ENZIMAS

Propriedades - Nomenclatura -Aplicabilidade

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INTRODUO - DEFINIO

ENZIMAS

Aminocidos: H R C* COOH

Definio: Catalisadores biolgicos; NH2 Longas cadeias de pequenas molculas chamadas aminocidos.

Funo: Viabilizar a atividade das clulas, quebrando molculas ou juntando-as para formar novos compostos. Com exceo de um pequeno grupo de molculas de RNA com propriedades catalticas, chamadas de RIBOZIMAS, todas as enzimas so PROTENAS.

ENZIMAS CARACTERSTICAS GERAIS

Apresentam alto grau de especificidade; So produtos naturais biolgicos Reaes baratas e seguras;

So altamente eficientes, acelerando a velocidade das reaes (108 a 1011 + rpida);

So econmicas, reduzindo a energia de ativao;

No so txicas; Condies favorveis de pH, temperatura, polaridade do solvente e fora inica.

ENZIMAS NOMENCLATURA
Sculo XIX - poucas enzimas identificadas
- Adio do sufixo ASE ao nome do substrato: * gorduras (lipo - grego) LIPASE * amido (amylon - grego) AMILASE - Nomes arbitrrios: * Tripsina e pepsina proteases

ENZIMAS CATALISADORES
Aceleram reaes qumicas
H2O2 Ex: Decomposio do H2O2
Condies da Reao
Catalase

H2O +

O2
Velocidade Relativa

Energia livre de Ativao KJ/mol Kcal/mol

Sem catalisador

75,2 48,9 23,0

18,0 11,7 5,5

1
2,77 x 104 6,51 x 108

Platina
Enzima Catalase

ENZIMAS CATALISADORES
No so consumidos na reao

H2O2

Catalase

H2O + O2

E+S

E+P

ENZIMAS CATALISADORES
Atuam em pequenas concentraes
decompe 5 000 000 de molculas de H2O2 pH = 6,8 em 1 min

1 molcula de Catalase

Nmero de renovao = n de molculas de

substrato convertidas em produto por uma nica molcula de enzima em uma dada unidade de tempo.

ENZIMAS CATALISADORES
No alteram o estado de equilbrio Abaixam a energia de ativao; Keq no afetado pela enzima.
No apresenta efeito termodinmico global G no afetada pela enzima.
Energia de ativao sem enzima
Diferena entre a energia livre de S e P

Energia de ativao com enzima

Caminho da Reao

ENZIMAS COMPONENTES DA REAO

E+S

ES

P+E

Substrato se liga ao STIO ATIVO da enzima

ENZIMAS STIO ATIVO

Regio da molcula enzimtica da reao com o substrato. que participa

Pode possuir componentes no proticos:cofatores. Possui aminocidos auxiliares e de contato.

Poro protica Cofator APOENZIMA

Ativador:ons inorgnicos que condicionam a ao cataltica das enzimas. Fe+ Coenzima: molcula orgnica complexa.NAD+

HOLOENZIMA Grupamento prosttico

ENZIMAS COFATOR
Algumas enzimas que contm ou necessitam de elementos inorgnicos como cofatores
ENZIMA PEROXIDASE CATALASE CITOCROMO OXIDASE LCOOL DESIDROGENASE Cu+2 Zn+2 COFATOR Fe+2 ou Fe+3

HEXOQUINASE
UREASE

Mg+2
Ni+2

ENZIMAS COENZIMAS
Maioria deriva de vitaminas hidrossolveis Classificam-se em: - transportadoras de hidrognio - transportadoras de grupos qumicos

Transportadoras de hidrognio Coenzima Abreviatura Reao Origem catalisada Nicotinamida adenina NAD+ Oxi-reduo Niacina ou
dinucleotdio Nicotinamida adenina NADP+ dinucleotdio fosfato Flavina adenina FAD dinucleotdio Vitamina B3 Oxi-reduo Niacina ou Vitamina B3 Oxi-reduo Riboflavina ou Vitamina B2

ENZIMAS
Oxidorredutases: So enzimas que catalisam

reaes de transferncia de eltrons, ou seja: reaes de oxi-reduo. So as Desidrogenases e as Oxidases. Transferases : Enzimas que catalisam reaes de transferncia de grupamentos funcionais como grupos amina, fosfato, acil, carboxil, etc. Como exemplo temos as Quinases e as Transaminases. Hidrolases : Catalisam reaes de hidrlise de ligao covalente. Ex: As peptidades.

