Regeneracin de una columna Adsorcin irreversible de las impurezas derivadas de la matriz en la cabeza de la columna puede causar cambios en la selectividad

o de divisin de picos. A menudo esas "columnas suciaa" puede ser regeneradas mediante la aplicacin de los siguientes protocolos.

La regeneracin de empaque RP RP-empaques son fases estacionarias C18, C8, C4, C1, C30, CN o fenilo. Lavar la columna con 20 volmenes de columna ( agua) Lavar la columna con 20 volmenes de columna (Acetonitrilo ) Lavar la columna con 5 volmenes de columna (Isopropanol ) Lavar la columna con 20 volmenes de columna(Heptano) Lavar la columna con 5 volmenes de columna (Isopropanol ) Lavar la columna con 20 volmenes de columna (Acetonitrilo )

La regeneracin de empaque NP (fase normal) NP-empaques son slice, Diol, nitro y amino fases estacionarias. Lavar la columna con 20 volmenes de columna (Heptano) Lavar la columna con 5 volmenes de columna (Isopropanol ) Lavar la columna con 20 volmenes de columna (Acetonitrilo ) Lavar la columna con 20 volmenes de columna ( agua) Lavar la columna con 20 volmenes de columna (Acetonitrilo ) Lavar la columna con 5 volmenes de columna (Isopropanol ) Lavar la columna con 20 volmenes de columna (Heptano)

La regeneracin de empaque de intercambio de iones

Los empaque de intercambio ionico son de aniones o cationes (WCX, SCX, WAX y SAX)

Lavar la columna con 20 volmenes de columna del mismo eluyente, pero el doble concentracion de buffer. Siga el protocolo de regeneracin de empique RP (vase ms arriba) Lave con 20 volmenes de columna (agua) Equilibrar la columna ahora a las condiciones originales.

Columnas a base de polimeros Fases estacionarias a base de polmeros muestran una mayor estabilidad del pH, pero menor estabilidad mecnica, en comparacin con las columnas a base de slice. Tambin, empaques a base de polmeros no son compatibles con todos los disolventes orgnicos. Se hinchan o se contraien en algunos disolventes orgnicos. Desafortunadamente, la estabilidad de la presin y la compatibilidad del disolvente son diferentes para la diferente naturaleza de los polmeros y de fabricante a fabricante. Por lo tanto, no hay reglas generales para el cuidado de la columna de materiales basados en polmeros no se pueden dar. Lea siempre las instrucciones para el uso de esas columnas. En caso de duda, pngase en contacto con el fabricante correspondiente.

endcapping El trmino "endcapping" fue introducido a finales de los aos 70, cuando se hizo evidente que algunos silanoles son todava accesibles despus de modificacin superficial con cadena larga ligandos. Trimetilclorosilano es el reactivo ms comn para cubrir accesibles silanoles residuales. Esta molcula es relativamente pequeo y puede penetrar a la superficie de la slice y para abarcar "tope" algunas reas irregulares de silanoles sin reaccionar. Por lo general, conduce a la mejora significativa de las propiedades adsorbentes de fase reversa (menos asimetra y retencin ms predecible de compuestos polares).

LA COLUMNA: Es responsable de la separacin de los componentes. Requerimiento generales para una columna: Funcionamiento reproducible de columna a columna Suficiente numero de platos tericos para el anlisis. Empaque de partcula de tamao uniforme. Fcilmente obtenible. Larga duracin (resistente) Bajo costo.

Frit

El componente poroso en cualquiera de los extremos de una columna que sirve para contener el empaque de columna. Es colocado a los extremos de los tubos de la columna, o ms comnmente, en el final del fitting. Los Frits son hechos de acero inoxidable u otro metal inerte o plstico, como PTFE poroso o polipropileno. Fittirng final y Frits (aparte del empque de la columna, estas partes de la columna son mas susceptibles de daarse por uso inapropiado). El empaque de la columna se sostiene dentro de la columna por los trits, y los frits se sostienen dentro de la columna por el Fitting final.

