MORFOLOGIA BACTERIANA

MORFOLOGIA BACTERIANA
La mayora de bacterias producen una envoltura celular en capas que incluye la membrana plasmtica y la pared celular y las protenas y polisacridos asociados. Las bacterias presentan una amplia variedad de tamaos, y aparecen vistos al microscopio ptico como esferas (cocos), cilindros (bacilos) y espirales (espiroquetas). Las clulas de muchos gneros familiares de bacterias tienen una entre tres formas rpidamente distinguibles:

Bastones Rectos

Esferas

Bastones largos helicoidales

ESTRUCTURA BACTERIANA

Las bacterias son organismos relativamente sencillos. Sus dimensiones son 2 m de ancho por 7-8 m de longitud en la forma cilndrica (bacilo) y cocos de 0,5-1,5 m. Carecen de un ncleo delimitado por una membrana aunque presentan un nucleoide, una estructura elemental que contiene una gran molcula circular de ADN. El citoplasma carece de orgnulos delimitados por membranas y de las formaciones protoplasmticas propias de las clulas eucariotas. En el citoplasma se pueden apreciar plsmidos, pequeas molculas circulares de ADN que coexisten con el nucleoide, contienen genes y son comnmente usados por las bacterias en la conjugacin. El citoplasma tambin contiene vacuolas (grnulos que contienen sustancias de reserva) y ribosomas (utilizados en la sntesis de protenas).

ESTRUCTURA BACTERIANA

Una membrana citoplasmtica compuesta de lpidos rodea el citoplasma y, al igual que las clulas de las plantas, la mayora posee una pared celular, que en este caso est compuesta por peptidoglicano (murena). Algunas bacterias, adems, presentan una segunda membrana lipdica (membrana externa) rodeando a la pared celular. El espacio comprendido entre la membrana citoplasmtica y la pared celular (o la membrana externa si esta existe) se denomina espacio periplsmico.

MEMBRANA CITOPLASMATICA
Es una fina estructura que rodea completamente la clula. La estructura general es de una bicapa lipdica, los fosfolpidos poseen tanto unidades altamente hidrofbicas (cidos grasos) como unidades relativamente hidroflicas (glicerol) y pueden presentarse en mltiples formas qumicas distintas debido a la variacin en la composicin de los cidos grasos y de los compuestos fosforilados que se unen al esqueleto del glicerol. Dado que los fosfolpidos se agregan en soluciones acuosas, tienden a formas bicapas de manera espontnea, los cidos grasos apuntan hacia el interior (mantenindose en un entorno hidrofbico), mientras que las porciones hidroflicas son las expuestas a la fase acuosa.
ULTRAESTRUCTURA BASICA DE UNA BICAPA H2O LIPIDICA REGION
HIDROFILICA

ACIDOS GRASOS REGION HIDROFBICA

GLICEROL

FOSFATO H2O

Estructuras intracelulares

La membrana citoplasmtica bacteriana tiene una estructura similar a la de plantas y animales. Es una bicapa lipdica compuesta fundamentalmente de fosfolpidos en la que se insertan molculas de protenas. A diferencia de las membranas eucariticas, generalmente no contiene esteroles (son excepciones micoplasmas y algunas proteobacterias), aunque puede contener componentes similares denominados hopanoides. .

Estructuras intracelulares
FUNCIONES DE LA MEMBRANA CITOPLASMATICA

En las bacterias realiza numerosas funciones entre las que se incluyen las de barrera osmtica, transporte, biosntesis, transduccin de energa, centro de replicacin de ADN y punto de anclaje para los flagelos. Muchas importantes reacciones bioqumicas que tienen lugar en las clulas se producen por la existencia de gradientes de concentracin a ambos lados de una membrana. Este gradiente crea una diferencia potencial anloga a la de una batera elctrica y permite a la clula, por ejemplo, el transporte de electrones y la obtencin de energa. La ausencia de membranas internas en las bacterias significa que estas reacciones tienen que producirse a travs de la propia membrana citoplasmtica, entre el citoplasma y el espacio periplsmico.

Estructuras extracelulares Pared celular

Las bacterias disponen de una pared celular que rodea a su membrana citoplasmtica. Las paredes celulares bacterianas estn hechas de peptidoglicano o murena. Esta sustancia est compuesta por cadenas de polisacrido enlazadas por pptidos inusuales que contienen aminocidos D. Estos aminocidos no se encuentran en las protenas, por lo que protegen a la pared de la mayora de las peptidasas. Las paredes celulares bacterianas son distintas de las que tienen plantas y hongos, compuestas de celulosa y quitina, respectivamente. Son tambin distintas a las paredes celulares de Archaea, que no contienen peptidoglicano. La penicilina puede matar a muchas bacterias inhibiendo un paso de la sntesis del peptidoglicano.

