1

ENZIMAS
Prof Dr ngela de Mattos Dutra
2
ENZIMAS
So protenas que facilitam a
reao entre os reagentes e
aumentam intensamente a
velocidade da reao.
As enzimas atuam diminuindo a
energia de ativao das reaes
qumicas.
3
Enzimas
Com exceo de um pequeno
grupo de molculas de RNA que
possuem atividade enzimtica e
so chamadas de RIBOZIMAS,
todas as enzimas so PROTENAS
4
Enzimas
Protenas especializadas
Aceleram reaes qumicas
5
Enzimas
1 Catalisadores de reaes nos
sistemas biolgicos
2 Grande eficincia cataltica
3 Alto grau de especificidade por
seus substratos
4 Funcionam
em solues aquosas
em pH e temperaturas fisiolgicas
6
Enzimas
Protenas
Ribozimas
RNAs
Simples Conjugadas
Holoenzima
Apoenzima Cofator + apoenzima
Estrutura
Enzimtica
7
Enzimas
Catalisadores
Aumentam a velocidade das reaes
Atuam diminuindo a energia de ativao
8
Caractersticas da enzima
Tem especificidade (atuam sempre com a
mesma substncia).
Exemplos:
gorduras (lipo - grego) - LIPASE
amido (amylon - grego) - AMILASE
protenas - PROTEASE.

9
Enzimas
Importncia Biomdica
Biocatalisadores
regulam as velocidades de todos os
processos fisiolgicos
Papel fundamental na sade e na
doena

10
Sade
Enzimas
Processos
Fisiolgicos
Ocorram de modo ordenado Homeostasia
11
Estados patolgicos
Enzimas do ciclo da uria
Leso tecidual grave
Cirrose Heptica
Prejudica a sntese de enzimas pelo tecido
Amnia
(txica para o organismo)
Uria
(no txica)
COMA HEPTICO
12
Estados patolgicos
Doenas Genticas - EIM
Incapacidade ou capacidade parcial
de sintetizar enzimas
Sintomatologia variada
13
Estados patolgicos
Determinao da atividade de enzimas especficas
no plasma proporciona ao clnico informaes importantes
para o diagntico
Leso cardaca grave
Infarto do miocrdio
Extravasamento de enzimas intracelulares
14
Enzimas - Histrico
Histria da Bioqumica comea
com pesquisas sobre enzimas
Catlise biolgica incio sc.XIX
estmago - digesto da carne
saliva - digesto do amido
Dcada de 30
1830 - amilase ou ptialina
1836 - pepsina e tripsina
15
O nome enzima provm de "in yeasts",
no qual suspeitava-se que as catlises
biolgicas estavam envolvidas com a
fermentao do acar em lcool.
Payen e Persoz em 1833, quando
encontraram uma substncia termolbil
no precipitado do lcool, extrato de
malte, que convertia amido em acar,
mais tarde denominada amilase.
Pasteur em 1860 postulou que as
enzimas esto associadas estrutura e
a vida da clula
16
Dcada de 50 (1850)
Louis Pasteur - concluiu que:
aucar lcool pela levedura
era catalisada por fermentos
inseparveis da estrutura das clulas
vivas do levedo


FERMENTAO
Fermentos foram posteriormente
denominados de ENZIMAS

17
Pasteur ( 1850)
+
fermentos eram inseparveis das clulas
+
Eduard Buchner (1897)
Extratos de levedo (livre de clulas)
AUCAR
fermentao
LCOOL
18
Em 1877 Buchener extraiu enzimas
de clulas de leveduras que
catalisavam a fermentao alcolica
catalisam a maioria das vias
metablicas energticas e podem
funcionar independentemente da sua
estrutura.
Summer em 1926 isolou urease de
feijo e evidenciou que estes cristais
consistem em protenas.
19
Enzimas - Histrico

Incio do Sculo XX
75 enzimas isoladas e cristalizadas
ficou evidenciado carter protico

Atualmente
+ de 2000 enzimas so conhecidas

20
Enzimas - Nomenclatura
No sculo XIX - poucas enzimas identificadas
Adicionava-se sufixo ASE ao nome do
substrato
enzima que hidrolisam
gorduras (lipo - grego) - LIPASE
amido (amylon - grego) - AMILASE
protenas - PROTEASE
Nomes arbitrrios
Tripsina e pepsina - proteases
Catalase - H
2
O
2

21
Enzimas - Nomenclatura
No sculo XX - | quantidade de enzimas
descritas
Nomenclatura existente se tornou ineficaz
Dcada de 60 - IUB - Unio Internacional
de Bioqumica adotou um novo sistema de
nomenclatura e classificao
mais complexo
sem ambigidades
baseado no mecanismo de reao