 Isomerases:

Catalisam reaes interconverso entre ismeros pticos geomtricos. As Epimerases so exemplos.

de ou

Ligases: Catalisam reaes de formao e novas molculas a partir da ligao entre duas j existentes, sempre s custas de energia (ATP). So as Sintetases.

ENZIMAS LIGAO ENZIMA - SUBSTRATO

Emil Fischer (1894): alto grau de especificidade das enzimas originou Chave-Fechadura , que considera que a enzima possui sitio ativo complementar ao substrato.

ENZIMAS LIGAO ENZIMA - SUBSTRATO

Koshland (1958): Encaixe Induzido , enzima e o o substrato sofrem conformao para o encaixe. O substrato distorcido para conformao exata do estado de transio.

ENZIMAS ATIVIDADE ENZIMTICA

Fatores que alteram a velocidade de reaes enzimticas: pH; temperatura; concentrao das enzimas; concentrao dos substratos; presena de inibidores.

ENZIMAS INFLUNCIA DO PH
O efeito do pH sobre a enzima deve-se s variaes no estado de ionizao dos componentes do sistema medida que o pH varia. Enzimas grupos ionizveis, existem em estados de ionizao.

Lipdios

Lipdios

ENZIMAS INFLUNCIA DA TEMPERATURA

temperatura dois efeitos ocorrem: (a) a taxa de reao aumenta, como se observa na maioria das reaes qumicas; (b) a estabilidade da protena decresce devido a desativao trmica.

Enzima temperatura tima para que atinja sua atividade mxima, a temperatura mxima na qual a enzima possui uma atividade cte. por um perodo de tempo.

Influncia da concentrao de substrato sobre a atividade enzimtica

Mantidas fixas as condies de - temperatura tima - pH timo - [enzima]

[S]
Lipdios

Influncia da concentrao de substrato sobre a atividade enzimtica

Baixa concentrao de substrato

S +

E
E

E
E

E E

E E

E E

E E

P
P

Formao do produto PROPORCIONAL concentrao de substrato

Lipdios

Influncia da concentrao de substrato sobre a atividade enzimtica

3/4 de saturao do centro ativo da enzima S S + S
E E E E

S S

E E

E E

P
E E E E

P
+ P P P P

100 % de saturao do centro ativo da enzima S S

E E E

S S

E E

E E

S S

P
E E E E

S
S

+ P P P

P P P P

Formao do produto PROPORCIONAL concentrao de substrato

Influncia da concentrao de substrato sobre a atividade enzimtica

[Substrato] em excesso S S S S S + S S S S S S S S S S

E
E

E
E

E
E

E
E

E
E

E
E

+ P P P S S

P
P P S S

Velocidade da reao independe da [S]

Influncia da concentrao de substrato sobre a atividade enzimtica

Em baixas concentraes de substrato a velocidade de reao de primeira ordem isto , proporcional a concentrao de substrato

Em altas concentraes de substrato, a velocidade da reao de ordem zero isto , constante e independente da concentrao de substrato

[S]
Lipdios

Atividade Enzimtica

Depende tambm:

presena e concentrao do cofator poder cataltico da enzima

capacidade da enzima de transformar o substrato ligado ao complexo ES em produto por unidade de tempo ES E + P maior ou menor capacidade da enzima de se ligar ao substrato E + S ES

afinidade enzima pelo substrato (Km) afinidadeda da enzima pelo substrato (Km)

Lipdios

Enzimas Cintica enzimtica

1913 Leonor Michaelis -Enzimologista Maude Menten - Pediatra Representaram uma reao enzimtica em 2 etapas
K1

E+S
K2

ES

K3

E +P
K4

K= constante de velocidade=

[produto] [substrato]

Enzimas - Cintica enzimtica

K1 K3

E+S
K2

ES

E +P
K4

Estabilidade do complexo ES pode ser expressa pela relao entre as velocidades de dissociao e de formao do complexo

Km =

K2+ K3 K1

Especfico para cada enzima

Enzimas - Cintica enzimtica

Km
Constante de Michaelis
Medida da afinidade do complexo enzima-substrato (ES)

Especfico para cada enzima

Cintica enzimtica
V
V mx
Vmax 2

Km= [S]

[S]

Numericamente, Km pode ser expresso como a [substrato] necessria para que a velocidade da reao seja metade da velocidade mxima

