Classification et perspectives dvolution des -lactamases chez les BGN

Kildie Barrial (Bactriologie XR) Julie Scotet (Virologie XR)

Encadrement : Dr SylvestreTIGAUD (Bactriologie XR)

DES BACTERIOLOGIE

17 fvrier 2006

LES -LACTAMASES : Gnralits

Enzymes michaeliens complexe enzyme/substrat

Action dpendante de :
Constante daffinit Km Vitesse dhydrolyse Vmax Quantit denzyme disponible

Hydrolyse pont amide du cycle -lactame : acylenzyme acide inactif

Pnicillines acide pnicilloque Cphalosporines acide cphalosporoque

Diffrence majeure avec les PLP : vitesse dhydrolyse

LES -LACTAMASES : Gnralits

Caractristiques des -lactamases :

Protines : PM, pHi, antignicit Profil de substrat (Km, Vmax) Profil dinhibiteurs Nature du site actif

2 types :
Srine--lactamases : Site actif srine Mtallo--lactamases : Ncessitent ions Zn2+ pour leur activit

Support gntique :
Chromosomique : constitutif ou inductible Plasmidique : transmission stable Intgron Transposon

LES -LACTAMASES : Gnralits

Rsistance :
Naturelle : chromosomique (constitutive ou inductible) Acquise :
Chromosomique : mutation gne de structure ou de rgulation Plasmidique Transposon

Le spectre dactivit peut tre approch par les phnotypes bas niveau en labsence de mutation

Pnicillinases bas niveau :

Pni G, Pni A, carboxy- et urido-pnicillines Inhibes par acide clavulanique

Cphalosporinases bas niveau :

Pni G, Pni A, C1G (cfalotine), certaines C2G Non inhibes par lacide clavulanique

LES -LACTAMASES : Classifications

Critres pris en compte :

Caractristiques physiques Phnotype : Pnicillinases, cphalosporinases Nature du site actif (srine) Squence AA Origine (chromosomique, plasmidique) Situation constitutive ou inductible

LES -LACTAMASES : Classifications

Ambler Date Support Classification Pratique mdicale 1980 analogies de squence peptidique 4 classes : A, B, C et D +++ Bush-Jacobi-Medeiros 1989, remise jour en 1995 profil de substrat et profil dinhibition 3 grands groupes : 1, 2 (8 sous-groupes) et 3 +

Arbre phylognique

Prsentation successive des 4 classes de lactamases selon larticle :

Philippon A, Arlet G. Les -lactamases chez les bacilles gram ngatif : que de nouveauts en 15 ans! Antibiotiques 2005; 7 : 247-259.

Mdiation chromosomique puis plasmidique

CLASSE A : Srine-enzymes
Spectre dactivit de base :
R : Ampicilline, Ticarcilline, Cfalotine +/S : Pipracilline, Cfoxitine, C3G, Aztronam et Carbapnmes Inhibition par lacide clavulanique

Mdiation :
Chromosomique Plasmidique

CLASSE A : Srine-enzymes
1- Pnicillinases (BSBL?)
Chromosomique / Constitutive

Bas niveau
Phnotype sauvage de K. pneumoniae : SHV-1, Len-1, OKP
R : Ampicilline/Ticarcilline S : Augmentin, Cfalotine, C3G, Carbapnmes

Phnotype sauvage de K. oxytoca : OXY-1 et 2

Affinit plus importante pour C3G

Mutant promoteur fort

K. oxytoca : Hyperproduction naturelle denzyme
R : Ampicilline, Ticarcilline, Pipracilline, C1G, C2G, C3G variable (ceftriaxone, cfotaxime), Aztronam
Inhibe par AC

CLASSE A : Srine-enzymes
2- Cfuroximase
Chromosomique / Inductible

Phnotype sauvage de Proteus vulgaris (Groupe 5), Kluyvera ascorbata

R : Ampicilline, Ticarcilline, C1G et C2G Inhibe par AC

3- Carbapnmases chromosomiques
Chromosomiques Peu frquentes / Acquise S. marcescens et E. cloacae R : Ampicilline, Aztronam et Imipnme S : C3G

Exemples : IMI, SME et NMC-A

CLASSE A : Srine-enzymes
4- -lactamases larges spectres : TEM-1 -2 et SHV-1
Plus frquentes Plasmidiques TEM-1 dcouverte chez E. coli R : Ampicilline, Ticarcilline, Pipracilline, C1G et C2G Inhibe par AC Mutation ponctuelle sur le gne du plasmide

Pnicillinases HN

BLSE

TRI

CLASSE A : Srine-enzymes
5- Pnicillinases haut niveau
Plasmidiques Copies multiples de TEM et SHV Acquis par pression de slection des IBL R : Ampicilline, Ticarcilline, Pipracilline, Cfalotine Augmentation des CMI => Effet contact I : Augmentin S: Pipracilline + Tazocilline, C3G, Carbapmnes

Surtout chez E. coli

CLASSE A : Srine-enzymes
6- -lactamase spectre tendu : BLSE
Mutants de TEM-1, TEM-2 et SHV-1 ou transfert depuis Kluyvera
E. coli et K. pneumoniae Familles majeures :