22
Enzimas - Nomenclatura
Sistema Oficial IUB
Cada enzima - n
o
de cdigo (E.C.-
Enzime Comission) com 4 dgitos
que caracterizam o tipo de reao

1
o
dgito - classe
2
o
dgito - subclasse
3
o
dgito - sub-subclasse
4
o
dgito - indica o substrato
23
Enzimas - Classificao
ATP + D-Glicose ADP + D-Glicose-6-fosfato
IUB - ATP:glicose fosfotransferase
E.C. 2.7.1.1
2 - classe - transferase
7 - sub-classe - fosfotransferase
1 - sub-subclasse - fosfotransferase que utiliza grupo
hidroxila como receptor
1 - indica ser a D-glicose o aceptor do grupo fosfato
Hexoquinase
24
Enzimas - Nomenclatura
N
0
Classe Tipo de reao catalisada
1 Oxirredutases Transferncia de eltrons
(ons hidreto ou tomos H)
2 Transferases Reaes de transferncia de grupos
3 Hidrolases Reaes de hidrlise
4 Liases Adio de grupos em ligas duplas ou
remoo de grupos com a formao de
ligas duplas
5 Isomerases Transferncia de grupos dentro da mesma
molcula para formar ismeros
6 Ligases Formao de ligaes C-C, C-S, C-O, C-N
pelo acoplamento da clivagem do ATP

25
Oxido-redutases (reaes de
oxidao-reduo ou transferncia de
eltrons. Ex: Desidrogenases e
Oxidases)
26
Oxirredutases:transferncia de e-
AH
2
+ B A + BH
2
Exemplo cido Ltico Desidrogenase
COOH NADH NAD
ox
COOH

CO H-C- OH

CH
3
CH
3
cido Pirvico cido Ltico
Lactato desidrogenase
27
1. Oxirredutases transferncia de eltrons
Etanol
Acetaldedo
28
Transferases (transferem
grupos funcionais como amina,
fosfato, acil, carboxil. Ex:
Quinases e Transaminases)
29
Transferases
transferncia de grupos
30
Hexoquinase
31
Exemplo: Aminotransferase - TGP
TRANSFERASES - transferncia de grupos
32
GLICOGNIO SINTASE
33
GLICOGNIO SINTASE
34
HIDROLASES
Lactose
(o-D-glicopironosil-|-D-
galactopiranose )
H
2
O
Glicose + Galactose
Exemplo: Lactase
35
HIDROLASES
Reaes de hidrlise de ligao
covalente. Ex: Peptidases)
36
HIDROLASES:Quimiotripsina
37
LIASES: Fumarases
adio ou remoo de grupos
(H
2
O, NH
4
+
, CO
2
).
38
Liases: Catalisam a quebra de
ligaes covalentes e a remoo de
molculas de gua, amnia e gs
carbnico.
Dehidratases e
Descarboxilases
39
ISOMERASES
Transferncia de grupos dentro da mesma
molcula, formao de ismeros
Triose Phosphate
Isomerase

40
ISOMERASES
Reaes de interconverso entre ismeros
ticos ou geomtricos - Epimerases
41
LIGASES
Reaes de sntese com consumo de ATP
Piruvato carboxilase
42
Ligases (catalisam reaes de
formao de novas molculas a
partir da ligao entre duas pr-
existentes, sempre s custas de
energia. Ex: Sintetases)
43
Formao de um complexo
enzima-substrato
Reao enzimtica = enzima +
substrato complexo
Ligao atravs do stio ativo
Fenda na estrutura protica
especfica
44
Stio de ligao
45
Ao enzimtica: stio ativo
(substrato)
46
47
48
Enzimas
Energia de ativao: Diferena entre os nveis
de energia do estado basal e do estado de
transio
49
Cintica enzimtica
A cintica enzimtica a parte
da Enzimologia que estuda a
velocidade das reaes
enzimticas bem como os
fatores que a influenciam.
50
Cintica enzimtica
Os princpios gerais da cintica das
reaes qumicas aplicam-se s
reaes catalisadas enzimaticamente,
embora estas tambm mostrem um
padro distinto que no usualmente
encontrado nas reaes no
enzimticas: saturao com o
substrato.
51
Modelo chave - fechadura
Enzima + Substrato [Enzima-
substrato]
Enzima + Produto
ETAPA REVERSVEL ETAPA IRREVERSVEL
52
53
Fatores que influenciam na
reao enzimtica
Temperatura: Quanto maior a
temperatura, maior a velocidade
da reao, at se atingir a
temperatura tima; a partir dela,
a atividade volta a diminuir, por
desnaturao da molcula.
54
Fatores que influenciam na
reao enzimtica
pH: Idem temperatura;
existe um pH timo, onde a
distribuio de cargas
eltricas da molcula da
enzima e, em especial do
stio cataltico, ideal para a
catlise.

