Sunteți pe pagina 1din 59

ACIZII NUCLEICI

Caractere ereditare

Factorii genetici

Mediu ambiant

Genotipul

Fenotipul

INFORMAIA GENETIC

GENOM ACIZI NUCLEICI ADN ARN

Acizi nucleici

ADN acidul dezoxiribonucleic

ARN acidul ribonucleic

Acizi nucleici sunt polinucleotide, alctuite din mononucleotide, unite prin legturi 3, 5fosfodiesterice.

Coninutul AN n celule depinde de starea lor fiziologic. n spermatozoizi se conin 60% de ADN n muchi - 0,2% n rest esuturilor 1-10% Coninutul ARN este 5-10 ori mai mare dect cel al ADN. Raportul ARN/ADN este mai mare n celulele ce sintetizeaz activ proteina, de exemplu ficat, pancreas, esuturile embrionale (acest raport este de 4-10, comparativ cu alte esuturi unde este de 0,32,5). Masa molecular a AND-ului la bacterii este 2109, la om i animale ajunge la 1011 Masa molecular a ARN este mult mai mic dect a ADN-ului.

Acizii nucleici

ADN
a. b. Localizarea: 97-99% - concentrat n nucleu 1-3% - situat n mitocondrii ;I cloroplaste. Rolul: pstreaz i transmite informaia genetic de la ADN parental la ADN fiic sau ARN.

ARN
1. 2. 3. Localizarea: 11% - n nucleu 15% -n mitocondrii 50% - n ribosomi 24% - n hialoplasm Deosebim:i: ARN mesager ARN ribozomal ARN de transport ARN cromosomial ARN nuclear

Acizi nucleici
ADN acidul dezoxiribonucleic Dezoxiribonucleotide d -Adenozinmonofosfat (dAMP) d-Guanozinmonofosfat (d GMP) d-Citidinmonofosfat (dCMP) d-Timidinmonofosfat (dTMP) Nucleozide + H3PO4 Dezoxiribonucleozide d -Adenozin d-Guanozin d-Citidin d-Timidin Adenina + dezoxiriboza Guanina Citozina Timina Baze azotoase + pentoz Ribonucleozide Adenozin Guanozin Citidin Uridin Adenina + riboza Guanina Citozina Uracil ARN acidul ribonucleic

Nucleotide
Ribonucleotide Adenozinmonofosfat (AMP) Guanozinmonofosfat (GMP) Citidinmonofosfat (CMP) Uridinmonofosfat(UMP)

Bazele azotate
a. BA se clasific n : 1. majore: purinice: A, G i pirimidinice: C,T,U 2. minore:purinice (2metil A; 1 metilG) i pirimidinice (5 metil C;5 hidroximetil C) b. Sunt slab solubile n H2O c. Prezint fenomenul de tautomerie (forme lactim-lactam) d. Sunt responsabile de informaia genetic e. BA purinice- au structur plan; cele pirimidinice- aproape plan, puin plat j. Max capacitii de absorbie n ultraviolet este ntre 260-280 nm

Bazele azotate

PURINICE

PIRIMIDINICE

Baze azotate minore

Pentoze

Nucleozidul
const dintr-o BA ( purinic sau Pirimidinic) +o pentoz (riboza sau dezoxiriboza). Nucleozidele se refer la N- Glicozide, n care atomul C-1 al pentozei este unit cu N-9 al purinei sau N-1 al pirimidinei - leg. N glicozidic n funcie de pentoz: dezoxi i ribonucleozide BA purinice +Riboza sau dezoxiriboza --- au terminaia ozin Ex. adenozin, guanozin sau dezoxiadenozin, dezoxiguanozin BA pirimidinice +riboza sau dezoxiriboza --- au terminaia idin Ex. citidin, timidin, uridin sau dezoxicitidin etc.