Types TEM, SHV, GES, et CTX-M

R : Ampicilline, Ticarcilline, Pipracilline, C1G, C2G, C3G, Cfpime/Cefpirome, Aztronam

S/I : BL + IBL
S : Cphamycines, Carbapnmes

Evolution des TEM

BLSE drives de TEM

---------Ser238-------O H O N C N CONH CH3

Interaction Srine 238 et oxime des C3G

NH2

o H O COO-

CH2-R NH3+

Ser70

Lys

BLSE drives de SHV

Bouchon de champagne ou test de synergie

CASFM

CAZ
2 cm 2 cm

CTX

AMC
3 cm 2 cm

AMC : Amoxicilline + AC CAZ : Ceftazidime CTX : Cfotaxime FEP : Cfpime/Cefpirome AZT : Aztronam

AZT FEP

Sur glose Mueller Hinton Incubation 18 24 heures l tuve 37C

Interprtation
BLSE ou bouchon de champagne si la zone dinhibition de la pousse bactrienne est largie entre le disque dAMC et celui de Cfpime, Cefotaxime, Ceftazidime ou dAZT

CTX

FEP CAZ AMC

AZT

Co-rsistance Aminosides, Ttracyclines et FQ

CLASSE A : Srine-enzymes
7- CTX-M
BLSE de type non-TEM, non-SHV

S. typhimurium, E. coli, K. pneumoniae

Hydrolyse : Cfotaxime >> Ceftazidime Inhibition par Tazobactam > AC 98% homologies entre la -lactamase chromosomique de Kluyvera ascorbata et certaines CTX-M

Squence dacides amins :

Groupe 1: CTX-M-2, 4, 5, 6, 7, 20 et Toho-1

Groupe 2: CTX-M-1, 3, 10, 11, 12, 15, 22, 23 et 28

Groupe 3: CTX-M-8 Groupe 4: CTX-M-9, 13, 16, 14, 17, 18, 19, 21, 24, 27 et Toho-2 Groupe 5: CTX-M-25 et CTX-M-26 Apparition de CTX-M : CTX-M 15 Hydrolyse cfotaxime

CLASSE A : Srine-enzymes
8- Imipnmases plasmidiques
Plasmidiques P. aeruginosa : KPC Klebsiella : GES-2, IBC-2 Acquis

Mutation de certaines BLSE : GES-1

R : Ampicilline, Ticarcilline et C3G, Imipnme S : Pipracilline et Aztronam

CLASSE B : Mtallo-enzymes

Large spectre :
Plupart des -lactamines, y compris les carbapnmes ( carbapnmases ) Seul lAztronam semble peu ou pas inactiv Ac. clavulanique inefficace

Mtallo--lactamases chromosomiques :
S. maltophilia (L1) B. cepacia (blaB) Klebsiella, E. coli (IMP-2)

Mtallo--lactamases plasmidiques :
Emergence depuis une dizaine dannes (Asie SE +++) P. aeruginosa, Acinetobacter baumannii Puis chez entrobactries et autres BGN comme P. putida, et P. stutzeri

CLASSE B : Mtallo-enzymes
IMP-1 : Klebsiella pneumoniae Serratia marcescens Citrobacter freundii Pseudomonas putida, P. stutzeri Acinetobacter baumannii, A. junii IMP-2, IMP-5 : A. baumannii IMP-3 : Serratia flexneri IMP-4 : Acinetobacter sp., Citrobacter youngae IMP-6 : S. marcescens IMP-7, IMP-9, IMP-10 : Pseudomonas aeruginosa IMP-8 : K. pneumoniae VIM-1 : P. aeruginosa A. baumannii E. coli VIM-2 : P. aeruginosa, P. putida, P. stutzeri S. marcescens A. baumannii VIM-3, VIM-4, VIM-5, VIM-7, VIM-8 : P. aeruginosa VIM-6 : P. putida SPM-1, GIM-1 : P. aeruginosa

Type IMP

Type VIM

Autres types -

CLASSE C : Srine-enzymes

-lactamases chromosomiques ampC :

Gne ampC : systme le plus souvent rgul et inductible (ampR)
-lactamines

+
ampR ampC ampD

-lactamase scrte = cphalosporinase : - Hydrolyse ampicilline, cfalotine - Ticarcilline trs mal hydrolyse - Pas dinhibition par lacide clavulanique

CLASSE C : Srine-enzymes

-lactamases chromosomiques ampC :

Groupe 1 Entrobactries (ex : E. coli) :
Taux scrtion trs faible car AmpR absent gne non exprim Sensibilit ampicilline, cfalotine Possibilit de mutants promoteurs forts : taux scrtion de lenzyme et donc rsistance ampicilline/cfalotine

Groupe 3 Entrobactries (E. cloacae, C. freundii) et P. aeruginosa : Taux scrtion phnotypiquement significatif (systme de rgulation complet) Phnotype sauvage : - R ampicilline/cfalotine/Augmentin - S ticarcilline/cfotaxime
Possibilit de mutants drprims : hyperproduction cphalosporinase avec R ticarcilline/pipracilline/C3G/ aztronam (S aux C4G/IMP)