Estructuras extracelulares Pared celular

Existen dos diferentes tipos de pared celular bacteriana denominadas Gram-positiva y Gramnegativa Las bacterias Gram-positivas tienen una pared celular gruesa que contiene numerosas capas de peptidoglicano en las que se inserta cido teicoico. Las bacterias Gram-negativas tienen una pared relativamente fina, consistente en unas pocas capas de peptidoglicano, rodeada por una segunda membrana lipdica (la membrana externa) que contiene lipopolisacridos y lipoprotenas.

Estructuras extracelulares Pared celular

Las micoplasmas son una excepcin, pues carecen de pared celular. Mycobacterium, el cual, si bien se encuadra dentro de las Gram positivas, no parece serlo desde el punto de vista emprico, ya que su pared no retiene el tinte. Esto se debe a que presentan una pared celular poco comn, rica en cidos miclicos, de carcter hidrfobo y ceroso y bastante gruesa, lo que les confiere una gran resistencia.

PARED CELULAR GRAMPOSITIVA

La pared celular de las Grampositivas est constituida principalmente por cadenas de peptidoglucano, a menudo unidas por puents peptdicos . Sin embargo estas clulas contienen tambin una gran cantidad de cidos teicocos, polmeros de glicerol y ribitol unidos por grupos fosfato y aminocidos como D-alanina o azcares como la glucosa estn unidos a los grupos glicerol y ribitol.

PARED CELULAR GRAMPOSITIVA

Estructura del cido teicoco

Esta constituido por fosfato glicerol y una cadena lateral, R. Donde R puede representar D-alanina, Glucosa u otras molculas.

PARED CELULAR GRAMPOSITIVA

La pared celular de las Grampositivas est constituida principalmente por cadenas de peptidoglucano, a menudo unidas por puents peptdicos . Sin embargo estas clulas contienen tambin una gran cantidad de cidos teicocos, polmeros de glicerol y ribitol unidos por grupos fosfato y aminocidos como D-alanina o azcares como la glucosa estn unidos a los grupos glicerol y ribitol.

PARED CELULAR GRAMNEGATIVA

A. La membrana externa
Sirve como membrana de permeabilidad selectiva que mantiene afuera a sustancias hidrfobas y sustancias hidrfilas por encima de cierto tamao y retiene las protenas periplsmicas. La membrana exterior es una tpica capa doble de fosfolpidos en la cual los fosfolpidos de la capa ms externa han sido sustituidos por molculas de LPS.

PARED CELULAR GRAMNEGATIVA

B. Porinas
Halladas en la membrana externa y con un peso molecular de 35,000, forman los poros transmembrana o canales de difusin que permite el pasaje de pequeas molculas hidrfilas a travs de la membrana externa.

PARED CELULAR GRAMNEGATIVA

C. Lipoprotena
Es la protena ms abundante en las clulas Gramnegativas, su funcin consiste en estabilizar la membrana externa y anclarla a la capa de peptidoglucano.

PARED CELULAR GRAMNEGATIVA

D. LPS
Conocido como lpido A, consiste en unidades del disacrido de glucosamina fosforilada que tiene unidos varios cidos grasos de cadena larga. Es termoestable, letalmente txico, pirognico.

PARED CELULAR GRAMNEGATIVA

E. Protoplasto y Esferoplasto
La capa de glucopptidos de la pared celular puede eliminarse mediante hidrlisis con lisozimas, pero es estabilizada en soluciones hipertnicas de sacarosa. - Protoplasto, cuando se libera un cuerpo esfrico sin pared osmticamente sensible, Grampositivas. - Esferoplasto, cuando hay retencin de la cubierta celular se denomina esferoplasto (Gramnegativas).

PARED CELULAR GRAMNEGATIVA

F. Periplasma o espacio periplsmico

Ees el espacio que aparece entre la membrana plasmtica y la membrana externa, se observa fcilmente en (Gramnegativas), con dificultad en Grampositivas., debido a las altas presiones osmticas internas de las bacterias Grampositivas 8 - 20 atm en comparacin con la Gramnegativas 3 a 5 atm.

PARED CELULAR GRAMNEGATIVA

G. Componentes de la membrana,
La membrana estn compuestas aproximadamente por 60 - 70% de protenas, 30 - 40% de lpidos y pequeas cantidades de hidratos de carbono. Los constituyente principales son las fosfatidiletanolaminas 75%, fosfatidilglicerol 20% y glucolpidos. La colina, esfingolpidos, cidos grasos poliinsaturados y esteroides son raros.