Unite ntre ele prin legtura N glucozidic

Nucleozide

Dezoxiribonucleozide Adenina + dezoxiroboza =dAdenozin Guanina + dezoxiroboza= dGuanozin Citozina + dezoxiroboza =dCitidin Timina + dezoxiriboza =dTimidin

Ribonucleozide Adenina + riboza =Adenozin Gunanina + riboza=Guanozin Citozian +riboza= Citidin Uracil + riboza=Uridin

Nucleozidele
Proprietile: Mai solubile n H2O dect Bazele azotate Mai stabile n soluii alcaline Uor se hidrolizeaz la nclzire cu acid

NUCLEOTIDE
-compui alctuii din nucleozide i rest de acid fosforic. -Deosebim ribonucleotide i dezoxiribonucleotide
Fosfatul poate fi adiionat n diferite poziii ale gruprii OH ale inelului pentozei. n ribonucleotide poziia 2,3, 5 n dezoxiribonuleotide poziia, 3, 5

Rest al acidului fosforic

Nucleozid

n nuleotidele libere, restul de fostat este adiionat n poziia 5 Alungirea captului fosfat prin adiionarea gruprilor suplimentare de fosfat duce la formarea nicleozidpolifosfailor, i anume: Nucleozid mono-; di-; trifosfafat

Timidinmonofosfat nucleozidmonofosfat

Cel mai frecvent n celul se gsesc nucleoziddifosfaii i nucleozidtrifosfaii.

Dezoxiribonucleotide
d Adenozin mono, di, tri fosfat (dAMP, dADT, dATP) d-Guanozin mono, dt, tri fosfat (d GMP, dGDP, dGTP) d-Citidin mono, di, tri fosfat (dCMP, d CDP, dCTP) d-Timidin mono, di, tri fosfat (dTMP, dTDP, dTTP)

Ribonucleotide

Adenozin mono, di, tri fosfat (AMP, ADT, ATP) Guanozin mono, di, tri fosfat (GMP, GDP, GTP) Citidin mono, di, tri fosfat (CMP, CDP, CTP) Timidin mono, di, tri fosfat (TMP, TDP, TTP)

Nucleotide - Rolul
1. Element structural al AN 2. Intermediari energetici (ATPpurttorul energiei chimice n organism) 3. Intr n componena CoEn 4. Servesc ca activatori ai unor molecule (UDP-Gl; CDP-colina) 5. Servesc ca mesageri secunzi intracelulari ai hormonilor (AMPc; GMPc)

Toate nucleotidele se gsesc n celul sun form de anioni, de aceea adenozinfosfaii, ar fi corect de notat, dup cum urmeaz: AMP2-, ADP3-, ATP4-. ADP i ATP sunt compui macroergici, adic bogai n energie, care se utilizeaz de ctre organism pentru asigurarea diverselor funcii. Restul de nucleozid di i trifosfai de asemenea particip n reaciile de sintez a substanelor. Derivaii nucleotidelor. Printre derivai ai nucleotidelor deosebim: -Nucleotidele ciclice (3, 5- AMP, i 3, 5 GMP) , care sunt reglatori universali ai metabolismului n interiorul celulei, funcionnd ca mesageri secundari). -- Un grup mare de derivai ai nucleotidelor servesc ca coenzime a diverselor enzime, participnd n reaciile de transformare a substanelor.

Nucleozide i nucleotide rare


Pe lng nucleozidele i nuleotidele, care conin bazale azotate principale sunt nucleozide i respectiv nuleotide care conin baze azotate rare, sau minore. Majoritatea acestora se conin n ARNt, cele mai frecvente sunt: dihidrouridina, pseudouridina (se noteaz ) i ribotimidina (5-metil uridina). n pseudouridin lipsete legtura N-glicozidic. Atom C1 de carbon al ribozei se leag de C-5 a uracilului.

Structura AN

Structura primar a AN
Reprezint secvena mononucleotidelor n lanul polinucleotidic liniar, legate ntre ele prin legturile 3' - 5' fosfodiesterice Catenele au dou capete: 5 nucleozid tri fosfatul; 3 gr. OH liber

Structura primar
Structura primar a ADN i ARN se numete catena liniar polinucleotidic, n care mononucleotidele sunt legate prin legturi 3, 5 fosfodiesterice. Principiul structurii primare a ADN i ARN este identic: fiecare 3 hidroxigrup a pentozei a unui mononucleotid este unit prin legtur covalent cu 5 hidroxigrupa pentozei altui mononucleotid. De aici denumirea, legtura 3, 5 fosfodiesteric. Catenele liniare ale ADN i ARN, lungimea crora depinde de numrul mononucleotidelor constituiente, au dou capete: unul 3, iar altul 5. Deoarece materialul iniial (nucleotidele) pentru asamblarea catenelor AN n celul este prezentat prin nucleozidtrifosfai, atunci captul 5 conine trifosfat, iar captul 3 grupa OH liber. Catenle AN sunt polare. Pot avea direcie 53 i 3 5. Excepie fac ADN i ARN inelari din unele virusuri i bacterii. Textul genetic al ADN este compus din cuvinte codificate, care prezint triplete de nucleotide, numite codogene. Consecutivitatea nucleotidelor n AR este aceiai ca i la ADN de reproducere cu diferena c const din ribonucleotide, iar n locul timinei este uracilul. Structura primar a ARNm este copiat de pe sectorul de ADN, care conine informaia despre structura primar a catenei polipeptidice a ARNm, iar a ARNt, ARNr i ARN rare copia final a fragmentelor de ADN care conin programa genetic respectiv ,