55
Inibio competitiva
Uma molcula apresenta estrutura
semelhante ao substrato da enzima que
se liga para realizar a catlise, ela
poder aceitar esta molcula no seu
local de ligao, mas no pode levar ao
processo cataltico, pois ocupando o
stio ativo do substrato correto. Portanto
o inibidor compete pelo mesmo local do
substrato.

56
Inibio enzimtica: reversvel
competitiva
57
Inibio no competitiva
Ocorre quando um molcula
ou on pode se ligar em um
segundo local na superfcie
enzimtica (no no stio ativo).
Isto pode distorcer a enzima
tornando o processo cataltico
ineficiente.
58
Inibio no competitiva
O inibidor no competitivo pode
ser uma molcula que no se
assemelha com o substrato,
mas apresenta uma grande
afinidade com a enzima.
o mecanismo inverso do
inibidor competitivo, porque
inibe a ligao do complexo ES
e no da enzima livre.
59
Inibio enzimtica: reversvel
no-competitiva
60
Inibio enzimtica irreversvel
Algumas substncias se ligam
covalentemente s enzimas
deixando-as inativas. Na maioria
dos casos a substncia reage
com o grupo funcional no stio
ativo bloqueando o local do
substrato, deixando a enzima
cataliticamente inativa.
61
Inibio enzimtica irreversvel
Inibidores irreversveis podem ser
extremamente seletivos pois so
semelhantes ao substrato.
So muito utilizados como
resduos, os quais apresentam
grupos de tomos que se
configuram semelhantemente ao
estado de transio que se ligam ao
substrato.
62
Inibio alostrica
63
Papel da enzima no aumento da velocidade
de reao atravs da reduo da ENTROPIA
64
Enzimas
Componentes da Reao Enzimtica
E + S E S E + P
E - Enzima
S - Substrato(s)
ES - Complexo Enzima -Substrato
P Produto(s)
65
Enzimas
Componentes da Reao Enzimtica
E + S E S P + E
Substrato se liga ao
STIO ATIVO
da enzima
66
Enzimas - Via Metablica
Substrato inicial
67
Enzimas
Substratos
Complexo ES (Enzima-Substrato)
Ligao Stio Ativo
Chave-fechadura
Incaixe induzido
Liberao do Produto
+
Enzima inalterada
68
Enzimas
Ligao da Enzima ao Substrato
2 modelos propostos:

Chave-Fechadura
Encaixe Induzido

69

Ligao da
enzima ao
substrato


Modelo
Chave-Fechadura
70
Modelo Encaixe Induzido
Modelo Encaixe Induzido combinado com a tenso do substrato
Enzimas
Modelos de ligao da enzima ao
substrato

73
Centro Cataltico / Stio Ativo
Regio da molcula enzimtica que
participa da reao com o substrato

Pode possuir componentes no proticos
cofatores

Possui aminocidos auxiliares e de contato


74
Enzimas = Catalisadores
Propriedades
Aceleram as reaes
No so consumidos na reao
Atuam em pequenas
concentraes
No alteram o equilbrio das
reaes
75
Enzimas - Propriedades
- Aceleram reaes qumicas
Condies da Reao Energia livre de Ativao
kj/mol kcal/mol
Velocidade
Relativa
Sem catalisador

Platina

Enzima Catalase
75,2 18,0

48,9 11,7

23,0 5,5
1

2,77 x 10
4


6,51 x 10
8

Decomposio do H
2
O
2

76
Enzimas - Propriedades
- No so consumidos na reao
H
2
O
2
H
2
O

O
2
+
Catalase
E + S E + P
ES
77
Enzimas - Propriedades
- Atuam em pequenas concentraes
1 molcula de Catalase
decompe
5 000 000 de
molculas de H
2
O
2

pH = 6,8 em 1 min
Nmero de renovao
TURNOVER NUMBER
78
Enzimas - Propriedades
- No alteram o estado de equilbrio
no nvel basal (forma estvel), S e/ou P contm uma
quantidade caracterstica de energia livre
o equilbrio entre S e P reflete a diferena em energia
livre dos seus estados basais
Caminho da Reao
Energia de ativao sem enzima
S
P
Energia de ativao com enzima
Diferena entre
a energia livre
de S e P
79
Comparao entre a hidrlise de vrios
substratos por:
Catalisador Inorgnico e Enzima
Enzimas- Especificidade
Hidrlise catalisada pelo
HCl a quente