DIFERENCIAS ENTRE GRAMPOSITIVAS Y GRAMNEGATIVAS

GRAMPOSITIVAS Produccin de polisacridos conocidos como cidos teicocos, una capa de la pared celular relativamente gruesa, contigua y que recubre la membrana plasmtica.

GRAMNEGATIVAS Presentan 3 capas de envoltura distintas, dispuestas de manera laxa, estas incluyen la membrana externa (ME), convoluta, arrugada con surcos u ondulante, que contiene el antgeno O somtico conocido como lipopolisacrido LPS, una capa densa intermedia, y la membrana plasmtica interna. Un espesor de 0.0075 um.

DIFERENCIAS ENTRE GRAMPOSITIVAS Y GRAMNEGATIVAS

DIFERENCIAS DE LA PARED CELULAR DE GRAMPOSITIVAS, GRAMNEGATIVAS Y MICOPLASMA

Grampositiva

Gramnegativa

Micoplasma

PARED CELULAR La pared celular encontrada en todas las bacterias con excepcin de los micoplasmas, protege a la clula de los medios de baja presin osmtica y mantiene la forma. La pared celular esta compuesta por un glucopptido nico para las bacterias. El espesor oscila generalmente entre 0.150 um y 0.500 um de espesor, pudiendo incluso alcanzar 0.8 um (Lactobacillus). Las paredes de las clulas jvenes son ms delgadas que las clulas de cultivo antiguo.

FUNDAMENTO DE LA COLORACION GRAM

El cristal violeta acta como un colorante primario, que se une a la pared celular bacteriana luego de un tratamiento con una solucin dbil de iodo (Mordiente). Algunas bacterias debido a su naturaleza qumica de sus paredes celulares, poseen la capacidad de retener el cristal violeta, aun luego del tratamiento con un decolorante orgnico, tal como una mezcla de alcohol y acetona. Tales bacterias se denominan Grampositivas. Las bacterias Gramnegativas debido a su mayor contenido lipdico en su pared celular, pierden la coloracin primaria del cristal violeta cuando son tratadas con el decolorante. El colorante secundario o de contraste utilizado es la safranina. Las bacterias Gramnegativas que han perdido el cristal violeta, aparecen rojas o rosadas vistas al microscopio, habiendo fijado la safranina como contracolor a sus paredes celulares. Las bacterias aparecen de color violeta, aunque el grado de absorcin del colorante por los diferentes microorganismos es variable, y algunas estructuras como las esporas absorben el colorante con dificultad son as fcilmente diferenciables.

PROCEDIMIENTO DE LA COLORACION GRAM

Coloque una asada de caldo nutritivo que contiene una mezcla de bacterias Grampositivas y Gramnegativas sobre una lmina portaobjeto limpia. Deje secar a temperatura ambiente o pasando por la llama suavemente para obtener la fijacin del frotis, con la finalidad de que el material no sea arrastrado durante el proceso de tincin. Colocar el preparado sobre un soporte de tincin y cubrir la superficie con solucin de cristal violeta por 1 minuto. Lavar bien con agua de cao. Cubrir el preparado con Iodo de Gram durante 1 minuto. Lavar con agua.

PROCEDIMIENTO DE LA COLORACION GRAM

Sostener el portaobjeto entre el pulgar y el ndice y baar la superficie con unas gotas del decolorante acetona-alcohol hasta no arrastrar ms colorante violeta. Se requiere unos 10 segundos ms o menos.

Cubrir la superficie con la safranina durante 1 minuto. Lavar con agua de cao. Secar al aire, a temperatura ambiente.
Observar al microscopio con lente de inmersin. (100X) y con aceite de inmersin.

PROCEDIMIENTO DE LA COLORACION DE GRAM

REACTIVOS
1. SOLUCION DE CRISTAL VIOLETA Cristal violeta 1.0 g Alcohol 95 20 ml. Agua destilada csp 100 ml 2. SOLUCION DE LUGOL Yodo en cristales 1.0 g. Yoduro de potasio 2.0 g. Agua destilada 100 ml. 3. DECOLORANTE Acetona 50 ml. Etanol 50 ml. 4. SAFRANINA Safranina 0.25 g. Alcohol 95 10 ml. Agua destilada c.s.p. 100 ml.

COCOS GRAMPOSITIVOS EN CADENAS

COCOS GRAMPOSITIVOS EN RACIMOS

COCOS GRAMPOSITIVOS EN PAREJAS

BACILOS GRAMPOSITIVOS

COCOBACILOS GRAMPOSITIVOS

ESPORAS E HIFAS GRAMPOSITIVAS

Candida sp.