Structura secundar a ADN


Erwin Chargaff (1949) studiind componena ADN a stabilita legitile principale, privind bazale azoate n el, care au contribuit la stabilirea structurii secundare a ADN. Aceste legiti au primit denumirea de regulile lui Chargaff.

1.
2. 3.

4.
5. 6. 7. 8. 9.

Coninutul adeninei este egal cu al timinei, iar al guaninei cu al citozinei (A=T, iar G=C) n orice preparat de ADN independent de specie suma bazelor purinice este egal cu cea a bazelor pirimidinice (A+G=T+C) Preparatele de ADN separate din diferite esuturi a uneia i aceiea specie de organisme sunt absolut identice privind componena nucleotidic. Componena nucleotidic a DNA la aceeai specie nu se modific odat cu vrst, nu depinde de regimul alimentar i modificrile mediului. dac A+T este mai mare dect G+T avem DNA de tip AT dac G+T este mai mare dect A+T avem DNA de tip GT t de topire este mai mica cnd predomin perechile A-T t de topire este mai mare cnd predomin perechile G-C la eucariote ADN mitocondrial este circular.
Aceste reguli arat, c la formarea ADN-ului trebuie respectat mperecherea strict anume a adeninei cu timina i a citozinei cu guanina.

Structura secundar a ADN


Watson i Crick (1953) au postulat modelul structural al moleculei de DNA - dublul helix (spiral dubl) Caracteristicile dublei spirale:
2 lanuri polidezoxiribonucleotidice se rsucesc helicoidal n jurul unui ax comun, formnd o dubl helice cu orientare spre dreapta; Cilindrul ce ncadreaz dublul helix are d=2nm

1.

2.

Structura secundar a ADN


3. Lanurile sunt antiparalele (unul are direcia 53, altul 35) 4. Complementaritatea (A i corespunde T; iar G-C). 5. Stabilitatea dublului helix este asigurat att de interaciunile hidrofobe dintre BA, ct i de legturile de hidrogen ntre BA (A=T formeaz 2 legturi de hidrogen, iar G C trei legturi). Bazele azotate n molecula de ADN sunt aezate sub form de teanc de monede; ntre planurile bazelor azotate apar interaciuni Van-der-Waals 6. BA hidrofobe sunt situate n interiorul spiralei duble i aranjate sub form de stive, pe cnd complexul pentozofosfat este situat la exteriorul spiralei duble, bine interacioneaz cu apa, de aceia molecula gigant de DNA se dizolva n ap. 7. Spiral este regulat (fiecare spir cuprinde 10 nucleotide). Distana dintre BA nvecinate este de 0,34 nm, perioada de identitate (pasul) 3,4 nm. 8. La pH=7 grupele fosfat sunt ionizate, poarta sarcini negative, de aceea ADN prezint acid puternic. 9. Dublul helix este de tip plectonemical, dar nu paranemical
Sunt cunoscute spirale de 2 tipuri: -Paranemice (componentele se despart fr o despiralizare preliminar ) -Plectonemice (componentele se desfac numai dup despiralizare, deoarece sunt strns interconencate .

Exist diferite forme de DNA


- care sunt determinate de gradul de dehidratare a acizilor nucleici: A,B i Z. Modificrile n dublul helix sunt dependente de anturajul extern ai moleculei de DNA. Dublul helix posed dinamism. forma A: - conine 11 resturi la o spir, - este rsucit spre dreapta. forma clasica B: - conine 10 mononucleotide la o spir. - este rsucit spre dreapta. - 10 nucleotide ocup 34 A (3,4 nm). - o nucleotid cuprinde 3,4A (0,34 nm). conformatia Z spre deosebire de A i B este rsucit spre stnga.

