TERAPIA GNICA

Winnie Celorio Raquel Villa

SEPIGEN

DEFINICIN
Reemplazar
Insertar

Reparar

HISTORIA
1978
1 hormona recombinante

Enzima de Restriccin

1 transferencia

1970

1989

HISTORIA
1990

Inmunodeficiencia combinada grave Nios Burbuja Ensayo posterior sin xito

HISTORIA
En 10 aos se trataron 4000 personas
Primera muerte por el uso de terapia gnica Renacimiento 2000 (SCID Ligada al X)

Problemas (Gen LMO2)

TERMINOS

Transgen

Transgnico

Clula transducida

Vector

TIPOS DE TERAPIA GNICA

Introduccin del gen
In vivo Ex vivo

Tipo de clula Somtica Germinal

VECTOR
Debe ser seguro Fcilmente productible

Transferible al tejido diana apropiado

Expresin del gen correcto
VIRICO NO VIRICO

Oncoretrovirus Lentivirus

RETROVIRUS
3 Genes estructurales se sustituyen por el gen a transferir en CD.

Se inserta un nmero bajo de copias del virus

Imposible su replicacin.

DNA integrado es estable. Carecen de toxicidad

Infecta, pero no se multiplica.

Retrovirus
Oncovirus y Lentivirus. Acomodan inserciones de 8 Kb. Dificultad par infectar cels quiescentes (C;H)
La enzima integrasa puede insertar el virus de forma arbitraria

Adenovirus
Potencial/ patognicos.

Terapia gnica in situ

Amplio espectro de CD.

Acomodan inserciones de 35Kb.

Traduce clulas quiescentes.

Virus adenoasociados
No patognicos

Acomodan inserciones de hasta 5Kb.

Amplia variedad de tejidos diana.

Infectan clulas quiescentes

VECTORES NO VIRICOS
ADN EMPAQUETADO EN LIPOSOMAS

Carecen de riesgo biolgico.

ADN DESNUDO

CONJUGADOS DE PROTEINAS ADN

CROMOSOMAS ARTIFICIALES

PROCESO

EJEMPLOS

METODOS FISICO-QUIMICOS
ADN forneo o exgeno integrado en un plsmido (ADN epismico) Sencillos de preparar No limitacin en el tamao del ADN Poco txicos No inmunognicos Baja eficacia de transduccin de las cels diana Mayora solo uso in vitro

METODOS BIOLOGICOS: ADN unido a ligandos de receptores de membrana expresados en clulas diana.

METODOS FISICOS
ELECTROPORACION
Pulsos cortos de alta tensin para transportar ADN a travs de la membrana celular.

Alta tasa de muerte celular.

Forma poros en MC para que entren molculas de ADN.

GEN GUN-PISTOLA DE ADN

Pistola de genes para transfeccin de ADN.

Integracin en lugar equivocado.

ADN recubierto por partculas de oro y se carga en dispositivo.

SOPORACION

Frecuencias ultrasnicas para introducir ADN en las clulas. Proceso de cavitacin acstica.

MAGNETOFECCION

ADN + partculas magnticas. Imn (lleva complejos de ADN en contacto con monocapa de clulas).

METODOS QUIMICOS
OLIGONUCLEOTIDOS
Secuencias cortas de ADN-ARN (Interfiere en transcripcin y traduccin). Administracin directa y su expresin por transfeccin. Secuencias antisentido: AN+ARNm o ARNh Secuencias antign: hibridan al ADN creando secuencias en triple hlice Ribozimas: cataliza enzimtica/ la hidrolisis de secuencias de ARNm

APTAMERO

Forma complejos con protenas celulares y afecta su funcionalidad.

ARNs DE INTERFERENCIA (ARNis-ARNhs)

Molcula de ARN de doble cadena corta (25pb) Cadena complementaria a un ARNm diana, forma dmeros y promueve degradacin por RISC. Mas eficientes, e inestables.

LIPOPLEXOS-POLIPLEJOS Mejora suministro de ADN. Protege de daos (Q+).

DENDRIMEROS A
Macromolculas forma esfrica. Asociacin de acido nucleico a dendrmero. Endocitosis.