Cintica enzimtica Concluses sobre Km

Km
Pequena [substrato] necessria para a reao atingir metade da Vmxima

Afinidade da enzima pelo substrato

Grande [substrato] necessria para a reao atingir metade da Vmxima

Km

Afinidade da enzima pelo substrato

Cintica enzimtica

Km

Km

Afinidade da enzima pelo substrato

Afinidade da enzima pelo substrato

Concluses sobre a Cintica Michaeliana

Quando a [S] for menor que o Km (at atingir a saturao da enzima) a velocidade da reao proporcional [S] Reao de 1a ORDEM

Quando a [S] muito maior que Km a velocidade da reao constante e igual a Vmax Reao de ORDEM ZERO

[S]

Grfico caracterstico uma hiprbole

Inibio Enzimtica
Quanto ao tipo: inespecfica - inibidor a atividade de todas
as enzimas ex: agentes desnaturantes

especfica - inibidor a atividade de uma

nica enzima ou de um grupo restrito de enzimas irreversvel reversvel competitiva
no-competiti
Lipdios

Inibio Enzimtica

Inibio Enzimtica Irreversvel

inibidor se combina com um grupo funcional (stio ativo) da enzima

inibidor se liga enzima formando um complexo ESTVEL forma-se uma ligao COVALENTE entre o inibidor e a enzima

Inibio Enzimtica Irreversvel

Ex: Inibio da enzima ciclo-oxigenase pelo acetilsalicilato

Ciclo-oxigenase

cido araquidnico

Prostaglandinas

Lipdios

Processos fisiolgicos, ex. sensao de dor

Inibio Enzimtica Irreversvel

Lipdios

Inibio Enzimtica

Inibio Enzimtica Reversvel

inibidor forma com a enzima um complexo INSTVEL inibio NO envolve modificao COVALENTE Tipos de inibidores reversveis
competitivos no competitivos incompetitivos

DIGESTO DOS LIPDIOS - O Orlistat um inibidor irreversvel da lipase

- Bloqueia a absoro de mais ou menos 30% da gordura presente na dieta - Uma publicao da tradicional revista
mdica Lancet relata que pacientes que tomaram trs cpsulas de Xenical dirias, de 120 mg, em conjuno com uma dieta branda de baixas calorias, perderam 70% de peso a mais do que aqueles que tinham sido submetidos apenas dieta.

DIGESTO DOS LIPDIOS

No tratamento da obesidade pode usar-se um frmaco (orlistat; xenical) que um inactivador (= inibidor irreversvel) da lipase pancretica.

O orlistat reage com uma serina (formando uma ligao covalente e irreversvel) situada no centro ativo da enzima bloqueando a sua actividade.

Inibio Competitiva
Inibidor competitivo Estrutura semelhante do substrato Liga-se ao Stio Ativo da Enzima
E+S + I EI ES E+P

Inibio Competitiva
Enzima
Stio Ativo

S S S S IC

S
S

P
P P P P

IC S
IC

IC IC
S
Lipdios

Inibio Competitiva
Na presena do inibidor competitivo afinidade da enzima pelo substrato

[substrato] necessria para que a enzima funcione normalmente

Km aparente da enzima

Inibio Enzimtica
Competitiva

Inibidor tem semelhana estrutural com o substrato O inibidor se liga no stio ativo da enzima Aumento da [substrato] diminui a inibio Km aparente da enzima AUMENTA Em uma concentrao suficientemente alta de substrato a VELOCIDADE da reao atinge a Vmx observada na ausncia do inibidor

Inibio Enzimtica
Competitiva

Inibidor tem semelhana estrutural com o substrato O inibidor se liga no stio ativo da enzima Aumento da [substrato] diminui a inibio Km aparente da enzima AUMENTA Em uma concentrao suficientemente alta de substrato a VELOCIDADE da reao atinge a Vmx observada na ausncia do inibidor

Inibio Competitiva
Anlise Grfica

Inibio Competitiva
Intoxicao por Metanol

URINA

Metanol
lcool desidrogenase

Formaldedo
Causa leso tecidual

Infuso EV Etanol

cegueria

Inibio Competitiva
Exemplo:Tratamento de hipercolesterolemia

Inibio No-Competitiva

Inibido no-competitivo
NO se liga ao stio ativo da enzima ES + I EIS E+P

E+S + I EI + S

Inibio Enzimtica
No-Competitiva

Inibidor no tem semelhana estrutural com o substrato NO se liga no stio ativo da enzima Aumento da [substrato] no diminui a inibio Km aparente da enzima NO se altera A VELOCIDADE mxima DIMINUI na presena do inibidor

Inibio No-Competitiva
Diminui a concentrao de enzima ativa

Velocidade Mxima da Reao

Exemplos: Metais pesados - Pb+2

Inibio No-Competitiva
Anlise Grfica