ADN cromozomial spiralizarea este ntrerupt n anumite sectoare numite palindromi. n aceste fragmente succesiunea nucleotidelor de-a lungul catenei este identic de la dreapta spre stnga i invers, la fel ca literele n cuvntul capac. Bazele azotate n palindromi se mperecheaz formnd structuri n form de cruci sau agrafe. Aceste structuri asigur proprietatea proteinelor reglatoare de a cunoate locul transcrierii informaiei genetice de pe ADN cromozomial.

Structura teriar
Se formeaz la rsucirea suplimentar a moleculei bispiralate n spaiu. Are form de supraspiral sau spiral dubl curbat. La superspiralizarea dublului helix particip proteinele histonice i formeaz cromatina Unitatea structural a cromatinei este nucleosomul Nucleosomul este un octamer histonic (2H2a; 2H2b; 2H3; 2H4) nfurat de aproximativ de 2 ori de dublul helix cu o lungime de 146 perechi de nucleotide. ntre 2 nucleosmi se conin poriuni de ADN alctuit din 20-60 perechi de nucleotide asociate cu H1 Lanul polinucleosomic formeaz un superhelix (solenoid), fiecare spir are 10 nucleosomi, d=30nm i pasul de 10nm

La organismele superioare AND se conine n cromozomi, care au diferite forme n dependen de strangulaia central i posed o organizare structural complicat. n fiecare cromozom se conine o singur molecul gigant de ADN (masa molecular este de circa 1011, iar Lungimea liniar de civa cm) , care constituie baza cromatinei. Cromatina prezinr o structur supramolecular, n care spirala dubl de ADN este conjugat cu proteinele, cantiti mici de ARN i substane minerale. Raportul componentelor cromatinei este: ADN - 30-45%, histone- 30-50%, proteine nehistonice- 4-33%; ARN- 1,5-10%. Organizarea structural a cromatinei este de aa natur c ea permite de a utiliza una i aceiai informaie genetic a ADN-ului caracteristic speciei date n mod diferitn celulele specializate. Cota parte a cromatinei este inactiv, coninnd ADN mpachetat compact. Cromatina activ n diferite celule constituie 2 -11% (n ficat (3-4%, n rinichi 2-3%). La microscopul electronic imaginea cromatinei amintete mrgelele: ngrori sferice numite nucleosome cu dimensiune de 10nm desprite de strangulaii filiforme. Fiecare nucleosom conine un sector al moleculei bispiralate de ADN avnd o lungime egal cu 140 de perechi de baze azotate i opt molecule (octoamer) de histone. n fiecare nucleosom se conin cte dou molecule de histone de fiecare tip H2a, H2b, H3, H4. n locul strangulaiei filiforme spirala dubl de ADN conine 30-60 perechi de baze azotate i este asociat cu histonul H1. Lungimea strangulaiilor n diferite celule variaz. Gradul de mpachetare a ADN n nucleosom este egal cu 5, adic lungimea catenei se micoreaz de 5 ori. Modul de legare a ADN cu nucleosoma este urmtorul: S-a constatat c spirala dubl a ADN nfoar suprafaa nucleului proteic ( octamerului) al nucleosomei formnd structur teriar. n locul ndoiturilor, spirala dubl se curbeaz perturbnd spirala clasic dubl a ADN -ului. Gruprile fosfat ce poart sarcin negativ se fixeaz pe moleculele histonelor. Acelai proces are loc i pe punile filiforme cu histonul H1. Aproximativ 90% din ADN intr n componena nucleosomelor, iar restul revine punilor. Se consider c nucleosomele reprezint fragmente cromatinice tcute (genetic inactive), iar punile sunt genetic active. Nucleosomele, ns pot s se desfoare trecnd n form liniar, genetic activ. Proteinele nehistonice sunt mult mai variate. Au fost separate mai mult de 590 de fracii proteice nehistonice, care se mai numesc i proteine acide, deoarece n structura lor predomin aminoacizi acizi. Se presupune c ele particip la reglarea specific a activitii cromatinei. Toat catena nucleosomic, care conine proteine nehistonice i ARN, se spiralizeaz n repetate rnduri, mpachetnduse n cromozom sub form de solenoid

DNA

Compactizarea cromatinei
Firul de cromatin? ~ 1,000

30 nm Solenoid ~40 / 50

Nucleosoma = ctamer de histone H2a, H2b, H3, H4 146 / 200 bp DNA Compactizare ~10 ori