COCOS GRAMNEGATIVOS EN PAREJAS

BACILOS GRAMNEGATIVOS

BACILOS GRAMNEGATIVOS CURVOS

VIBRIO

BACILOS GRAMNEGATIVOS PLEOMORFICOS

BACTEROIDES

COCOBACILOS GRAMNEGATIVOS

ACINETOBACTER BRUCELLA

ESPIROQUETAS GRAMNEGATIVAS

COLORACION DE ZIEHL-NEELSEN

FUNDAMENTO DE LA COLORACION DE ZIEHL-NEELSEN

Las micobacterias poseen una cpsula gruesa y cerosa, y una pared celular compuesta por cidos micolicos y cidos grasos de cadena larga resistente a la tincin, sin embargo una vez teida, esta cpsula resiste la decoloracin cuando es tratada con potentes solventes orgnicos tales como el alcoholcido. Por esta razn los microorganismos que tienen esta propiedad se llaman cidorresistentes. A fin de que el colorante primario, la carbolfucsina, penetre a travs de las cpsulas cerosas de los bacilos cidorresistentes, se requiere de cierto tipo de tratamiento fsico, se emplea calor. El fenol parece ayudar a la penetracin del colorante a travs de los lpidos. Se emplea el azul de metileno como colorante de contraste. Esta coloracin se emplea principalmente para el diagnstico de la tuberculosis y la lepra.

REACTIVOS
1. FUCSINA FENICADA DE ZIEHL-NEELSEN Fucsina Bsica 0.5 g Fenol 2.5 g Alcohol 95 5 ml. Agua destilada csp 100 ml 2. SOLUCION DECOLORANTE ALCOHOL-ACIDO Etanol 97 ml. Acido clorhdrico cc. 3 ml 3. SOLUCION DE AZUL DE METILENO Azul de metileno 0.5 g. Agua destilada 100 ml.

PROCEDIMIENTO

Hacer un frotis con la muestra de esputo y fijar la preparacin por calor. Vierta unas gotas de solucin de fucsina fenicada hasta cubrir la preparacin. Calentar suavemente hasta que se desprenda vapor por tres veces consecutivas, evitando la ebullicin. Elimine el colorante y lave la preparacin con agua corriente. Cubrir el portaobjetos con la solucin decolorante durante 1 minuto, hay que asegurarse que no desprenda coloracin roja; si es necesario, se pueden aadir unas gotas ms del decolorante. Lavar con agua con la finalidad de eliminar el exceso. Aadir el colorante de contraste azul de metileno y se deja actuar por un minuto. Lavar con agua, eliminando el exceso. Secar al aire, a temperatura ambiente. Observar al microscopio con lente de inmersin. (100X) y con aceite de inmersin

CLASIFICACIN DE CDC Y OMS PARA EL REPORTE DE BAAR.

Nmero de BAAR
0 BAAR/100 Campos 1 BAAR/300 Campos 1 9 BAAR/100 Campos 1 9 BAAR/10 Campos 1 9 BAAR/ Campo 10 a ms BAAR/ Campo

Reporte
Negativo Pseudobacilar Positivo 1+ Positivo 2+ Positivo 3+ Positivo4+

CLASIFICACIN DE CDC Y OMS PARA EL REPORTE DE BAAR.

Positivo 1+

CLASIFICACIN DE CDC Y OMS PARA EL REPORTE DE BAAR.

Positivo 2+

CLASIFICACIN DE CDC Y OMS PARA EL REPORTE DE BAAR.

Positivo 4+

CLASIFICACIN DE CDC Y OMS PARA EL REPORTE DE BAAR.

Positivo 4+

ULTRAESTRUCTURA BACTERIANA
FLAGELOS FILAMENTOS AXIALES MICOFIBRILLAS, FIMBRIAS, Y PILIS (PELOS SEXUALES)

FLAGELOS

FLAGELOS
Los flagelos bacterianos son largos apndices filiformes compuestos en su totalidad por protena, miden de 12 a 30 nm de dimetro. Son los rganos de locomocin para las formas que lo poseen. Un flagelo bacteriano est hecho de una sola clase de subunidad protenica, denominada FLAGELINA; el flagelo est formado por la agregacin de subunidads que forman una estructura cilindrica hueca. Los flagelos pueden variar desde unos pocos (E. coli) hasta varios cientos (Proteus).

Partes del Flagelo

Esta compuesto de tres partes: 1. EL FILAMENTO Es externo con respecto a la clula y se une al gancho en la superficie celular. Est constituido por varias membranas protenicas que forman una hlice con un centro hueco. 2. EL GANCHO Esta fijado al cuerpo basal, que a su vez esta anclado en la membrana plasmtica.

Partes del Flagelo

3. CUERPO BASAL Esta constituido de un cilindro y dos o ms juegos de anillos contiguos a la membrana plasmtica, el glicopptido y en el caso de las bacterias Gramnegativas, la membrana externa de la envoltura celular. El anillo M est integrado por la membrana celular. El anillo S en la capa de peptidoglicanos. Los anillos P y L en la membrana externa.

