Gentica y Biologa Molecular en Bioqumica

Flujo de la informacin gentica esta basada en secuencias biologicas DNA CCTGAGCCAACTATTGATGAA

GENOMA Genotipo Flujo de la

transcripcin RNA CCUGAGCCAACUAUUGAUGAA

TRANSCRIPTOMA

EPIGENETICA ?
traduccin Protena
Fenotipo

informacin

PEPTIDE
PROTEOMA

Eventos que determinaron y caracterizaron al material hereditario

1866 Gregor Mendel Publico sus resultados sobre los factores

de la herencia.

1868 descubrimiento de la nucleina (DNA) Friedrich Miescher

En 1902 Archibald Garrod describe la ALCAPTONURIA como

inborn errors of metabolism, error congnito del metabolismo.

Primera enfermedad descrita como ligada a la herencia. Enfermedad Autosomica recesiva. 1902 Walter Sutton Interrelaciona la citologa y el Mendelismo (morfologa & herencia). Cromosomas

son unidades hereditarias. Esta teora tambin fue desarrollada por Theodor
En 1908, HardyWeinberg describe el principio de gentica de poblacin, en el clculo

Boveri

de la

frecuencia de desordenes autosomicas recesivas

En 1928, Fred Griffith describi el llamado fenmeno de de neumococos.

transformacin

Neumococos R derivados del tipo II vivos junto con un inoculo del tipo III S inactivados por calor

live S strain

En 1944 se demostr que el principio

transformante el DNA

descrito por F Griffith era

Oswald Avery Colin McLeod

Maclyn McCarty

1950 Erwin Chargaff Determino que los organismos vivos presentan una razn constante entre Adeninas con Timinas y Guaninas con Citocinas.

1951 Rosalind Franklin Obtuvo las fotografias de difraccin de rayos X del DNA

Rosalind Franklin

Maurice Wilkins

1952 Martha Chase y Alfred Hershey empleando bacteriofagos marcados con 35S y 32P demostraron que el DNA es una molcula hereditaria

1953 Francis Crick y James Watson resolvieron la estructura tridimensional del DNA.

1958 Matthew Meselson y Frank Stahl empleando isotopos demostraron la propiedad

semiconservativa de la replicacin del DNA.

Flujo de la informacin del Genotipo al Fenotipo

Expresin de genes:Transcripcin y traduccin ocurren simultaneamente en procariotes

5 3

RNA Pol.
Ribosome Ribosome

mRNA
5

Flujo de la informacin del Genotipo al Fenotipo Expresin de genes en eucariotes

Citoplasma
DNA

Transcripcin
RNA

Procesamiento de RNA
mRNA
G
AAAAAA

AAAAAA

Nucleo

Exportacin

Estructura gnica mostrando reguladores de la expresin gentica

PROCARIOTES
Represor 5 Operador Gen A Gen B 3

ATG

TAA

ATG

TAA ATG
Spacer

TAA

Secuencia -10 Secuencia -35 Inicio de la transcripcin

EUCARIOTES
Regin flanqueante 5
GC box CAAT box GC box Exon I Exon II

Regin flanqueante
Intron II Exon III

Intron I

3 ATG
TATA box

GT

AG

GT

AG

TAA

AATAA
Inicio de transcripcin

En sistemas eucariotes:
Elementos Cis-actuantes es una secuencia especial de DNA que puede afectar la expresion de un gen.
start
B

structural gene

Factores Trans-actuantes

DNA

mRNA
A

protein A

Informacin gentica
Genoma La coleccin de la informacin gentica de un organismo. Cromosomas Unidad de almacenaje de los genes. Gen Unidad bsica de la informacin gentica. Los genes determinan los caracteres hereditarios DNA - es el acido nucleico que contiene las instrucciones gentica especificas para el desarrollo de las formas de vida celular
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2 cromosomas sexuales (X,Y): XY hombres. XX mujeres. 22 pares de cromosomas autosomicos.