Cromosoma metafazic/ cromatina interfazic ~ 10,000

Acizii ribonucleici

ARN mesager (ARNm)

Este o molecul intermediar, ce reprezint o copie a unei din cele 2 catene a moleculei de ADN li particip la translarea informaiei de la molecula de ADN, la catena polipeptidic

ARN de transfer (ARNt)

Este un intermediar n sinteza proteinelor. Fiecare molecul de ARNt are o zon de 3 nucleotide numit anticodon, iar la partea opus la unul din capete se leag un anumit aminoacid

ARN ribosomal (ARNr)

Este un component al ribosomilor, fiind totodat un intermediar n sinteza proteinelor

Structura secundar i teriar a ARNm


ARNm se formeaz n celul din precursorul su pre ARNm, care conine copiile palindromilor ADN. De aceea structura lui secundar conine agrafe i sectoare liniare. n procesul de maturare agrafele din pre ARNm sunt tiate cu ajutorul enzimelor formndu-se ARNm. Structura secundar a ARN m prezint o caten curbat, iar cea teriar se aseamn cu un fir, nfurat pe o bobin, rolul creia este asigurat de o protein special de transport, numit informer.

Elementul de codificare al ARNm este tripletul nucleotidic numit codon. Fiecare codon corespunde unui anumit AA

Structura secundar a ARNt


1. Are infiarea unei "frunze de trifoi" - se formeaz n urma imperecherii complementare intracatenare a nucleotidelor anumitor sectoare. Sectoarele, care nu sunt ncadrate n formarea legturilor de H formeaz lanuri sau bucle Sectorul de acceptare (4 nucleotide, 3 din care au aceeai succesiuneCCA cu hidroxilul 3OH al adenozinei este liber la care se fixeaz grupa COOH al AA ,care este transportat spre ribosomi, unde are loc sinteza proteinelor. Bucla anticodonic - format din 7 nucleotide. Conine un triplet nucleotidic specific pentru fiecare ARNt numit anticodon. Anticodonul ARNt dup principiul complementarittii se mperecheaz cu codonul respectiv din ARNm. Interaciunea codon-anticodon determin ordinea aranjrii aminoacizilor n catena polipeptidic. Bucla pseudouridilic (sau laul T C ) const din 7 nucleotide (restul acidului pseudouridilic este obligatoriu), particip la interaciunea cu ribozomii. Bucla dihidrouridinic (D) - const din 8-12 resturi nucleotidice ( resturi de dihidrouridin ), interactiuneaz cu E- aminoacil-ARNt-sintetaza, care contribuie la recunoaterea de ctre aminoacid a ARNt specific. Bucla suplimentar (variabil), care variaz dup dimensiuni li componena nucleotidic la diferite ARNt.

2.

3. 4. 5.

Structura teriar a tRNA


Are forma L Include 2 segmente de dublu helix situate perpendicular (fiecare helix-10 perechi de baze) n afara spiralei bazele formeaz legturi de hidrogen. Interaciuni apar ntre bazele necomplementare (A-A; A-C).Multe baze sunt aranjate n stive (hidrofobe)

ARNr
Structura secundar e prezentat prin sectoare spiralate unite ntre ele cu ajutorul unei catene curbate Structura teriar prezint scheletul ribosomului. Are forma unui bastona sau ghem pe suprafaa cruia sunt nfurate proteinele ribosomului.

Ribosoma 70S la E. coli

ARN mesager (mARN) constituie 25% din totalul ARN-lui. Localizat -n nucleu i citozol. Prezint copia sectorului de ADN i conine informaia despre structura catenei polipeptidice a proteinei. Rolul:Transmite informaia de la ADN spre ribozomi, sediul de sintez a proteinei. ARN ribozomal (rARN) constituie 60% din totalul ARN-ului. Localizat- n ribozomii citoplasmei. Rolul - formeaz scheletul ribozomilor. Joac un rol auxiliar n procesul de asamblare a proteinelor.