DISPOSICION DE LOS FLAGELOS

Los flagelos se diferencian por su nmero y disposicin en la clula.

MONOTRICA, un solo flagelo en un extremo

LOFOTRICA, dos o ms flagelos en un polo

ANFITRICA, un flagelo en cado polo

ANFILOFOTRICA, dos o ms flagelos en uno o ambos polos PERITRICA, flagelos sobre toda la superficie celular

Clasificacin De Los Flagelos

Los flagelos se diferencian por su nmero y disposicin en la clula. 1.- Monotricas: Bacterias con un flagelo nico en posicin polar. 2.- Lofotricas : dos o mas Flagelos que se originan en un polo o en un punto de la clula.

Clasificacin De Los Flagelos

3.- Anfitricas: un solo flagelo en dos puntos o polos diferentes de la clula 4.- anfilotricas: Dos o mas flagelos (penacho) en dos puntos o polos de la clula 5.- Peritricos: Poseen flagelos sobre toda su superficie

flagelos

bacteria

flagelos

bacteria

nutriente

volteretas

carrera

Los flagelos permiten que las bacterias encuentren medios favorables y eviten los desfavorables. Aunque pudiera parecerlo, el movimiento no se produce al azar. Cuando una bacteria nada hacia un nutriente o alejndose de un compuesto txico, aumenta la duracin de las CARRERAS y disminuye la frecuencia de las VOLTERETAS

situacin del

nutriente

Tincin de Flagelos
Es muy difcil observar flagelos en una preparacin teida, debido a que se retraen muy fcilmente y se adhieren a la pared celular. Ej: Spirillum volutans, Escherichia coli. Proteus, Pseudomona.

CONSIDERACIONES PARA REALIZAR LA TINCION Se debe partir de cultivos jvenes, de entre 6- 12 sembrado en agar nutritivo blando. Debe emplearse portaobjetos nuevos, perfectamente limpios, tratados con mezcla sulfocrmica, perfectamente aclarados con agua destilada y secados en estufa. Preparar una suspensin del germen en agua destilada, mezclando suavemente hasta obtener una suspensin lechosa. Colocar el portaobjeto ligeramente inclinado y se depositan sobre l un par de gotas de la suspensin. Dejar secar al aire sin aplicar calor.

METODO DE LEIFSON
Fundamento: Los flagelos son estructuras demasiado finas para ser visible al microscopio ptico, en presencia de cido tnico puede evidenciarse su presencia y disposicin en las clulas, por medio de un precipitado grueso que se deposita sobre la pared celular y flagelos. En esta forma el dimetro aumenta de tal modo que con la tincin de fucsina se les hace visibles al microscopio ptico. Los flagelos se pueden teir con soluciones alcohlicas de colorantes de anilina, que forman un precipitado al evaporarse el alcohol en el proceso de tincin. La fucsina bsica es el colorante primario y el cido tnico aadido a la solucin acta como un mordiente. Se puede usar un contracolor como el azul de metileno, para visualizar mejor la bacteria en los casos en que el colorante primario es dbil o no reacciona del todo con la pared celular bacteriana.

METODO DE LEIFSON
Reactivos: Colorante de Leifson (Fucsina bsica, alcohol Acido tnico, cloruro de sodio) Solucin acuosa de sulfato de cobre 2%. Tcnica: Se cubre la preparacin con el colorante de Leifson Se deja actuar por unos 10 a 15 minutos, hasta que el alcohol se evapore. Se lava con agua, sin volcar el colorante. Se seca a temperatura ambiente. Observar a 100X. Observacin Los flagelos se observan de color rojo oscuro
a azul negruzco.

METODO DE RHODES
Reactivos: Mordiente de Rhodes (contiene una solucin acuosa de tanino, alumbre potsico, aceite de anilina y cloruro frrico). Nitrato de plata amoniacal. Tcnica: Se cubre la preparacin con el mordiente de Rhodes durante 3 a 5 minutos. Se lava cuidadosamente con agua, mejor por inmersin. Se cubre con la solucin de nitrato de plata amoniacal, calentndolo hasta casi ebullicin y dejndolo actuar por 3 a 5 minutos. Se lava con agua destilada. Se seca a temperatura ambiente. Observar a 100X.

Observacin Los flagelos se observan por el precipitado de nitrato de plata que se ha depositado en torno suyo.

