Diagnstico Laboratorial das Viroses

Prof: Marcos L. Moreli

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Introduo

Isolamento e Identificao de Vrus

Diagnstico Sorolgico das Infeces

Virais

Diagnstico Molecular de Infeces

Virais

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Introduo

O diagnstico de infeces virais baseado em dois parmetros:

Isolamento e Identificao do vrus:

Atravs de sistemas vivos( cultura de clulas) nos quais os vrus so propagados.

Deteco direta do vrus, antgenos e genomas virais.

Sorologia: So utilizados mtodos para deteco de anticorpos especficos, produzidos pelo hospedeiro em resposta infeco viral.

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Isolamento e Identificao de vrus:

A colheita do material deve ser feita na fase aguda da doena.

O material deve ser transportado imediatamente para o laboratrio, mantido em temperatura baixa( gelo). No entanto, sem congelar. As partculas virais apresentam instabilidade a fatores ambientes.

Quando o material for remetido para locais distantes, deve ser acondicionado em gelo seco.

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Tipos de materiais indicados para exame virolgico

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Isolamento e Identificao de vrus:

Inoculao experimental de vrus em sistemas

hospedeiros

Propagao de vrus em animais de laboratrio

Propagao de vrus em ovos embrionados

Propagao de vrus em culturas de clulas

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Reao

de Hemaglutinao Os vrus se ligam diretamente s hemcias formando agrupamento s visveis.

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Reao de

Hemadsoro Uma suspenso de hemcias adicionada cultura e estas iro se ligar s protenas virais expressas na superfcie das clulas infectadas.

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Diagnstico sorolgico das infeces virais

Finalidades
Diagnosticar uma enfermidade causada por vrus.

Identificar novos tipos de vrus isolados.

Estudar epidemiologicamente o comportamento de

uma virose numa dada comunidade.

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Teste de

Neutralizao
Os vrus infecciosos quando interagem com o anticorpo especfico so neutralizados e por conseguinte perdem a capacidade de infectar clulas permissivas

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Teste de

Inibio da Hemaglutinao A capacidade de hemaglutinao de um vrus bloqueada quando esse vrus reage com o anticorpo especfico

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Teste de Fixao do Complemento
O complemento, um agente ltico, fixado por um complexo AgAc.

1 fase: o Ac, Ag e o complemento so misturados e incubados. 2 fase: O complexo formado por hemciaAc anti-hemcia adicionado a mistura

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Teste de Imunofluorescncia Direta Um conjugado de especificidade conhecida adicinado as clulas infectadas por vrus que esto fixados numa lmina de microscpio, ocorrendo formao de complexo Ag-Ac que visualizado pela imunofluorescncia

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Teste de Imunofluorescncia Indireta 1 fase:Ac no marcados so adicionados a clulas infectadas fixadas a uma lmina de microscpio. Aps incubao, as lminas so lavadas.

2 fase:Um Ac imunoglobulina + fluorescena conjugado e visto a microscopia de fluorescncia

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Teste de Aglutinao Passiva Ag livres so agrupados com partculas carreadoras com Ac especficos

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Teste Imunoenzimtico (ELISA) Ac conjugados com enzimas. O resultado dado pela mudana de cor da reao.

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Immunoblotting - Western Blotting (WB) Blotting significa transferncia de DNA. Separao das protenas virais usando o mtodo de eletroforese em gel.

Diagnstico Laboratorial das Viroses

Diagnstico Molecular de Infeces Virais Deteco Qualitativa do cido Nuclico Viral Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) Reao de Hibridizao