UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO E.P.

Ingeniera Mecnica Elctrica

CURSO: Ingeniera Ambiental

ANALISIS Y TRATAMIENO DE AGUAS

Ing. Norman Jess Beltrn Castan

ANALISIS MICROBIOLOGICO DEL AGUA

 ANALISIS MICROBIOLOGICO DEL AGUA Se puede definir el anlisis microbiolgico como el conjunto de operaciones encaminadas a determinar los microorganismos presentes en una muestra problema de AGUA. Tambin, son los procedimientos que se efectan a una muestra de agua para consumo humano para evaluar la presencia d o ausencia, tipo y cantidad de microorganismos

Anlisis microbiolgico.

Toma de muestras para anlisis microbiolgico Las muestras que se tomarn para el anlisis deben ser representativas para poder determinar as su calidad microbiolgica. Hay normas para la toma de muestras de aguas segn sus distintas procedencias (grifos, pozos, depsitos, lagos, ros, manantiales, etc.). Para su recogida debe utilizarse frascos estriles y debe recolectarse cantidades comprendidas entre 500 y 1000 ml. En todos los casos los envases se llenarn por completo para excluir el aire. Cuando se estime probable que el agua a analizar contenga trazas de cloro, cloramina y ozono, ser necesario neutralizar su efecto bactericida en el momento del muestreo. Para ello se aadir una cantidad suficiente de tiosulfato sdico. Para un volumen de 250 ml son suficientes 0,2 ml de una solucin acuosa al 3% de tiosulfato sdico. Su anlisis debe comenzar antes de que hayan transcurrido 6 h desde el momento de la toma de muestras. En circunstancias excepcionales, las muestras pueden conservarse a una temperatura de 4Cdurante un periodo mximo de 24 h antes de su anlisis.

Factores que inciden en la flora bacteriana . La acidez disminuye el contenido de microorganismos. La materia orgnica lo aumenta. Mucho oxgeno disuelto disminuye los microorganismos anaerobios Las sales, si son abundantes, producen que el agua sea casi estril. Si existe poca cantidad de sales se estimula el desarrollo bacteriano. La filtracin disminuye el nmero de microorganismos. La temperatura puede aumentar o disminuir el contenido bacteriano La turbidez hace que el contenido bacteriano pueda aumentar, ya que los rayos U.V. no manifiestan su accin. Los protozoos fagocitan bacterias y as disminuyen el nmero de estas.

Clasificacin de los contaminantes biolgicos Se describen a continuacin, de forma sucinta, las caractersticas de los diferentes agentes biolgicos as como algunos de los ejemplos ms representativos de cada grupo. Virus Un virus biolgico se trata de una partcula infecciosa, un organismo que se replica a si mismo en el interior de las clulas que ataca (clulas animales, vegetales o bacterianas). Podemos decir que no es un organismo totalmente vivo, ya que si analizamos la definicin de ser vivo nos encontramos con que: nacen, crecen, se reproducen y mueren, de las cuales el virus por si solos solo nacen y mueren, necesitan una clula a la que infectar para crecer y evolucionar. No tienen metabolismo propio, necesitan una clula a la infectar, son "parsitos". Son las formas de vida ms simples, estn constituidas nicamente por material gentico: ADN (Acido desoxirribonucleico) o ARN (Acido ribonucleico) y una cubierta proteica.

Son realmente pequeos, no se les puede ver sin un microscopio electrnico. El virus ms grande es de igual tamao (ms o menos) que la bacteria ms pequea (300nm). El virus ms pequeo mide tan solo 20 nm (lo que mide un simple ribosoma) lo que hace una difcil tarea el estudiarlos. Hay bsicamente tres tipos de virus: virus animal, virus vegetal y virus bacteriano. Esta clasificacin se basa en el tipo de clula a la que el virus tiende a infectar. Esto significa que, por ejemplo, un virus bacteriano jams infectara una clula animal o vegetal, cada virus tiene su propio tipo de clula a la que infectar. Tambin tienen diferentes maneras de entrar dentro de la clula a la que quieren infectar.

