Estudo da produo de lacase visando o aproveitamento de resduos da hidrodestilao de plantas do gnero Aniba

Bolsista: Natlia Vanessa Miranda Mximo

Orientadora: Dra. Patrcia Melchionna Albuquerque
Manaus, dezembro de 2012.

Introduo
Famlia Lauraceae Distribuidas nas regies tropicais e subtropicais Utilizadas nas reas alimentares, aromticas, na produo de leos essenciais, na fabricao de papel e na produo de energia. Possui o gnero Aniba que tem 40 especies, mais conhecida pela produo de seus leos essenciais para a indstria de

perfumaria.

Introduo

Aniba roseadora (pau-rosa)

Aniba canellila (preciosa)

Aniba parviflora (macacaporanga)

Indstria de leos essenciais

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Introduo
Fermentao slida

Residuo slido

Enzima

Enzima lacase
Remove eltrons e prtons

Grupos hidrxi-fenlicos e aminoaromticos

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Introduo
Aplicaes industriais da enzima lacase

Algodo Jeans tingidos com ndigo

Txteis tingidos ou estampados

Bebidas alcolicas

Sucos de frutas
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Justificativa
A utilizao de resduos agrcolas e florestais para produo de enzimas de interesse industrial uma alternativa para as indstrias de biotecnologia obterem lacases com um custo mais baixo em relao as enzimas que esto no mercado, como tambm uma maneira vivel de agregar valor a estes resduos, diminuindo o seu impacto ambiental.

Objetivos
Geral
Aproveitar o resduo slido gerado durante a hidrodestilao de galhos e folhas de trs espcies de Aniba como substrato para a obteno de lacase fngica.

Objetivos
Especficos
Obter o resduo slido gerado durante a hidrodestilao de galhos e folhas de A. parviflora, A. roseadora e A. canellila e utiliz-lo como substrato para o cultivo de um fungo previamente selecionado como bom produtor de lacase; Utilizar um planejamento experimental fatorial fracionado para selecionar as variveis que influenciam significativamente a produo da enzima em meio slido, tais como tempo e temperatura de cultivo, adio de nutrientes e umidade do substrato; Avaliar quantitativamente a atividade enzimtica por meio de tcnica espectrofotomtrica.
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Materiais e Mtodos
Obteno do resduo slido
MATERIAL VEGETAL galhos e folhas das espcies de Aniba

SECAGEM temperatura ambiente 10 dias

TRITURADO (moinho de facas)

LEO ESSENCIAL

HIDRODESTILAO POR ARRASTE VAPOR (Clevenger)

Aparelho Clevenger

RESDUO LQUIDO

RESDUO SLIDO
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Materiais e Mtodos
Obteno do extrato enzimtico
Resduo slido

Fermentao slida

Ultra-som 2 min+ shaker 10 min

Filtrao com bomba a vcuo

fsforo (KH2PO4) 7g nitrognio (NH4NO3)

20 mL gua deionizada autoclavada

Extrato fngico

Inoculao do fungo UEA_105

Incubao em estufa BOD

Atividade enzimtica

Suspenso de esporos
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Materiais e Mtodos
Matriz do planejamento experimental fatorial fracionado 25-1
Ensaio 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 T (oC) 24 (-1) 30 (+1) 24 (-1) 30 (+1) 24 (-1) 30 (+1) 24 (-1) 30 (+1) 24 (-1) 30 (+1) 24 (-1) 30 (+1) 24 (-1) 30 (+1) 24 (-1) 30 (+1) 27 (0) 27 (0) t (dias) 9 (-1) 9 (-1) 15 (+1) 15 (+1) 9 (-1) 9 (-1) 15 (+1) 15 (+1) 9 (-1) 9 (-1) 15 (+1) 15 (+1) 9 (-1) 9 (-1) 15 (+1) 15 (+1) 12 (0) 12 (0) VARIVEIS N (%) 1,5 (-1) 1,5 (-1) 1,5 (-1) 1,5 (-1) 4,5 (+1) 4,5 (+1) 4,5 (+1) 4,5 (+1) 1,5 (-1) 1,5 (-1) 1,5 (-1) 1,5 (-1) 4,5 (+1) 4,5 (+1) 4,5 (+1) 4,5 (+1) 3 (0) 3 (0) P (%) 3 (-1) 3 (-1) 3 (-1) 3 (-1) 3 (-1) 3 (-1) 3 (-1) 3 (-1) 6 (+1) 6 (+1) 6 (+1) 6 (+1) 6 (+1) 6 (+1) 6 (+1) 6 (+1) 4,5 (0) 4,5 (0) U (%) 90 (+1) 70 (-1) 70 (-1) 90 (+1) 70 (-1) 90 (+1) 90 (+1) 70 (-1) 70 (-1) 90 (+1) 90 (+1) 70 (-1) 90 (+1) 70 (-1) 70 (-1) 90 (+1) 80 (0) 80 (0)

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Materiais e Mtodos
Ensaios da atividade enzimtica (Ride, 1980)
EXTRATO ENZIMTICO + Tampo fosfato de potssio Seringaldazina
530 nm

absamostra absbranco
(0,001) x (0,5)

Uma unidade de atividade enzimtica (U) foi definida como a quantidade de enzima necessria para oxidar 1mmol de seringaldazina por minuto por mL de extrato enzimtico.

Anlise estatstica dos dados experimentais

Software Statistica 6.0
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Cronograma
2012 ATIVIDADE Estudo bibliogrfico Obteno do resduo slido por hidrodestilao Cultivo em estado slido Delineamento do planejamento fatorial experimental Apresentao parcial Relatrio parcial Anlise da atividade enzimtica Cultivo em estado slido Anlise estatstica Anlise da atividade enzimtica Anlise final dos resultados Elaborao de um artigo Relatrio final AGO SET OUT NOV DEZ JAN FEV
X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X

2013 MA ABR MAI JUN JUL R

X X X

X
X X

Apresentao final

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Referncias
TAVARES, A. M. P. Produo e lacase para potencial aplicao como oxidante na indstria papeleira. Universidade de Aveiro, Departamento de qumica, 2006.

VAN DER WERFF, H; RICHTER, H. G. Toward and improved classification of Lauraceae. Annals of the Missouri Botanical Grden, v. 8, 419-432. 1996.
IKEHATA, K; BUCHANAN, I; SMITH, D. W. Recent developmens in the production of extracellular fungal peroxidades and laccases for waste treatment. Journal Environmental Engineering and Science, v. 3, p. 1-19, 2004. Krishna, C. Solid-state fermentation sstems- an overview. Crit. Rev. Biotechnol., v. 25 (1-2), p. 1-30, 2005. LEONOWICZ, A.; MATUSZEWSKA, A.; LUTEREK, J.; ZIEGENHAGEM, D.; WOJTA- WASILEWSKA, M.; CHO, N.-S.; HOFRICHTER, M.; ROGALSKI, J. Biodegradation of lignin white-rot fungi. Fungal Genetics and Biology, v. 27, p. 175-185, 1999.
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Agradecimentos

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