Cintica e regulao enzimtica

IST FML 2 Semestre 2007 200!

Cintica "nzimtica
Estrutura Enzimtica Constituio em Aminocidos
influencia m

Mecanismos de Aco Enzimtica So difceis de definir quantitativamente

Pelo que necessrio

Determinar constantes da reaco catalisada

Cintica "nzimtica
Cintica Enzimtica
Estudo da velocidade de uma reaco qumica que ocorre na presena de um enzima

Permite elucidar so re! "s pormenores do mecanismo cataltico das enzimas " papel das enzimas no meta olismo Controle da actividade Mecanismos de ini io

#eloci$a$e %s& Concentrao

A concentrao de su strato influencia a velocidade de uma reaco

Estudo da relao entre a concentrao e a velocidade!

# $o inicio da reaco a quantidade de su strato constante% & que a quantidade de su strato muito maior do que a de enzima# #Determina'se a velocidade inicial de reaco% (o %para uma determinada )S*# #" t+m'se valores para vrias concentra,es de su strato% mantendo constante a concentrao de enzima# Assim podemos traar os valores num -rfico% em que e.primimos (o como funo de )S*

#eloci$a$e %s& Concentrao

Dados! Para )S* ai.as% (o aumenta quase linearmente Para )S* maiores% (o aumenta mais -radualmente Para )S* mais elevadas% atin-e'se uma velocidade m.ima% ( m.#

"'uao $e Mic(aelis) Menten

Comportamento e.plicado pela formao do comple.o enzima'su strato ES /# " enzima li-a'se ao su strato reversivelmente formando o comple.o ES
1eaco rpida

0# " comple.o ES dissocia'se em enzima livre e produto da reaco

1eaco mais lenta

#A reaco 0% mais lenta% limita a velocidade -lo al da reaco# #A velocidade proporcional 2 concentrao do comple.o ES# #A cada momento o enzima e.iste na forma livre e no comple.o ES# #A velocidade m.ima 3(m.4 da reaco ocorre quando todos os enzimas esto associadas a molculas de su strato#

*e$uo $a "'uao Mic(aelis) Menten

A curva que representa a relao entre )S* e (o tem forma id+ntica para a maior parte dos enzimas# Esta curva pode ser descrita al-e ricamente pela equao de Mic5aelis'Menten# A equao de Mic5aelis'Menten

+i,-tese. o passo limitante da velocidade das reac,es enzimticas a desassociao do comple.o ES

*e$uo $a "'uao Mic(aelis) Menten

/resu,osto. no 5 transformao de produto em su strato 1eac,es de formao e desassociao do comple.o ES!

(o pode ser considerado como a velocidade com que ocorre a que ra da li-ao ES $o fcil determinar )ES*6 )E7* ' concentrao total da enzima A concentrao de enzima livre % assim% )E 7*')ES*

*e$uo $a "'uao Mic(aelis) Menten

#Passo / (elocidade de formao de ES (elocidade de de-radao de ES #Passo 0
)ES* constante% ou se&a% a velocidade de de-radao e formao de ES so i-uais#

#Passo 8

*e$uo $a "'uao Mic(aelis) Menten

#Passo 9
" temos (o% su stituindo )ES*

A velocidade m.ima quando )ES*:)E7*6 Equao de Mic5aelis' Menten

0nlise $a "'uao Mic(aelis) Menten

A equao de Mic5aelis'Menten% que nos d a relao quantitativa entre a velocidade inicial (=% a velocidade m.ima (m. e a quantidade inicial de su strato )S*% todas relacionadas pela constante de Mic5aelis ;m ;m < unidades de concentrao $o caso de (= ser e.actamente metade de (ma.!

;m corresponde 2 concentrao de su strato para a qual ( = metade da velocidade m.ima

0nlise $a "'uao Mic(aelis) Menten

A equao de Mic5aelis'Menten muito >til para determinar os valores de ;m e (m. das reac,es#

"s enzimas que e.i em uma depend+ncia 5iper ?lica de (= em funo de )S* diz'se que se-uem a cintica de Mic5aelis'Menten#

Enzimas cu&o mecanismo o edea 2s duas reac,es anteriores podemos dizer que o valor de ;m est relacionado com a afinidade do enzima para o su strato% e lo-o diferente de su strato para su strato e de enzima para enzima# " (m. a velocidade m.ima que a reaco pode alcanar% na situao virtual em que todos os enzimas se encontram li-ados ao su strato#

"'uao $e Line1ea%er) 2ur3

Podemos transformar a equao de Mic5aelis'Menten% invertendo'a!

Esta forma da equao de Mic5aelis'Menten c5ama'se equao de @ineAeaver'BurC

"'uao $e Line1ea%er) 2ur3

Drfico de /E)(=* em funo de /E)S* " tm'se uma funo linear6

#Esta recta tem um declive ;mE(m. #A interseco da recta no ei.o /E(= corresponde ao valor /E(m. #A interseco com o ei.o /E)S* corresponde a '/E;m Permite uma determinao de (m. precisa6

Ini4io enzimtica

1eversvel
Competitiva Anti'Competitiva Mista

Frreversvel

Ini4io 5e%ers6%el Com,etiti%a

G competio pelo centro activo do enzima " ini idor estruturalmente semel5ante ao
su stracto

A ini io pode ser contrariada adicionando mais su stracto ao meio " ;m aumenta e o (ma. no se altera

Ini4io 5e%ers6%el Com,etiti%a

Ini4io 5e%ers6%el Com,etiti%a

Ini4io 5e%ers6%el Com,etiti%a

Ini4io 5e%ers6%el 0nti) Com,etiti%a

" ini idor li-a'se a um local especfico do enzima 3que no o centro activo4 " ini idor li-a'se apenas ao comple.o ES% formando o comple.o ESF