METODO DE TRIBONDEAU
Reactivos: Mordiente de Tribondeau.(contiene solucin alumbre potsico y tanino). Solucin de cristal violeta. Tcnica: Se fija el frotis con alcohol. Se cubre la preparacin con la mezcla formada por 5 ml del mordiente y 0.5 ml de cristal violeta previamente sometida a ebullicin. Se deja actuar la mezcla unos veinte segundos. Se lava rapidamente con agua, sin volcar previamente el colorante para evitar que se forme una pelcula sobre la preparacin. Se seca a temperatura ambiente. Observar a 100X.

Observacin Los flagelos se observan de color rojo oscuro a azul negruzco

FILAMENTOS AXIALES
Las Espiroquetas, Treponemas, Leptospiras, Borrelias; son clulas con motilidad y se mueven desplazndose por una onda helicoidal, tipo de movimiento que le permite la penetracin en medios viscosos. Estas bacterias producen filamentos axiales semejantes a flagelos, en torno de los cuales se arrolla la clula. Estos filamentos estn ubicados en el espacio periplsmico entre las membranas interna y externa de la clula. El Treponema microdentium produce dos filamentos por clula, el T. reiteri produce 6 a 8.

FIMBRIAS
Las fimbrias y los pili presentan una estructura similar a la de los flagelos pero no participan en la motilidad. Las fimbrias son bastante ms cortas que los flagelos y mucho ms numerosas. Pero tambin son de naturaleza protica. No todos los microorganismos poseen fimbrias y la capacidad para fabricarlas es un rasgo hereditario. No se conoce con certeza la funcin de las fimbrias en todos los casos, pero parece evidente que favorecen, en algunos organismos, su fijacin a las superficies como los tejidos animales, en el caso de algunas bacterias patgenas, o la formacin de pelculas o la fijacin a las superficies lquidas.

PILIS

Los pili (pelos) son estructuralmente similares a las fimbrias, pero por lo general son ms largos y solamente existe uno o unos pocos pili sobre la superficie, en una proporcin de 1 a 4 pili por 100 a 200 fimbrias. Los pili pueden verse con el microscopio electrnico al funcionar como receptores especficos para determinadas partculas vricas, por lo que pueden observarse con facilidad cuando estn recubiertos con virus. Los pili son proyecciones tipo fibroso de las clulas. Estn relacionados con la conjugacin sexual y otros permiten la adherencia de la bacteria a las superficies epiteliales del husped que infecta.

ENVOLTURA CELULAR
CAPSULA Y MUCUS O GLICOCALIX MEMBRANA CITOPLASMATICA PARED CELULAR

CAPSULA, GLICOCALIX

Muchas bacterias son capaces de acumular material en el exterior para recubrir su superficie. LA CAPSULA, es una estructura rgida, bien definida que rodea a la clula y que se une firmemente a la superficie bacteriana.. Ej: Bacillus megaterium.1 EL GLICOCALIX, es flexible y se une de forma laxa, es cuando el polmero forma una maraa de fibras que se extiende fuera de la clula.. Ej: Klebsiella

CAPSULA, GLICOCALIX

La formacin de estas estructuras extracelulares depende del sistema de secrecin bacteriano. Este sistema transfiere protenas desde el citoplasma al periplasma o al espacio que rodea a la clula. Los sistemas de secrecin son esenciales para la virulencia de los patgenos

Capsula Glicocalix Biopelicula

CAPSULAS

El material capsular pueden ser polmeros de un nico monosacrido (glucosa, dextrano, levano) o heteropolisacridos que contienen tanto hexosas como pentosas, ms ribitol, glicerol u otros alcoholes azcar. Los fosfatos con frecuencia tambin estn presentes. En Bacillus es de naturaleza polipeptdica. La cpsula es sintetizada a nivel de la membrana celular, sus componentes son sintetizados y exportados fuera de la clula por un sistema transportador para lpidos isoprenoides, en el cual los componentes se unen a un material capsular Bacteria que presentan cpsula: Streptococus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae,y Neisseria meningitidis, Cryptococcus neoformans.

FUNCIONES
Protege a la clula de la desecacin y de materiales txicos del medio ambiente (metales pesados y radicales libres) y promueve la concentracin de nutrientes en la superficie de la bacteria debido a su naturaleza polianinica. La cpsula tambin tiene participacin en la adherencia de las bacterias a las clulas y mucosas superficiales. Esta adherencia permite que los microorganismos establezcan infecciones en los huspedes adecuados y permite la formacin de biopelculas, La cpsula ofrece resistencia a la accin bactericida del complemento y de los anticuerpos sricos. Estas estructuras protegen a las bacterias y evita que sean fagocitadas por los macrfagos Actun como antgenos y estar implicadas en el reconocimiento bacteriano

TINCION DE CAPSULA
La cpsula es una capa mucosa, ms o menos gruesa, que envuelve la pared celular de algunas bacterias. Est compuesta de polisacridos, mucopolisacridos o polipptidos. A consecuencia de su elevado contenido en agua, se tien dbilmente por los colorantes. Algunas tcnicas colorean el fondo de la preparacin, destacando sobre l las cpsulas sin teir. Nota: Preparacin de los frotis: debe realizarse un frotis espeso a partir de una suspensin de los grmenes en suero sanguneo a 1/3 en suero fisiolgico.