METODOS HIBRIDOS
Virosomas (liposomas-virus VIH) Vectores virales-Lpidos catinicos Mejor transferencia gnica

RIESGOS DE LA TERAPIA GENICA

Respuesta adversa frente al vector o vectorenf. respuesta inflamatoria Mutagnesis de insercin tumores malignos - Gen en ARN del paciente y activa un protooncogen/altera gen de supresin tumoral. Inactivacin insercional de un gen esencial

ENFERMEDADES DE SUSCEPTIBLE TRATAMIENTO

Enfermedades monognicas. (cura gen defectuoso-gen funcional) Mutaciones puntuales genoma mitocondrial (acidosis lctica, NOL, miopata)

ENFERMEDAD DEL PARKINSON

3er paso, Obj: +niveles de GABA

Virus con gen que +produccin acido glutmico descarboxilasa (GAD) en Gs basales
Aumento en niveles de GABA

TG ex-vivo, trasplante de clulas que producen dopamina y Fs de crecimiento BDNF, GDNF

ENFERMEDAD DE ALZHEIMER

Apagar gen que causa EA (BACE1). Exosomas administran Fs en el cerebro.

Entrega de cargas a las clulas. Aun no en clulas humanas.

Cuestin tica y tcnica.

FIBROSIS QUISTICA
Liposomas-Adenovirus. Inicio 1990, correccin con xito de gen defectuoso que codifica para el canal de Cl (CFTR) Adicin de copias normales del gen. Clulas del pulmn.

HEMOFILIA
Tipo A y B.

Alteracin de Fr VIII y IX Trangn de Frs y vectores retrovirales, adenovirus, ADN desnudo.

Va SC, IM, IH, IP, IV.

DIABETES
Inhibir molculas dllo DMI: IL 1B, TNFa, IFNg, IL6, ON. Expresin de IL4-previene inflamacin. Inhibe interaccin molculas Fas/Fas-L Produccin de molculas anti-CD40-lig, que activa LsT

Cels no B, que secretan insulina en rta a [G]

CANCER
Destruccin de clulas tumorales
Expresin productos txicos o enzimas activan proFs.

Fortalecer el sistema inmune contra clulas anormales

Potencia SI o modificando clulas cancergenas

Cambio del fenotipo de cels cancergenas

Inhibiendo expresin oncogenes o +genes supresores o suicidas.

Proteccin de clulas normales

Quimio y radioterapia

+ cantidad y citotoxicidad especifica de Ls

IMPLICACIONES ETICAS
Quin decide qu rasgos son normales y cuales constituyen una discapacidad o trastorno? Los altos costos de la terapia gnica, disponible slo para algunos? Podra ser posible el uso generalizado de la terapia gnica para la sociedad? Las personas podrn utilizar la terapia gentica para mejorar los rasgos humanos bsicos tales como la altura, la inteligencia o la capacidad atltica?
NO ES NECESARIO MODIFICAR LINEA DE CELULAS GERMINALES

FUTURO DE LA TERAPIA GENICA

Tratamiento de insuficiencia cardiaca, (diana la protena fosfolambam), aterosclerosis, disfuncin erctil, dolor. Nanotecnologa + TG: Cncer Tratamiento de la ceguera hereditaria. Reingenieria inmune de clulas y uso de Ls. Tratamiento de enf. del sistema mieloide. Liposomas+Genes, recubiertos de PEG: tto EP Tratamiento de Enf. Huntington (silenciamiento genes y degradacin de ARN) [ARN diseado-ARN copiado] Terapia de ARNm, repara errores. Liposomas: transporte de ADN teraputico.

VENTAJAS DE LA TERAPIA GENICA

Persona con VIH, tratamiento del dolor y el sufrimiento de la enfermedad mediante el uso de la terapia gnica para 'silenciar' la enfermedad antes de su aparicin. Eliminar y prevenir las enfermedades hereditarias como la fibrosis qustica y es una posible cura para la enfermedad cardaca, el SIDA y el cncer. Ultima esperanza para muchos pacientes.

DESVENTAJAS DE LA TERAPIA GENICA

Vida corta natural de la terapia gnica. Respuesta inmune: genes inyectados con un virus puede desencadenar una respuesta inmune contra los virus. Problemas con vectores virales (una vez dentro del paciente, el vector viral podra recuperar su habilidad para causar enfermedad).