y pertenecen a la serie (L), teniendo la misma configuracin relativa que el L(-) gliceraldehdo, con el grupo amino a la izquierda en la proyeccin de Fischer. Por su estereoqumica similar a la del L(-)gliceraldehdo, a los (S)-aminocidos naturales se les clasifica como L-aminocidos. La nomenclatura (D) y (L) , como la del sistema (R) y (S), se refieren a la configuracin del tomo de carbono asimtrico. El signo de la rotacin ptica (+) o (-) se determina experimentalmente.

COOH C CH3 H2N HO H

CHO C CH2OH H H2N

COOH C H

COOH H2N CH3 (S)- alanina (L-alanina) H HO

CHO H CH2OH L-(-)-gliceraldehdo H2N

COOH H

R L-aminocido configuracin (S)

Por poseer el grupo cido y el grupo amino, tienen propiedades qumicas semejantes a los cidos carboxlicos y las aminas. Poseen cadenas laterales (simbolizadas por R) sustituidas en el tomo de carbono alfa. Existen 20 aminocidos diferentes que forman parte de las protenas y son alfa-aminocidos que constan de un grupo amino, un grupo carboxilo, un hidrgeno y un grupo R, unidos a un mismo carbono denominado carbono-alfa. El carbono-alfa recibe este nombre por ser el carbono adyacente al carbono del grupo carboxilo, y el grupo diferenciador de los distintos aminocidos (R) se denomina cadena lateral.

CLASIFICACIN DE LOS AMINOCIDOS Aminocidos con cadena lateral aliftica:

Aminocidos con cadena lateral aromtica:

Prolina, Pro, P

En la prolina la cadena lateral est unida tanto al carbono alfa como al nitrgeno del grupo amino.

Aminocidos con presencia de tomos de azufre:

Cisteina, Cys, C

Metionina, Met, M

Aminocidos hidroxiladas:

con

cadenas

alifticas

Serina, Ser, S

Treonina, Thr, T

Aminocidos bsicos:

Lisina, Lys, K

Arginina, Arg, R

Histidina, His, H

Aminocidos cidos y sus amidas:

cido asprtico, Asp, D

Asparagina, Asn, N

cido glutmico, Glu, E

Glutamina, Gln, Q

Los derivados correspondientes del cido asprtico y del cido glutmico son la asparagina y la glutamina que contienen un grupo amida terminal en lugar del carboxilo libre.

Los aminocidos son designados por abreviaturas, as: glilcina (Gly), alanina (Ala), valina (Val), leucina (Leu), isoleucina (Ile), fenilalanina (Phe), triptofano (Trp), etc. Los aminocidos que no pueden ser sintetizados por el ser humano son llamados aminocidos esenciales y ellos son: arginina, treonina, lisina, valina, fenilalanina, triptofano, metionina, histidina, leucina e isoleucina. Las protenas completas proporcionan los aminocidos esenciales y se hallan en la carne, el pescado, la leche y los huevos. Las protenas de las plantas generalmente son incompletas; el arroz, el maz y el trigo son deficientes en lisina. El arroz carece de treonina y el maz de triptofano. Los vegetarianos superan este inconveniente con una ingesta de diferentes tipos de plantas.

Separacin de aminocidos por cromatografa

Una vez hidrolizada la protena para separarla en su respectivos aminocidos se procede al uso de la cromatografa en capa fina mono o bidimensional; utilizando como revelador solucin de ninhidrina 0.1% en alcohol absoluto o el reactivo policromtico que consta de dos soluciones: Solucin A.Ninhidrina 0.1g Colidina 2mL cido actico glacial 10mL Alcohol absoluto 50mL

Solucin B.-

Nitrato cprico 0.5g Alcohol absoluto 50mL

Ambas soluciones se preparan en proporcin de 50:3. Despus con un spray se agrega el reactivo y luego se somete al calor en estufa a 110 C por cuatro minutos.