Genoma Humano

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Gentica Medica
Patrones generales de herencia observados:
Autosomica recesiva Autosomica dominante Recesivo ligado a X Dominante ligado a X Codominante

Mitocondrial

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Autosomica recesiva La enfermedad aparece en nios hombres y mujeres de padres no afectados que son portadores, Fibrosis quistica
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Bases moleculares del albinismo (enfermedad autosmica recesiva)

Autosomica dominante Aparecen hombres y mujeres afectados en cada generacin del arbol fenotipico (pedigree). Madres afectadas o padres afectados trasmiten la caracteristica a sus hijos e hijas. e.g., enfermedad de Huntington.
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Recesiva Ligada a X Por lo general los hombres muestran la afeccin. Todas las hijas de un padre afectado son portadoras. Ninguno de los hijos de un padre afectado muestra el desorden o es portador. e.g., hemofilia

21

Dominante ligado a X Los padres afectados pasan el desorden a sus hijas pero no a sus hijos . Una madre afectada pasa la condicion a la mitad de sus hijas e hijos e.g. Sindrome del cromosoma X fragil

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Herencia Codominante
Dos diferentes versiones de alelos de un gen pueden ser expresados. Y cada version hace una protena ligeramente diferente Ambos alelos influyen en la genetica o determinan la caracteristica de una condicion genetica. E.g. ABO locus
Antgeno A

Glbulos rojos de una persona tipo A

Anticuerpos Anti-A

Aglutinacin de gl. rojos tipo A

Antgeno B No hay aglutinacin de gl. rojos tipo B

Glbulos rojos de una persona tipo B Anticuerpos Anti-A

Glbulos rojos de una persona tipo AB

Anticuerpos Anti-A

Aglutinacin de gl. rojos tipo AB

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Base bioqumica de los grupos ABO

N-acetilgalactosamina adicionada al precursor

alelo A (

IA)

Antgeno A; reacciona con anticuerpos anti-A

alelo O (i) Antgeno H; no reacciona con anticuerpos anti-A ni anti-B alelo B ( IB)

Carbohidrato precursor

Los alelos A y B producen transferasas distintas (que modifican de distinta manera la galactosa terminal del compuesto precursor) y el alelo O no produce ninguna.

Galactosa adicionada al precursor

Antgeno B; reacciona con anticuerpos anti-B

N-acetilglucosamina

Galactosa

N-acetilgalactosamina

Fucosa

Tipo sanguneo A B AB

Genotipo IAIA o IAi IBIB o IBi IAIB

El alelo i es nulo, es incapaz de producir cualquier forma del antgeno. Alelos A y B son dominantes sobre el alelo i. Alelos A y B son codominantes entre s.

ii

Grupo O es donante universal (no contiene antgenos ni A ni B). Grupo AB es receptor universal (no produce anticuerpos contra el antgeno A ni el antgeno B).

Mitocondrial Se aplica a genes del DNA mitocondrial Desordenes mitocondriales pueden aparecer en cada generacin de una familia y pueden afectar a hombres y mujeres, pero los padres no transfieren mitocondrias a sus hijos. E.g. Neuropatia optica hereditaria de Leber (LHON)

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Bases moleculares de los desordenes genticos

Alelo nulo:

aquel que lleva a la ausencia del producto gnico normal (ej m6) o a la desaparicin fenotpica de la funcin normal (ej m2 y m3).

Los alelos nuevos formados por mutacin pueden resultar en la prdida total o parcial de la funcin, o de la ganancia de ms funcin o incluso adquisicin de una nueva funcin a nivel proteico.

Alelismo mltiple: existencia de varios alelos conocidos de un gen.

Serie allica: conjunto de alelos de un gen.

Ej. PKU: enfermedad autosmica recesiva generada por el procesamiento anormal del aa fenilalanina por parte de la enzima fenilalanina hidroxilasa (PAH).

Estructura de la PAH y las mutaciones encontradas

Ej. Anemia falciforme humana

Origen Tipo de Hb presente Genotipo Fenotipo Portador Anemia falciforme Normal

SyA S A
Migracin

HbSHbA HbSHbS HbAHbA

Respecto a la anemia: alelo HbA es dominante.

HbAHbA: Normal. Los gl. rojos no se deforman nunca. HbSHbS: Anemia grave, a menudo mortal. La Hb anormal causa que los gl. rojos adquieran forma de hoz. HbSHbA: No se produce anemia. Los gl. rojos se deforman slo a concentraciones de O2 anormalmente bajas.