Bacterias Son organismos ms complejos que los virus y a diferencia de ellos son capaces de vivir, en un medio adecuado, sin la necesidad de un husped para completar su desarrollo. De todos modos un buen nmero de ellos son patgenos para el hombre. Es de destacar la capacidad de elaborar esporas que presentan algunas bacterias. Las esporas no son ms que formas de vida resistentes a condiciones adversas. Pueden resistir, durante aos incluso, altas temperaturas, sequedad, falta de nutrientes, etc., recuperando su estado normal y capacidad infectiva al entrar en contacto con un medio adecuado para su desarrollo. Las bacterias son procariotas, organismos vivos unicelulares que no tienen un ncleo verdadero; su material gentico flota dentro del citoplasma sin tener un compartimiento propio. Las clulas bacterianas miden unas cuantas micras de longitud y son capaces de multiplicarse en el ambiente fuera del hospedante, en condiciones favorables de nutrimentos, temperatura y acidez. Hay bacterias inocuas, benficas y dainas para el humano. Son enfermedades generadas por bacterias la fiebre tifoidea, el clera, la tuberculosis, la lepra, el ntrax y el botulismo, entre otras.

Intoxicaciones producidas por Escherichia coli y otras bacterias del grupo coliforme. Se han encontrado bacterias Proteus, Proteus vulgaris y Proteus mirabilis, en los alimentos que causan alteraciones intestinales pero no se ha comprobado que produzcan enterotoxina y determinen la intoxicacin. El Bacillus cereus produce intoxicacin alimenticia debido a que produce una enterotoxina. Los sntomas son parecidos a los de la bacteria Clostridium perfringes. Los japoneses han reportado una enfermedad alimenticia producida por un halfilo (Vibrio parahemolyticus). Protozoos Son organismos unicelulares siendo algunos de ellos parsitos de los vertebrados. Su ciclo vital es complejo, necesitando, en algunos casos, de varios huspedes para completar su desarrollo. La transmisin de un husped a otro la realizan habitualmente insectos. Viven en ambientes hmedos o directamente en medios acuticos, ya sean aguas saladas o aguas dulces; la reproduccin puede ser asexual por biparticin y tambin sexual por isogametos o por conjugacin intercambiando material gentico

 Hongos Los hongos no son plantas ni animales, aunque se parezcan en algunas de sus caractersticas tanto a las unas como a los otros. A las plantas, por ser organismos sedentarios que se encuentran fijos a un sustrato y, mientras estn vivos, no cesan de crecer. A los animales, pues, aunque las clulas de los hongos poseen pared como las de las plantas, las paredes celulares fngicas son ricas en quitina, la misma sustancia que hace duro el esqueleto externo de los insectos. Son formas complejas de vida que presentan una estructura vegetativa denominada micelio que est formada por hifas (estructuras filiformes por las que circula el citoplasma plurinucleado). Esta estructura vegetativa surge de la germinacin de sus clulas reproductoras o esporas. Su hbitat natural es el suelo, pero algunos componentes de este grupo son parsitos tanto de hombres y animales como de vegetales.

Helmintos Son organismos pluricelulares con ciclos vitales complejos y con diversas fases en su desarrollo. As, es frecuente que completen cada una de sus fases de desarrollo (huevo-larva-adulto) en diferentes huspedes (animales/hombre), y que la transmisin de un husped a otro sea realizada por diferentes vectores (agua/alimentos/insectos/roedores...).El trmino helminto, que significa gusano, se usa sobre todo en parasitologa, es decir para referirse a especies animales de cuerpo largo u blando que infestan el organismo de otras especies. De helminto derivan helmintologa, especialidad de la parasitologa que se centra en los helmintos, helmintiasis, que quiere decir infestacin por helmintos, y antihelmntico, adjetivo que se aplica a los frmacos y otros tratamientos con que se combaten las helmintiasis.