PUNTO ISOELCTRICO Y ELECTROFORESIS

Punto isoelctrico (pI) Es el pH en el cual el aminocido no lleva carga inica neta. Es decir que se refiere al pH en el que la concentracin del in dipolar, est en su punto mximo y las concentraciones de las formas aninica y catinica son idnticas. Esto depende de la basicidad del grupo amino o de la acidez del grupo carboxilo. En soluciones cidas los aminocidos presentan carga positiva (pH bajo) y en soluciones bsicas carga negativa (pH alto). El pH intermedio de las dos formas de aminocidos se hallan en la misma proporcin como in dipolar con una carga neta de cero, conocida como punto isoelctrico.

El punto isoelctrico depende de la estructura del aminocido.

H2N - CH - COOR
pH alto (aninico en medio bsico)

H+
-

OH

H3N - CH - COOR
pH isoelctrico (neutro)

H+
-

OH

H3N+ - CH - COOH R
pH bajo (catinico en medio cido)

Electroforesis

Es una tcnica analtica utilizada para separar mezclas de aminocidos utilizando, las diferencias de sus puntos isoelctricos. El equipo utiliza una capa de gel de acrilamida o papel de filtro humedecido con una solucin tampn. En el centro de la capa de gel o del papel de filtro se coloca una lnea de una mezcla de aminocidos y en los extremos se colocan dos electrodos, al que se aplica un voltaje. As, si se quiere separar una mezcla de aminocidos de alanina, lisina y cido asprtico a pH = 6 , la alanina no se mueve, la lisina se mueve hacia el ctodo y el cido asprtico hacia el nodo. Los aminocidos se separan despus de un tiempo y luego se raspa las bandas de gel o se corta el papel. El gel o el papel se tratan con ninhidrina para visualizar el color e identificarlos comparando sus posiciones con los valores estndar.

Las protenas por ser macromolculas, su peso molecular va desde miles a millones. As el virus de la influenza (gripe) est formado por protenas de un peso molecular de 5` 000, 000 cada una de las molculas.

Factores que demuestran que las protenas son poliamidas: Poseen escasas funciones aminas y carboxlicas libres titulables. El resto de funciones estn comprometidas con enlaces peptdicos. 2. Los espectros de infrarrojo y ultravioleta, demuestran la ausencia de vibraciones caractersticas de la absorcin de grupos amino y carboxlo libres. 3. Hay enzimas de actividad especfica que han demostrado este tipo de unin peptdica. Ejemplo: peptidasa, polipeptidasa, etc.
1.

Productos intermedios hidrlisis de una protena

liberados

durante

la

Protena desnaturalizada Metaprotena Proteosas Peptonas Polipptidos Dipptidos Aminocidos

Hidrlisis de protenas

Para verificar la hidrlisis cida o alcalina de una protena hasta aminocidos se debe realizar la prueba de Biuret, si la hidrlisis no es completa, las protenas dan color violeta prpura o azul que se atribuye a la presencia de enlaces peptdicos mltiples en la molcula; si no da coloracin, indica que la hidrlisis es total.

El proceso de hidrlisis de una protena, se puede representar como la ruptura de una cadena polipeptdica

H N

R C H

O C n

H N

R` C H

O C n`

H N

R`` O C H C n`` HIDRLISIS H

+

cadena polipeptdica

R H2N C H aminocido COOH

R`

R`` COOH

+
n

H2N

C H

+
n`

H 2N

C H

COOH n``

aminocido

aminocido

Tipos de hidrlisis de las protenas

Hidrlisis cida.- Utiliza cido clorhdrico o cido sulfrico de concentracin o normalidad conocida. Hidrlisis alcalina.- Utiliza hidrxido de sodio o hidrxido de bario de concentracin o normalidad conocida. Hidrlisis enzimtica.- Utiliza compuestos biolgicos de naturaleza protica: enzimas.

Reacciones de la protenas
1.

Reacciones de coloracin:
Reaccin de Biuret (violeta prpura) Reaccin xantoprotica (amarillo a anaranjado) Reaccin de Milln (rojo) Reaccin de ninhidrina (violeta o prpura)

2.

Reacciones de precipitacin (con sales metlicas dan precipitados):

Nitrato de plata, sulfato de cobre, cloruro de bario, bicloruro de mercurio, acetato de plomo.

3.

Reacciones de coagulacin
Con el calor: solucin protica ms cido actico ms calor Con el alcohol etlico. Reaccin del anillo de Heller: 5mL HNO3 ms 5mL de protena agregado en zona, da un anillo blanco en la zona de contacto.