" ;m diminui e o (ma. diminui

Ini4io 5e%ers6%el 0nti) Com,etiti%a

Ini4io 5e%ers6%el 0nti) Com,etiti%a

Ini4io 5e%ers6%el 0nti) Com,etiti%a

Ini4io 5e%ers6%el Mista

" ini idor li-a'se a um local especfico do enzima 3que no o centro activo4 " ini idor li-a'se tanto ao enzima livre como ao comple.o ES

(ma. diminui

;m pode aumentar% diminuir ou manter'se

Ini4io 5e%ers6%el Mista

Ini4io 5e%ers6%el Mista

Ini4io 5e%ers6%el Mista

Ini4io 5e%ers6%el

Huando I : IJ% a Fni io Mista tem o nome de Fni io 7o Com,etiti%a

Ini4io Irre%ers6%el

" ini idor com ina'se permanentemente ao enzima de uma das se-uintes formas!
@i-ao covalente Destruio de um -rupo funcional essencial ao funcionamento do enzima @i-ao no covalente particularmente estvel

+e8ocinase

A 5e.ocinase fosforila a -lucose para -lucose'K'fosfat 1eaco ocorre com consumo de A7P &untamente com um io M-0L " ;m para a -lucose =#/mM% e a concentrao de -lucose na clula 9mM A 5e.ocinase re-ulada alostericamente pelo produto da sua pr?pria reaco

+e8ocinase
A 5e.ocinase uma enzima do tipo indutivo

+e8ocinase
Mosforilao impede a sada de -lucose da clula

+e8ocinase
1eaco catalisada pela 5e.ocinase

+e8ocinase
$o f-ado tam m e.iste uma 5e.ocinase% mas com menor afinidade para com a -lucose Esta s? est activa quando a concentrao de -lucose no san-ue muito elevada

Huando a concentrao de -lucose no san-ue ai.a o f-ado no compete com outros tecidos $o f-ado% a -lucose convertida em -lico-nio

+e8ocinase

A fosforilao da -lucose reversvel6 A converso da -lucose'K'fosfato em -lucose ocorre no f-ado durante a -luconeo-nese#

"nzimas 5egula$ores

Enzimas que aumentam ou diminuem a sua actividade em reaco a determinados factores# Mazem normalmente parte de sequ+ncias meta ?licas# Permitem re-ular a actividade de toda a sequ+ncia meta ?lica e possi ilitam 2 clula a&ustar'se 2s suas necessidades ener-ticas e iomolculares#

Ti,os $e Mo$ula$ores
Mecanismos que re-ulam a actividade enzimtica!
(ariao da concentrao de su strato de pG e temperatura (ariao Fni io enzimtica

Mo$ulao alostrica Mo$ulao co%alente

Mo$ulao alostrica
"corre em enzimas que possuem um local de modulao alostrico
Geterotropismo 3o modulador diferente do su strato4 Gomotropismo 3o modulador i-ual ao su strato4

Modulador alostrico
$e-ativo Positivo 3ini e o 3activam o enzima4 enzima4 A li-ao entre o modulador e o enzima no'covalente e o local de modulao especifico para cada modulador% no caso dos enzimas 5eterotr?picos

Mo$ulao alostrica
In$u z.

Modifica,es conformacionais na estrutura espacial do enzima

Modifica a afinidade do enzima para com os seus su stratos

Mo$ulao alostrica

Nm modelo muito comum de re-ulao alostrica a ini io por retroalimentao% onde o pr?prio produto da reaco actua como modulador da enzima que a catalisa#

Cintica

$o se-uem a cintica de Mic5aelis' Menten Comportamento si-m?ide )S* para a qual (=:(m.E0 no corresponde ao ;m

" comportamento si-m?ide e.plicado pela interaco entre as su unidades das protenas% & que mudanas estruturais numa su unidade so transferidas para as ad&acentes% atravs de interac,es no covalentes entre elas#

Cintica
"nzimas (omotr-,icas pequenas varia,es na concentrao do modulador podem provocar -rande varia,es na actividade do enzima#

"nzimas (eterotr-,icas O dificil -eneralizar a forma como se comportam # Apresentam uma -rande varia ilidade no comportamento#

Cintica

Mo$ulao co%alente
Drupos adicionados ou retirados do enzima atravs de modifica,es covalentes
Mosforilao Adenilao Nrinilao ADP' ri osilao Metilao

Fos9orilao
@i-ao de um -rupo Mosforil a determinados resduos de aminocidos
O catalisada por quinases O um processo reversvel Mosfatase remove os -rupos fosforil adicionados

Fos9orilao
: gru,o 9os9oril.
Fnfluencia a polaridade dos aminocidos Permite o esta elecimento de pontes 5idro-eni?nicas

Fmportantes para a estrutura e conformao da molcula

0$enilao
O adicionado um -rupo Adenil 2 tirosina

;ri$ilao
O adicionado um -rupo uridil 2 tirosina

0*/)5i4osilao
O acresentada uma ADP'1i ose% com incid+ncia nos resduos Ar-inina% Dlutamina% Cistena e Gistidina alterada 3diftamida'a4

Metilao
O adicionado um -rupo metil em resduos de -lutamato

<imognios
A re-ulao enzimtica pode passar ainda pela e.ist+ncia de um precursor% sem capacidade cataltica% que% no caso das proteases% so c5amados zimo-nios#

<imog nio

Cli%agem ,roteol6tica

"nzima acti%a