LONGITUD Las columnas vienen a tamaos diferentes, con el dimetro interno (i.d). de . la mayor parte de columnas igualan a 4.6 milmetros (el mm) = 0.46 centmetros La longitud de la columna es por lo general 10 o 15 cm de largo,

Causas de falla en una Columna

Para que la columna LC funcione bien , debe guardarse en la forma adecuada. Hay varias formas que la columna puede ser daada, y esto se evidencia en el cromatgrama. Picos de la muestra sern ms amplios y no simtricos, los tiempos de retencin de diferentes picos pueden cambiarse, La separacin generalmente ser ms pobre

Causas de falla en una Columna

Las causas mas importantes por las cuales una columna falla son: Ataque qumico Taponamiento de la columna con partculas Choques mecnicos Adsorcin de impurezas

Ataque qumico
Las causas mas importantes por las cuales una columna falla son:

Ataque qumico

Ciertas fases mviles pueden quitar la fase enlazada de la superficie de la partcula de silicona, rompiendo el enlace qumico que sostiene esta capa orgnica a la silicona. Adems estas mismas fases mviles a menudo pueden disolver a la misma silicona. Las mas agresivas son las fases mviles que son bsicas (el pH mayores que 7) o fuertemente cidas (el pH menos de 2.5). Entonces la mayor parte de cromatografistas evita estos extremos de pH al desarrollar las condiciones para un procedimiento LC. Si usted realmente trabaja en el pH ms alto, es posible usar los empaques de columna que sobre todo son diseados para soportar pH extremos.

TAPONAMIENTO DE LA COLUMNA
Taponamiento de la columna con partculas La segunda causa de falla de columna es el taponamiento del frit o el empaque de la columna por las pequeas partculas de residuos . Estas partculas a menudo son introducidas con la muestra, lo cual quiere decir que cualquier muestra que contiene partculas debera ser filtrada, usando un filtro de 0.5 micras que esta diseado para muestras de HPLC. Si usted est en la duda sobre la presencia de partculas en la muestra, solamente sostenga la solucin de la muestra (que usted va a inyectar) contra la luz, y agite con cuidado. Usted debera ser capaz de ver partculas flotantes o un aspecto nublado - si hay cualquier problema.

TAPONAMIENTO DE LA COLUMNA

Taponamiento de la columna con partculas

El taponamiento de columna tambin puede ser causado por partculas en la fase mvil o arrastradas del sistema normal HPLC. Los sellos de bomba y las partes mviles del inyector de la muestra gradualmente se arrastran, deshacindose las partculas que pasan a la entrada de la columna. Las fases mviles que estn constituidas de solventes HPLC, con nada ms aadido, por lo general no tienen problema de partculas, si la cristalera usada es limpia y los depsitos son cubiertos para no dejar pasar el polvo. Estos solventes son filtrados con cuidado por el fabricante. Sin embargo si los elementos slidos como buffers o reactivo de par inico son aadidos a la fase mvil, es buena prctica filtrar las fases mviles finales antes del empleo. Partculas llevadas de sistema - que puede ser un problema importante se maneja mejor usando un filtro en linea entre el inyector y la entrada de columna.

Choques mecnicos
La tercera causa de dao de columna es el choque mecnico. Recuerde que la columna es un artculo caro, varios cientos de dlares, entonces trtelo con el respeto que esto merece. No deje caer la columna, y cuando no es instalado sobre el sistema LC lo ponen con cuidado en su caja original para la proteccin. Hay otros modos de daar una columna, adems de la golpeadura de ella. La fase mvil que se mueve por la columna ejerce una fuerza sobre el empaque de la columna, y si esta fuerza es bastante grande, esto causar que las partculas de columna se compriman juntas ms fuerte - o an romper las partculas .Esto entonces conduce a la formacin de espacios vacos en el empaque a la entrada de la columna. Un vaco va a en casi todos los casos causando una prdida catastrfica en el funcionamiento de columna, y requieren su reemplazo.

Adsorcin de impurezas
Adsorcin de impurezas

La causa final de dao de columna es la adsorcin de impurezas de muestras "sucias". Las muestras que son sacadas de las plantas o especimenes de animales, muestras ambientales, o mezclas de reaccin qumica, a menudo contienen los compuestos que son fuertemente atrados a la fase enlazada. Estos gradualmente se acumulan sobre la columna y bloquean la superficie de la fase enlazada. Los picos de la muestra entonces muestran la disminucin en el tiempo de retencin y el aumento de ancho, y tarde o temprano la columna debe ser desechada. Esta acumulacin " de la basura qumica " sobre la columna puede ser evitada por una limpieza inicial de la muestra antes de la inyeccin. Las columnas que han acumulado estas impurezas, en algunos casos, pueden ser regeneradas, lavando la columna con solventes convenientes