Les Bacillus

Aspect microscopique
Bacilles Gram + prsentant une spore lEF : mobiles le plus souvent par ciliature pritriche

Distinction de trois groupes: Bacillus spore ovale non dformante, Bacillus spore ovale dformante, Bacillus spore ronde dformante

Observation au MEB

Forme vgtative : bacilles bouts arrondis

Forme de rsistance : spore dans un environnement favorable permet le dveloppement dun nouveau Bacillus.

Bacillus anthracis
Observation microscopique
Grand bacille (5 m de long, 1 m de large), Gram +, Formant une spore ovalaire centrale non dformante. immobiles capsul

Caractres biochimiques: AAF, glucose +, non exigeant, VP + (caractre de la classification des Bacillus), glatinase +, urase -, maltose +, saccharose +
Il labore une toxine comprenant trois facteurs agissant en synergie: facteur I oedmatogne facteur II immunogne facteur III ltal

Les milieux de culture des Bacillus

Glose lamidon
Glose nutritive 1% damidon de riz ou de pomme de terre Ensemencer par une strie centrale partir dune suspension bactrienne. Ou en faisant 5 ou 6 dpts dse sur la glose

Incuber 24 heures 37C

Glose loeuf
Glose trypticase-soja 10% de jaune duf strile Ensemencer par une strie centrale partir dune suspension bactrienne. Ou en faisant 5 ou 6 dpts dse sur la glose

Incuber 24 heures 37C

Milieu TCA
Composition
Peptone trypsique de casine Chlorure de sodium Sulfite de sodium Cystine Rouge de phnol Glose ED 20 g 5g 0,5 g 0,5 g 0,017 g 2,5 g qsp 1 L
Source N

Sources minrales Source de C et N

Indicateur de pH

pH = 6,8 7

Ensemencement
Rgnrer les milieux 20 min au BM 100C. Refroidir les tubes 45C. Incorporer le sucre dsir pour une concentration finale de 1% (10g.L -1). Solidifier les milieux sous leau froide. Ensemencer par piqre centrale. Incuber 24 heures 37C.

Milieu de Mossel
Composition
Extrait de viande Peptone Mannitol Chlorure de sodium Rouge de phnol Agar ED 1g 10 g 10 g 10 g 0,025 g 12 g qsp 1 L
Source N

Sources de carbone Sources minrales

Indicateur de pH

pH = 7,1

Au moment de lemploi, ajouter 90 mL de milieu: 10 mL de jaune duf dilu au dans de leau physiologique 1, 2, 5 ou 10 mL de polymyxine 1 mg/mL (Inhibiteur) Cest un milieu disolement slectif des Bacillus de lespce Bacillus cereus partir des aliments ou des selles.

Ensemencement
Isolement par la technique des quadrants.

Glose au lait
Glose blanche 2,5 3% dagar en solution dans leau dans laquelle on ajoute la mme quantit de lait strile.

Ensemencer en faisant 5 ou 6 dpts dse sur la glose Incuber 24 heures 37C

Glose lamidon

Lecture des milieux

Pas de coloration noire autour des cultures: absence damidon il a t hydrolys par les bactries, test positif Coloration noire autour des cultures: prsence damidon test ngatif

Recouvrir de lugol la glose aprs culture

Glose luf

Lecture directe: claircissement du milieu de culture les bactries ont hydrolys les lcithines du jaune duf , test positif Pas de changement du milieu test ngatif

Glose Mossel
Colonies rouges entoures dun halo opaque et blanchtre suspicion de Bacillus cereus, LECITHINASE +++

Colonies rouges pas dutilisation de mannitol par les bactries MANNITOL Prsence dun halo: hydrolyse des lcithines par une lcithinase, en choline soluble et diglycride insoluble qui prcipite dans le milieu en formant un trouble.

Glose au lait
Lecture directe aprs culture Halo clair autour de la culture hydrolyse de la casine, test positif

Pas de modification du milieu autour de la culture test ngatif, la casine nest pas hydrolyse.

Correction du TP
1er jour

N impair: Bacilles en chanette Gram +

N pair: Bacilles en chanette Gram + prsence dune spore dformante dans le bacille.

2nd jour
Coloration des spores au vert de Malachite

N pair: prsence dune spore centrale ovode dformante

Lecture du VF N impair: culture en surface AS 1re orientation: bacilles Gram +, mobiles, catalase +, VP+, non exigeants,(sporogne), AS orientation vers le genre Bacillus.

N pair: culture dans tout le tube AAF 1re orientation: Bacilles Gram +, mobiles, VP+, non exigeants, sporognes, AAF orientation vers le genre Bacillus.

Lecture des milieux CTA N impair

glucose Virage de lindicateur de pH glucose +

xylose
Virage de lindicateur de pH xylose +

arabinose
Virage de lindicateur de pH arabinose +

N pair

glucose Virage de lindicateur de pH glucose +

xylose Pas de virage de lindicateur de pH xylose -

arabinose Pas de virage de lindicateur de pH arabinose -

Lecture de la glose lamidon (n pair et impair)

Pas de coloration autour de la culture absence damidon qui a t hydrolyse par l-amylase des Bacillus.

Lecture de la glose au lait (npair et impair) Prsence dun halo dclaircissement autour de la culture de la casine a t hydrolyse par les protases des Bacillus.

Lecture de la glose luf n pair Prsence dun halo clair autour de la culture les lcithines ont t hydrolyses par la lcithinase des Bacillus.

n impair Pas de modification autour de la culture les lcithines nont pas t hydrolyses.

Lecture de la glose de Mossel n pair Colonie rose pas dutilisation du mannitol par les Bacillus MANNITOL Prsence dun halo clair autour de la culture les protines du jaune doeuf ont t hydrolyses par les protases des Bacillus.

Prsence dun halo opaque autour de la culture les lcithines ont t hydrolyses par la lcithinase des Bacillus.

Suspicion de Bacillus cereus Identification de lespce: Bacillus prsentant divers enzymes (-amylase, lcithinase, protases), glc +, xylose-, arabinose -, culture caractristique sur Mossel Bacillus cereus.

Lecture de la glose de Mossel n impair Colonie jaune Utilisation du mannitol par les Bacillus MANNITOL +

Absence dun halo opaque autour de la culture les lcithines nont pas t hydrolyses par les Bacillus.

Il sagit dun Bacillus autre que Bacillus cereus Identification de lespce: Bacillus prsentant divers enzymes (-amylase, protases), glc +, xylose+, arabinose + Bacillus subtilis (tableau p 132 du livre).