ARN de transport (tARN) constituie 15% din totalul ARN-lui. Localizat: n citoplasm, ribosomi, mitocondrii. Rolul: particip la activarea i transportul AA spre ribozomi i asamblarea lor n polipeptide. ARN cromosomial activarea genelor ADN ARN nuclear formarea scheletelor particulei proteice care transport ARN din nucleu n citoplasm

Proprietile fizico-chimice ale Acizilor Nucleici

Proprietile fizico-chimice ale AN sunt determinate de masa molecular mare i de nivelul de organizare structural. Pentru AN este caracteristic: proprietile coloidale, viscozitatea i densitatea nalt a soluiilor, capacitatea de denaturare. Proprietile coloidale sunt tipice pentru toi compuii macromoleculari. Dizolvndu-se, acizii nucleici se mbib, formnd soluii vscoase de tipul coloizilor. Proprietile lor hidrofile depind de fosfai. n soluii moleculele AN se afl sub from de polianioni cu caracter acid pronunat. La valorile fiziologice al pH-ului toi AN sunt polianioni nconjurai de proteine cationice i cationi neorganici. Solubilitatea acizilor nucleici bispiralai este mai sczut dect cea a acizilor nucleici unicatenari.

Metilarea
Dup ce molecula de AND a fost asamblat, poate suferi unele modificri chimice cum ar fi metilarea. Metilarea are loc prin trei ci: metilarea citozinei formnd fie 5 metilcitozina sau N4-metilcitozina (prin metilarea gruprii NH2 din poziia C4), i metilarea adeninei formnd N6-metiladenina. N4-metilcitozina i N6-metiladenina sunt specifice doat bacteriilor i unelor organosme archaice, pe cnd 5metilcitozina este larg rspndit n lumea vie. Metilarea are loc cu ajutorul enzimei ADN metiltransferazei, care recunoate secvene specifice n interiorul moleculei de ADN. Alte metilrii a bazelor azotate sau a dezoxiribozei poate avea loc numai la aciunea unor ageni carcinogeni. Metlarea pe cale natural are multe funcii celulare i anume: La bacterii i archae metilarea este parte component a sistemului imun, protejnd ADN de fragmentare, cauzat de endonucleaze. n unele organisme metilarea ajut la eliminarea secvenelor incorecte de baze azotate, care se formeaz pe parcursul replicrii moleculei de ADN . La eucariote 5-metilcitozina controleaz multe procese celulare ce previntrancrierea ADN-ului. Metilarea se consider a fi implicat imprimarea semnalului, proces n care unele gene motenite de un printe sunt selectiv inactivate. Metilarea corect poate activa sau inhiba genele cheie n dezvoltarea embrionului. Pe de alt parte, 5-metilcitozina este un agent mutagenic potenial, deoarece timina ce se produce n procesul metilrii poate transforma perechile C:G n T:A. La mamifere metilarea are loc n secvenele rare de CG, mai degrab din cauza c a fost pierdut prin mutaii. L a multe forme de cancer mutaiile sunt localizate n genele-cheie la nucleotidele CG.

Denaturarea i renaturarea
Denaturarea sub aciunea temperaturii, mediului pH, substanelor chimice are loc ruperea legturilor de hidrogen i forelor hidrofobe (Van-der-Waals), ce stabilizeaz structura secundar i teriar a ADN. La denaturare ADN i pierde proprietile biologice. Ex. nclzirea ADN-duce la desfacerea spiralei duble n dou catene ( are loc transformarea spiral - ghem). Degradarea unei jumti de structur de ADN are loc la temperatura de topire. ADN bogat n C i G au o temperatur de topire mai nalt dect cele bogate n A i T. La rcirea treptat catenele din nou se reunesc dup principiul complementaritii, formnd spirala dubl nativ. Acest fenomen se numete renaturare (atunci cnd t e mai mic dect cea de topire). La rcirea brusc renaturarea nu are loc. Denaturarea i renaturarea acizilor nucleici este nsoit de schimbarea activittii lor optice. Sectoarele spiralate (organizate ale AN rotesc planul luminii polarizate, adic sunt optic actve, dereglarea acestor structuri organizate duce la pierderea activitii optice a AN.
Toi AN posed activitate optic maxim la lungimea de und 260 nm, ceea ce corespunde cu absorbia maxim a bazelor azotate. ns, intensitatea absorbiei acidul nucleic este mai mic dect a amestecului de baze azotate, obinut la hidroliza acidului nucleic. Aceasta se explic prin organizarea structural a ADN i ARN, care provoac efectul clasic de micorare a densitii optice (efectul hipocromic). Acest efect maximal este pronunat la acizii nucleici cu structur spiralat (ADN) i care conin multe perechi GC (conin 3 legturi de H i se despart mai greu).

