DETERMINACIN SEMICUANTITATIVA DE LECTINAS EN LEGUMINOSAS

LECTINAS

Son glicoprotenas de origen no inmune que reconocen de manera especfica carbohidratos de la superficie celular o en suspensin; aglutinan clulas y precipitan glicoconjugados. Se han llamado tambin aglutininas, fitohemaglutininas, hemaglutininas, fitoaglutininas o protectinas.

LECTINAS COMO FACTORES TXICOS

Se han descrito como molculas altamente txicas; causan un dao irreversible en el intestino delgado, que es su rgano blanco. La toxicidad de las lectinas se caracteriza por la capacidad de inactivar los ribosomas. Las lectinas se unen a grupos glicosdicos de las membranas de las clulas epiteliales del tracto digestivo, impidiendo la absorcin de nutrientes, llegando a una necrosis intestinal. No califican como factores antinutricionales debido a que no se unen a un nutriente especfico impidiendo su absorcin.

ESPECIFICIDAD DE LAS LECTINAS

Todas las lectinas poseen dos o ms tipos de unin a carbohidratos, siempre y cuando las estructuras sacridas sean semejantes o similares; dicha especificidad entonces, est dada por el grupo glucosdico que poseen las lectinas.

SENSIBILIZACIN DE ERITROCITOS

Para que la reaccin de aglutinacin se lleve a cabo de manera ms rpida, es necesario elevar la afinidad de las lectinas a los eritrocitos, por lo que al sensibilizar, se busca exponer la parte glucosdica de las membranas celulares de los eritrocitos, modificando la carga de estas, para que de esta manera las lectinas reconozcan ms rpido al carbohidrato.

SENSIBILIZACIN DE ERITROCITOS; TRIPSINA

Al ser una proteasa, la tripsina rompe los enlaces peptdicos de las protenas de la membrana celular de los eritrocitos, de modo que el residuo glucosdico queda expuesto. Otras enzimas que podran utilizarse seran otras proteasas: bromelina, ficina, papana, pronasa y neurominidasa.

FUNDAMENTO DE LA METODOLOGA
Se basa en el reconocimiento de los carbohidratos presentes en las membranas de los eritrocitos, de modo que las lectinas que los reconozcan provocarn su aglutinacin; cuantificando la cantidad mnima de lectinas para causar aglutinacin gracias a la preparacin de diluciones sucesivas de muestra a las que se aadirn los eritrocitos sensibilizados. Se observar la reaccin de aglutinacin de los carbohidratos presentes en las membranas celulares de los eritrocitos por accin de las lectinas.

AGENTES IMPORTANTES EN LA METODOLOGA

Solucin salina isotnica: le dar estabilidad osmtica al medio.

Solucin de tripsina: se utiliza para llevar a cabo la sensibilizacin de eritrocitos.

RESULTADOS
Eq. Muestra Peso (g) Titulo Cantidad de muestra necesaria para causar aglutinacin (g) 23.095 6812.5 19.14

1 2 3 4

Frijol de soya crudo Frijol de soya tostado Carne de soya (guten) Frijol peruano crudo

1.1846 1.0235 5.45 0.9801

10 4 10

5 6
7 8 9 10

Frijol peruano crudo Frijol negro crudo

Frijol negro cocido en lata Frijol negro cocido en casa Garbanzo cocido Garbanzo crudo

1.0054 1.0176
5.0614 5.7225 5.0057 0.9764

10 10
6 6 2 2

19.63 19.875
1581.68 1788.28 25028.5 4882

CLCULOS
Frijol de soya crudo

Tubo Cantidad inicial Cantidad final

1 23650 11825

2 11825 5912.5

3 5912.5 2956.25

4 2956.25 1478.12

5 1478.12 739.06

6 739.06 369.53

10 46.19 23.09

Cantidad de muestra para causar aglutinacin (g)

25 20 15 10 5 0 Frijol de Frijol de soya crudo soya tostado Frijol peruano crudo Frijol Frijol negro peruano crudo crudo 8000 7000 6000 5000 4000 3000 2000 1000 Cantidad de muestra para causar aglutinacin (g) Cantidad de muestra para causar aglutinacin (g)

Cantidad de muestra para causar aglutinacin (g)

0 Carne de Frijol negro Frijol negro soya cocido en cocido en (guten) lata casa

ANLISIS DE RESULTADOS Se determin semicuantitativamente la cantidad necesaria para causar aglutinacin en diferentes leguminosas ya sea con un tratamiento trmico previo o simplemente no se realiz este.

se muestra que las leguminosas que han sufrido un tratamiento previo; la cantidad necesaria para la aglutinacin es alta comparando la cantidad que se requiere para las leguminosas sin tratamiento trmico.

 Esto se debe a que al ser unas protenas (las lectinas), se desnaturalizan por calentamiento, por lo que desaparecen, si las leguminosas se han cocinado correctamente, Ahora bien, un tratamiento trmico inadecuado (a una temperatura del orden de los 80 C) se dice en algunos casos que puede potencializar su efecto txico. En el caso del frijol de soya tostado el cual no se obtuvo ttulo para la determinacin de lectinas puede deberse a que posteriormente del proceso trmico que se pudo haber realizado, el tostado pudo influir an ms para la eliminacin de lectinas.

 La destoxificacin de los alimentos que contienen lectinas es por medio de tratamiento trmico, ya que son de origen protenico. Con los mtodos tradicionales de coccin casero, se puede obtener una adecuada inactivacin de estas protenas txicas; sin embargo, se debe recordar que en regiones de altitud elevada, el punto de ebullicin se abate y puede ser una limitante en el proceso de inactivacin.