Respecto a la forma de los glbulos rojos: existe dominancia incompleta de HbA Respecto a la sntesis de Hb: hay codominancia.

Diagnostico gentico

Tipos de enfermedades genticas

Gene nico (mendeliano) Patrn hereditario claro Alto riesgo a familiares Multifactorial Desorden comn El patrn hereditario no es claro Bajo o moderado riesgo a familiares Cromosomicos En su mayora raras Patrones no claros de herencia Usualmente de bajo riesgo a familiares Mutaciones somaticas Causa de neoplasia

Razones ms comunes para el anlisis citogentico postnatal Los recin nacidos con defectos congnitos Los nios con problemas de aprendizaje Los nios con rasgos dismrficos reordenamiento cromosmico familiar en familiares Infertilidad abortos involuntarios recurrentes prenatal Anomalas en la ecografa Aumento del riesgo de sndrome de Down (edad de la madre o busqueda bioqumico) hijo con una anomala cromosmica Un padre lleva a una anomala estructural cromosmica

Razones para el anlisis gentico molecular Cystic fibrosis Haemoglobinopathies Duchenne and Becker muscular dystrophy Myotonic dystrophy Huntington disease Fragile X syndrome Spinal muscular atrophy Spinocerebellar ataxia Hereditary neuropathy (Charcot-Marie-Tooth) Familial breast cancer (BRCA 1 and 2) Familial adenomatous polyposis

Estructura genmica
Mapeo gentico Tcnicas genticas, cruces o pedigrees Calculo de la distancia basada en la frecuencia de recombinacin. Mapeo Fsico Evaluacin directa de la posicin relativa de una secuencia caracterstica en pares de bases

Las distancias del mapa genetico son solo aproximaciones de las distancias reales a lo largo del cromosoma

Anlisis genticos : Bsqueda de marcadores genticos

Estructura Cromosomica de eucariotes

Eukaryotic Genomes Unique Sequence Highly Repetitive Satellite DNA (Centromeres/Telomeres) Repetitive Sequence Middle Repetitive Tandem Repeats

Interspersed Retrotransposons

Multicopy Genes

Mini-satellites

Micro-satellites

SINES

LINES

Short interspaces element rRNA genes VNTRs Dinucleotides Alu

Large interspaces element L1

Polimorfismo
Marcadores moleculares Uni locus (buenos porque son estticos se mapea un gen en una posicin sobre el cromosoma) Multilocus (buenos para el anlisis completo del genoma y anlisis filogentico)

 Marcadores Moleculares: Basados en la hibridacin DNA-DNA

RFLP VNTR

Basados en PCR
Usando primers especficos STR

Basados en PCR y cortes por enzimas de restriccin

AFLP

Basados en puntos de mutacin en el DNA

SNP detectados por SSCP, DNA chip, secuenciamiento

 Diagnostico basado en deteccin de cidos nucleicos Amplificacion ADN Hibridacion ADN

Forensic Genetics: Useful Genetic Loci

Jobling and Gill (2004) Nature Reviews Genetics 5:739-751

 PNA FISH Evolucin de una sonda de nucletidos a una sonda de acido nucleico peptdico PNA es un oligomero sinttico que imita la estructura del DNA o el RNA, la carga negativa del esqueleto azcar fosfato es remplazada por una molcula sin carga N-(2 aminoetil) glicina al cual se une la base nitrogenada por un enlace metilen carbonil Son menos susceptibles de inhibicin por impurezas en diferentes muestras clnicas a comparacin de los mtodos basados en amplificacin

STR and VNTR Typing: PCR Amplification of Repeat Loci

Molecular Biology of the Cell, 4th Edition, pg511

STR and VNTR Typing: Mendelian Inheritance of Repeat Loci

Repeats Parents

Progeny

Typing a Forensic Sample

Molecular Biology of the Cell, 4th Edition, pg511

Forensic STR Profile Comparison: How Many Loci are Needed?

Nine Repeat Loci and Sex

What is a probability match and what does it mean?

Polimorfismo por SNP

Polimorfismo con arreglos de DNA