CLASSE C : Srine-enzymes

-lactamases chromosomiques ampC mutes :

Rsistance acquise aux C4G : rare mais existe (France/USA) E. cloacae, E. aerogenes, S. marcescens Cphalosporinase hyperproduite + mutation Km vis vis des C4G Rsistance acquise lIMP E. cloacae, E. aerogenes Cphalosporinase hyperproduite + perte dune porine

CLASSE C : Srine-enzymes

-lactamases plasmidiques ampC :

Emergence depuis quelques annes Klebsiella +++, S. enterica, P. mirabilis, E. coli Phnotype de rsistance cphalosporinase hyperproduite R C3G/Augmentin/cfoxitine S C4G/imipnme +/Transmission systme de rgulation ampC complet : Ex : Dharam1 chez Salmonella enteritidis Cphalosporinase inductible : antagonisme IMP/cfotaxime ou aztronam

Ou systme de rgulation ampC incomplet (ex : CMY) Cphalosporinase non inductible

CLASSE C : Srine-enzymes

-lactamases plasmidiques ampC : phylognie

CLASSE C : Srine-enzymes

-lactamases plasmidiques ampC : tude parent structurale

DHA-1 plasmidique de K. pneumoniae / -lactamase chromosomique de M. morganii : prsence du gne ampR

CMY plasmidiques / -lactamase

plasmidique de C. freundii : parent seulement au niveau du gne de structure (ampR absent) situation constitutive

CLASSE C : Srine-enzymes

-lactamases plasmidiques ampC :

CLASSE D : Srine-enzymes
Trs htrognes (<50% homologies) R : Pnicillines M Oxacilline, cloxacilline => OXAcillinases Peu/pas inhibes par lAC

Mdiation Chromosomique Pseudomonas aeruginosa (OXA-50)

Prsence systmatique

Plasmidique Pseudomonas aeruginosa (OXA-2)

CLASSE D : Srine-enzymes
Evolution importante : Mutation ponctuelle OXA-2, 10 et 13 => BLSE type OXA R : C3G => Cfotaxime, cfpime et aztronam Nouvelles OXA => Carbapnmases Acinetobacter baumannii

CONCLUSION
-lactamases : volution lie la pression de slection exerce par des -lactamines de plus en plus stables Emergence de -lactamases mutes avec spectre de plus en plus tendu et possibilit de passage en situation plasmidique Donc risque de transmission dans le monde bactrien Diffusion mondiale importante et rapide Associations plusieurs mcanismes de rsistance, enzymatiques ou non Intrt du gnotypage +++

Classification des Entrobactries - Vincent JARLIER : Phnotype sauvage Classe 0 : Salmonella spp
Absence de production de -lactamases Absence de ampC

Classe 1 : E. coli, P. mirabilis, Shigella spp

Production non significative de -lactamases Absence de ampR

Classe 2 : K. pneumonia, K. oxytoca, C. koseri

Pnicillinase chromosomique bas niveau

Classe 3 : E. cloacae, C. frundii, M. morganii, S. marcescens

Cphalosporinase chromosomique inductible rsistante aux IBL (ampC)

Classe 4 : Yersinia spp

Pnicillinase + Cphalosporinase (ampC)

Classe 5 : Proteus vulgaris

Cphalosporinase chromosomique inductible sensible aux IBL (Cfuroximases)

BIBLIOGRAPHIE

Bush K, Jacoby GA, Medeiros AA. A functional classification scheme for -lactamases and its correlation with molecular structure. Antimicrobial Agents and Chemotherapy.1995;39:1211-33. Bush K. New beta-lactamases in gram-negative bacteria: diversity and impact on the selection of antibiomicrobial therapy. Clinical Infectious Disease. 200;32:1085-9. Dubouix A, Marty N. Dtection des entrobactries productrices de bta-lactamases spectre tendu par biologie molculaire : avantages, limites. Antibiotiques 2004;6:193-201. Jacoby GA., Bush K. Betalactamase nomenclature. J. Clin Microbiol. 2005; 43(12):6220. Naas T., Nordmann P., Vedel G., Poyar C. Nouvelles -lactamases. AAC; 2005.

Paterson D. and Bonomo R. Extended-spectrum -lactamases : a clinical update. Clinical microbiology reviews. Oct. 2005; 657-686.
Philippon A., Arlet G. Les -lactamases chez les bacilles gram ngatif : que de nouveauts en 15 ans! Antibiotiques 2005; 7:247-259. Philippon A., Arlet G., Jacoby GA. Plasmid-Determined AmpC-Type -Lactamases. Antimicrobial Agents And Chemotherapy. 2002; p.1-11. Dr R. Bonnet Entrobactries et -lactamines - CHU Clermont-Ferrand Dr M.L Joly-Guillou Acinetobacter et -lactamases CHU Angers Dr Nordmann -lactamines et Pseudomonas aeruginosa Universit Paris XI Dr S. Tigaud -lactamases -Interpretative reading of susceptibility testing CHU Lyon