 Artrpodos Son organismos pluricelulares con ciclos vitales complejos y con diversas fases en su desarrollo, (huevolarva-adulto) fases que pueden ser completadas en diversos huspedes siendo transmitidas de unos a otros por varios vectores. Algunas especies de artrpodos son endoparsitos, es decir, atraviesan la superficie del cuerpo. Otras especies no penetran en el organismo sino que viven temporalmente sobre l, pudiendo causar el efecto adverso para la salud al inocular en el husped toxinas que producen diversas modificaciones patolgicas.

 Enfermedades transmitidas por el agua, ms comunes en la Regin

 Tifoidea Esta enfermedad infecciosa se caracteriza por fiebre continua. Otros sntomas son diarrea o estreimiento, cefaleas, dolores musculares y fatiga. La tifoidea es transmitida por los alimentos o el agua contaminada por las heces de una personas que padezca la enfermedad o sea portadora de la misma. Los pescados y mariscos y la leche son tambin medios de transmisin importantes, Cualquiera puede contraer esta enfermedad. La Hepatitis A Se trata de una enfermedad vrica sumamente contagiosa que causa una infeccin heptica leve. Los sntomas pueden ser fiebre, nusea, dolores abdominales, prdida del apetito e ictericia. La transmisin quiz ocurra por contacto directo de persona a persona, por consumo de agua o hielo contaminados, o por pescados y mariscos cosechados en agua contaminada con aguas residuales, o por frutas, hortalizas u otros alimentos que se comen sin cocinar, si estos se han contaminado durante su manipulacin

 Clera Es una enfermedad diarreica aguda, causada por infeccin intestinal. Es probablemente la ms conocida de las enfermedades diarreicas, ya que la mayora de las personas han odo hablar de ella. La infeccin suele ser leve y sin sntomas, pero puede ser grave. Puede contraerse de casos activos de la enfermedad o de sus portadores, simplemente con ingerir alimentos o agua contaminados. Tambin se sabe que el clera se transmite por ingestin de pescados y mariscos crudos. Esta enfermedad no se propaga directamente de una personas a otra, por lo que no se corre riesgo de contraerla mediante el contacto social ordinario con una persona infectada.

Criptosporidiosis El criptosporidio es un parsito que se encuentra comnmente en lagos, ros, arroyos y estanques, especialmente cuando el agua ha sido contaminada con aguas residuales y desechos de animales. La infeccin puede contraerse de varias maneras: al beber agua contaminada, o comer alimentos crudos o poco cocinados que hayan sido contaminados con oocistos (una especie de huevo que constituye la etapa infecciosa del parsito) de criptosporidio; por contacto directo con las heces animales o seres humanos infectados; o por transferencia mano-boca de los oocistos presentes en superficies que hayan sido contaminadas con pequeas cantidades de heces de una persona o animal infectados. Los sntomas son diarrea, nusea, retortijones y fiebre baja. Hasta la fecha no se conoce ninguna forma segura y eficaz de tratamiento para esta enfermedad.

 Principales patologas relacionadas con aguas contaminadas microbiolgicamente El inters se centra en los microorganismos patgenos, que son los diferentes tipos de bacterias, virus, protozoos y otros organismos, que transmiten enfermedades Enfermedad agente ORIGEN BACTERIANO Fiebre tifoidea y salmonela typhi, Paratifoideas salmonella Paratyphi A y B Disenteria bacilar shigella

Clera Vidrio cholerae Gastroenteritis agudas Echerichia coli ET Y diarreas Campylobacter Yersinia enterocolitica Salmonella sp Shigella sp

Origen Viral Hepatitis A y B

Virus de la Hepatitis A y E

Poliomielitis
Gastronoenteritis aguda y diarreas

Virus de la polio
Virus Nortwalk, Calicivirus Astrovirus, Calicivirus, Reovirus Enterovirus, Adenovirus,

Origen parasitario Entamoeba histolytica Disenteria amebiana Giardia lambia

Cristosporidium

 En los pases en vas de desarrollo las enfermedades producidas por estos patgenos son uno de los motivos ms importantes de muerte prematura, sobre todo de nios. Normalmente estos microbios llegan al agua en las heces y otros restos orgnicos que producen las personas infectadas.