METODO DE HISS

Reactivos: Solucin acuosa de cristal violeta 1%. Solucin acusoa de sulfato de cobre 2%.
Tcnica: Se fija el frotis al calor. Se cubre la preparacin con cristal violeta y se calienta a vapor fluente durante 1 minuto. Se lava con sulfato de cobre. Se seca a temperatura ambiente. Observar a 100X. Las cpsulas se habrn coloreado de azul plido, las bacterias de color prpura y el fondo de color claro.

TINTA CHINA
Reactivos: Solucin de fucsina diluida. Nigrosina o tinta china Tcnica: Se fija el frotis al calor. Agregar la fucsina diluida durante 2 minuto. Se lava con agua destilada Se seca a temperatura ambiente. Se coloca, en un extremo del portaobjeto dos gotas de nigrosina o tinta china y se hace una extensin por el mtodo de los dos portaobjetos. Se seca. Observar a 100X. Al haber hecho la extensin con la nigrosina, el fondo aparecer negro, las bacterias teidas de rojo por la fucsina y la cpsula ser un halo blanco que las envuelve.

ESTRUCTURAS CITOPLASMATICAS
CUERPO NUCLEAR RIBOSOMAS
POLIAMINAS Y PROTEINAS SIMILHISTONAS GRANULOS CITOPLASMATICOS

ENDOSPORAS BACTERIANAS

CUERPO NUCLEAR
El ADN bacteriano puede ser detectado como nucleiodes o cuerpos de cromatina con microscopio ptico empleando la coloracin de Feilgen, es difcil demostrar los cuerpos de cromatina debido a la alta concentracin de ARN.

El tratamiento previo con ribonucleasa elimina casi todo al ARN, y los cuerpos de cromatina pueden verse. Con microscopio electrnico se observa material nuclear como una red irregular, delgada, fibrilar de ADN, que corre paralela al eje de la clula. El ADN bacteriano representa un 2 a 3% del peso celular, ocupa el 10% del volumen de la clula, esta difusin permite una rpida difusin de los materiales solubles hacia todas las partes de la estructura nuclear.

RIBOSOMAS
Los ribosomas estn compuestos por 30% de protenas y de 70% de ARN. La lisis suave de la clula en crecimiento hace que aparezcan agregados polirribosomas y membrana, que contienen todo el mecanismo de sntesis protica: Los polirribosomas son cadenas de ribosoma 70S manmeros, fijados al ARN mensajero. El nmero de ribosomas vara con las condiciones de crecimiento: Clulas de crecimiento rpido en medios ricos contienen muchos ms ribosomas. SUBUNIDADES, La estabilidad de los cromosomas depende de Mg+2 , con bajas concentraciones de Magnesio, los ribosomas 70 S, se disocian en monmeros ribosmicos 50S y 30S.

POLIAMINAS Y PROTEINAS SIMILHISTONAS

Las poliaminas se encuentran asociadas con ribosomas y membranas. Las principales son: Putrescina y Espermidina, ejercen un efecto antimutagnico, impiden la disociacin de los ribosomas 70S en sus componentes 30S y 50S y aumentan la resistencia de los protoplastos a la lisis osmtica. Protenas simil Histonas se ha encontrado en pequea cantidad en asociacin con el ADN de E. coli

GRANULOS CITOPLASMATICOS
Los grnulos identificados por procedimientos de tincin adecuados indican la acumulacin de reservas de alimentos, incluyendo polisacridos, lpidos o polifosfatos. El nmero y el tipo de grnulos de almacenamiento vara con el medio y el estado funcional de las clulas.

GRANULOS CITOPLASMATICOS
El glucgeno es el principal material de almacenamiento de las bacterias entricas y constituye el 40% del peso. Mientras que algunas especies de Bacillus y Pseudomonas acumulan un 30% como poli--hidroxibutarato Los polmeros de alto peso molecular (polifosfatos) como el polihexametafosfato conocidos como granulos metacromticos o volutina se producen en especies de Corynebacterium, Yersinia pestis y especies de Mycobacteria. Estos grnulos de volutina se ven rojo rosceo cuando se tien con azul de metileno.