Protenas Aminocidos
Triacilgliceris Glicerol +
c. Graxos
Glicognio Glicose
Hidrlise catalisada por uma
enzima especfica para
o glicognio

Protenas Inalteradas
Triacilgliceris Inalterados
Glicognio Glicose +
Maltose +
Oligossacardeos
ramificados
80
Enzimas
Especificidade Estereoqumica
81
Enzimas
Especificidade de Grupo
Tipo de ligao e um dos fragmentos
devem ser especficos
Ex: maltase digesto de glicdios
Glicose Glicose
Maltose
Metade da molcula deve ser a glicose
Glicose Ex: ose
Frutose
Galactose
Arabinose
Xilulose

82
Enzimas
Cofatores
83
Cofatores enzimticos
Para alguns tipos de processos
biolgicos, apenas a cadeia
protica no suficiente, por isso
a protena requer uma molcula
denominada cofator a qual pode
ser uma pequena molcula
orgnica, denominada coenzima
ou um on metlico.
84
Cofatores enzimticos
Os cofatores so geralmente
estveis em temperatura alta. A
catlise ativa enzima-cofator
denominada holoenzima, quando o
cofator removido, se mantm a
protena, a qual catabolicamente
inativa e denominada apoenzima
85
Cofatores
86
Enzimas - Cofatores
Poro protica
APOENZIMA
Cofator
HOLOENZIMA
on

Coenzima
Grupamento
prosttico
Molculas orgnicas ou inorgnicas que
condicionam a atividade das enzimas
87
Enzimas - Cofatores ons

Cofatores inorgnicos
Exemplos:
Magnsio - Reaes de fosforilao
Mangans- Superxido dismutase
mitocondrial
Zinco - Anidrase carbnica,
Carboxipeptidase
88
Cofatores
Ativadores - ons
Magnsio - co-substrato para o ATP
89
Enzimas - Cofatores
Mg
+2
como Ativador

Hexoquinase - transferncia do fosfato
do ATP para a glicose
90
Enzimas - Cofatores
Coenzimas
Cofatores orgnicos
Maioria deriva de vitaminas hidrossolveis
Classificam-se em:
transportadoras de hidrognio
transportadoras de grupos qumicos
91
Coenzimas
A molcula orgnica que se liga s
enzimas para ativar uma reao,
denominada coenzima, cada tipo
apresenta uma funo qumica
particular, algumas so agentes
oxi-redutoras, outras transferidoras
etc.
92
Coenzimas
NAD/NADP
+
93
Coenzimas: oxidao e reduo

94
Coenzimas: ATP - ADP
95
Coenzimas: processos
endergnicos e exergnicos
96
Coenzimas transportadoras de
hidrognio
Coenzima Abreviatura Reao
catalisada
Origem
Nicotinamida adenina
dinucleotdio
NAD
+
Oxi-reduo
Niacina ou
Vitamina B
3
Nicotinamida adenina
dinucleotdio fosfato
NADP
+
Oxi-reduo
Niacina ou
Vitamina B
3
Flavina adenina
dinucleotdio
FAD Oxi-reduo
Riboflavina ou
Vitamina B
2
97
NAD
+
Nicotinamida
adenina
dinucleotdio (B3)
98
FAD Flavina Adenina Dinucleotdio (B2)
99
Exemplo da ao do FAD como coenzima
Reao da sucinato desidrogenase
100
Coenzimas transportadoras
de grupos qumicos
Coenzima Abrev. Reao catalisada Origem
Coenzima A CoA-SH
Transferncia de
grupo acil
Pantotenato ou
Vitamina B
5
Biotina
Transferncia de
CO
2
Biotina ou
Vitamina H
Piridoxal fosfato PyF
Transferncia de
grupo amino
Piridoxina ou
Vitamina B
6
Metilcobalamina
Transferncia de
unidades de carbono
Cobalamina ou
Vitamina B
12
Tetrahidrofolato THF
Transferncia de
unidades de carbono
cido flico
Tiamina
pirofosfato
TPP
Transferncia de
grupo aldedo
Tiamina ou
Vitamina B
1
101
Sntese da CoA
+
4-fosfopantotenato
+
4-fosfopantotenoilcistena
+
4-fosfopantetona
+
Defosfocoenzima A
+
(B
5
)
forma ligaes com grupamentos acil ( -C R )
O
102
Piridoxal fosfato (B
6
)
Coenzima: Transaminao
Descarboxilao
Desidratao