Hibridizarea AN
Pe capacitatea de renaturare a AN este bazat metoda de determinare a gradului de nrudire a AN, care poart denumirea de hibridizare molecular. La baza ei st mperecherea complementar a sectoarelor unicatenare ale AN cu formarea unui heteroduplex Hibridizarea se efectueaz n felul urmtor: 1. AN se denatureaz separat; 2. se incubeaz mpreun ambele tipuri de ADN (ori ADN i ARN). 3. n condiiile unui grad relativ crescut de complementaritate a acestora se formeaz moleculele hibride (AD-ADN sau ADN-ARN). Aceste molecule constau din sectoare spiralate i nespiralate. Cu ct gradul de nrudire este mai nalt, cu att hibridizarea este mai complect.

Aceast metod a permis descoperirea particularitilor structurii primare a ADN. S-a stabilit, c n componena ADN a animalelor se afl sectoare cu o succesiune nucleotidic identic, care de multe ori se repet (pn la 100000 ori), constituind 10-20% din tot ADN. Hibridizarea decurge foarte repede. Restul ADN este prezentat printr-o succesiune unical a nucleotidelor, care nu se dubleaz. Aceste sectoare se hibridizeaz foarte ncet, iar probabilitatea coincidenei lor la organisme diferite este mic. Cu ajutorul metodei hibridizrii moleculare se poate stabili nrudirea ADN al organismului unei specii cu ADN al altei specii sau nrudirea ARN cu sectoarele ADN:

Acizii nucleici i Genosistematica


Acizii nucleici, n special ADN sunt purttorii materialului genetic, ce determin specificitatea de specie a organismului, format pe parcursul evoluiei. Studierea particularitilor componenei nucleotidice a ADN din diferite organisme a permis trecerea de sistematica dup caracterele exterioare la sistematica genetic. Aceast direcie n biologia molecular poart denumirea de genosistematic. Compararea componenei nucleotidice a ADN din diferite organisme a dus la concluzii interesante. S-a dovedit c coeficientul specificitii ADN-ului, adic raportul G+C i A+T variaz mult la microorganisme, pe cnd la pante superioare i animale este destul de constant. La microorganisme se observ variabiliti de la tipul GC pn la tipul AT pronunat. La organismele superioare s-a pstrat constant tipul AT de ADN. De asemenea la organismele superioare specificitatea ADN-ului este determinat nu de variabilitatea componenei nucleotidice, ci de succesiunea alternrii nucleotidelor de-a lungul catenei. O informaie mai ampl, privind rudenia organismelor este obinut prin metoda hibridizrii moleculare, cu ajutorul creia a fost stabilit gradul de rudenie a diferitor specii de animale i plante superioare. Ex. a omului i a maimuelor. Circa 98 din genomul uman corespunde cu cel ai maimuei cimpanzeu. Particularitile structurale primare ale ADN-ului de asemenea pot fi folosite n sistematic. Omologia dup sectoarele succesiunii lor se repet (hibridizarea repetat) este folosit n macrosistematic, iar pentru fragmentele unice de ADN (hibridizarea lent) n microsistematic (la nivelul superior al genurilor).

Testul de paternitate consta in analizarea a 16 secvente ADN (markeri) pentru fiecare persoana testata. Pe baza acestor 16 markeri se realizeaz, pentru fiecare persoana (prezumtivul tata, copil), un profil genetic. Profilele se compara, stabilindu-se corespondenta pentru fiecare marker. In cadrul testului de paternitate sunt analizate anumite segmente din structura ADN denumite markeri STR (Short Tandem Repeats). Aceti markeri, localizai in diferii cromozomi, prezint o variabilitate ampla in populaia umana, fcnd combinaii specifice fiecrui individ. Pe baza acestui fapt, prin utilizarea mai multor astfel de secvene, acurateea de identificare a unei persoane creste enorm in comparaie cu alte metode. Testarea ADN este utilizata de cele mai mari laboratoare criminalistice din lume, de exemplu FBI, atingnd o acuratee de 1018. Cu alte cuvinte, probabilitatea ca doi indivizi sa aib aceleai caracteristici genetice, deci sa fie confundati prin aceasta analiza, este de 1 la 10.000.000.000.000.000.000. Markerii STR utilizai fac parte din sistemul de date al USA CODIS (COmbined DNA Index System) folosit de FBI in tehnica pentru stabilirea profilelor ADN umane.