ENDOSPORAS BACTERIANAS
Las endosporas se forman en respuesta a la falta de nutrientes dentro de la clula bacteriana vegetativa. Estas estructuras son altamente resistentes a los efectos destructivos del calor, sequedad, presin y muchos agentes desinfectantes. Se requiere de 120C por 15 a 20 minutos para matar esporas. Se cree que la resistencia al calor de las endosporas se debe al reducido contenido de agua en el centro propiamente dicho de la espora.

Las endosporas son estructuras esfricas u ovales formadas dentro de ciertas especies bacterianas que representan un estado latente o de reposo en el ciclo de crecimiento de esos microorganismos.
El proceso de germinacin ocurre en tres etapas

iniciacin activacin excrecencia

ENDOSPORAS BACTERIANAS
La formacin de endosporas es un rasgo distintivo de la familia Bacillaceae, que incluye al gnero aerobio, Bacillus y el gnero anaerobio Clostridium. Entre las bacterias con importancia clnica , las endosporas slo se presentan en 2 gneros. Las bacterias aerobias grampositivas formadoras de endosporas pertenecientea al gnero Bacillus y los anaerobios obligados del gnero Clostridium.

ESPORAS
Bajo los estmulos de ciertas condiciones ambientales como el agotamiento de nutrientes (glucosa, nitrgeno o fosfato) o la exposicin a temperaturas o potenciales redox subptimos, el material nuclear se divide en dos nucleoides, y uno se separa del otro por un septo membranoso. El septo crece y el centro de la espora termina rodeado por una doble membrana. Entre las dos membranas, una capa cortical se deposita sobre ellas. Esta corteza consta principalmente de material peptidoglicano. La capa cortical se endurece y acumula iones calcio debido a la actividad quelante de una molcula singular llamada cido dipicolnico.

ESPORAS
El centro queda protegido por la alta concentracin de iones calcio que entrecruzan fuertemente el material peptidoglicano y toda el agua contenida en la espora es expulsada. Varias capas de la cubierta de la espora (una sustancia de tipo queratina que es rica en enlaces disulfuro) se depositan y la espora es liberada en el momento en que muere y se lisa la clula madre vegetativa. Las endoporas pueden permanecer por durante perodos prolongados.

ESPORAS
Cuando la endospora es colocada en condiciones ambientales favorables en presencia de algn estmulo particular (presencia de una aminocido particular, hidrato de carbono o agua) se produce su germinacin. Bajo este estmulo las clulas son activadas, degradan la corteza de la espora y lilberan material peptidoglicano, los iones calcio y el cido dipicolnico. Comienza la sntesis del RNA, seguido por la sntesis de protenas y, finalmente, la sntesis de DNA. El resultado es una nueva clula vegetativa.

BACTERIAS

Segn su localizacin en la clula, se distinguen tres tipos de esporas

Subterminales Terminales

Centrales

POSICION DE LA ESPORA
El tamao, la forma y la localizacin de las esporas incipientes en clulas en fase estacionaria de especies Clostridium y Bacillus es til para la caracterizacin e identificacin de ciertas especies dentro de estos dos gneros.
Las endosporas pueden ser esfricas u ovales; pueden diferir en su localizacin dentro de la clula es decir, central, terminal o subterminal y pueden o no hinchar la clula. Las endosporas generalmente no se tien por el mtodo de Gram y aparecen cuerpos refractarios, no teidos en los extendidos.

POSICION DE LA ESPORA
A. ENDOSPORAS CENTRALES Estn situadas en el centro de la clula. B. ENDOSPORAS SUBTERMINALES Se encuentran prximas al extremo. Bacilos grampositivos sobrecoloreados con endosporas subterminales. Caracterstico del Bacillus y Clostridium. La diferencia se realiza en base a que el Bacillus es aerobio o anaerobio facultativo y el Clostridium es anaerobio obligado. C. ENDOSPORAS TERMINALES Se encuentran situadas en el extremo. Clostridium tetani

MORFOLOGIA MICROSCOPICA Y REACCIONES TINTORIALES

TINCION DE LAS ESPORAS Las esporas son la forma de resistencia de las bacterias. Tienen forma esfrica u oval. Al microscopio, las esporas sin teir se observan como grnulos brillantes. Se tien con verde malaquita o carbolfucsina y en suspensiones de bacterias sin teir se observan como cuerpos refringentes intracelulares. Ej: Clostridium

BACTERIAS
A. TINCION DE GRAM: Las bacterias se tien de color violeta, mientras que las esporas no se colorean dejando espacios vacos.

B. TINCION DE WIRTZ CONKLIN Las esporas se habrn teido de verde y las clulas bacterias de color rojo.

BACTERIAS

C. TINCION DE MOELLER Las esporas se habrn teido de rojo o rosado y las bacterias azules.

FASES DE LA FORMACIN DE ENDOSPORAS BACTERIANAS