Al hacer el anlisis de las aguas no buscamos tal o cua microorganismo patgeno, es decir, no aislamos o identificamos los microorganismos patgenos del agua sino que averiguamos si esta tiene o no contaminacin de origen fecal. Criterio sanitario para un agua de consumo humano.

Mtodos de anlisis:1. Bacterias coliformes y Escherichia coli (E. coli): UNE EN ISO 9308-1:2000.2. Enterococos: UNE EN ISO 7899-2:2001. 3. Clostridium perfringens (incluidas las esporas)4. Enumeracin de microorganismos cultivables-Recuento de colonias a 22 C:UNE EN ISO 6222:1999. Otros test complementarios: Salmonelas Estafilococos patgenos Bacterifagos fecales Enterovirus Protozoos Animlculos (gusanos-larvas), Invertebrados bnticos

 Medios de cultivo

Anlisis microbiolgico: Bacterias coliformes Fundamento Los coliformes reagrupan ciertas especies bacterianas pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, de morfologa bacilar, Gramnegativas, aerobias o anaerobias facultativas, oxidas a negativa, no esporuladas y que fermentan la lactosa con produccin de cido a 37Cen 2448 horas. Del grupo coliformes forman parte varios gneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter. Escherichia coliproduce dolor abdominal, diarrea, nauseas, vmitos y fiebre. Klebsiella produce enfermedades respiratorias. Citrobacter produce alteraciones a nivel del colon y a nivel intestinal.

 Mtodo El mtodo consiste en desarrollar solo una prueba presuntiva en el que una reaccin negativa excluye la presencia del grupo coliforme. Procedimiento Inocular caldo de peptona con diluciones decimales de la muestra de agua, expresados en 10-1, 10-2, 10-3. Inocular 3 tubos de lactosa bilis verde brillante (a los que se les aade un tubo de Durham invertido) con 1 ml de cada dilucin. Incubar a 37C(+/-1C) durante 24 48h. Lectura e interpretacin Si se observa crecimiento bacteriano con produccin de gas las 24h o antes, la presencia de bacterias coliformes fecales se considerar confirmada, prosiguiendo con el mtodo del filtro de membrana para conteo.

Mtodo de filtracin de membrana. (UNE EN ISO 9308-1:2000) Fundamento Las bacterias coliformes de origen fecal son aquellas comprendidas en el grupo anterior (coliformes totales), que adems son capaces de fermentar la lactosa, con produccin de cido y de gas a 44C, en un tiempo mximo de 24h. Mtodo El mtodo consiste en la determinacin del n de coliformes mediante filtracin de volmenes determinados del agua a analizar por filtros de membrana e incubacin sobre medio de lactosa enriquecido (agarde lactosa TTC con heptadecil sulfato de sodio) y una temperatura de 44,5C(+/-0,2C). Toma de muestra y almacenamiento. Se utiliza la muestra de agua tomada para el anlisis de coliformes totales que se encontraba guardada en frigorfico a 4C.

 Procedimiento Colocar un filtro de membrana estril sobre el soporte de filtracin. Adaptar el embudo y conectar el matraz a una bomba elctrica de vaco. Filtrar 100 ml de muestra si se trata de agua potable, y 0,1 y 1 ml si se trata de aguas no potables, previamente homogeneizadas. Lavar con unos 30 ml de agua destilada. Retirar el embudo. Mediante las pinzas esterilizadas, transferir la membrana filtrante sobre el medio de cultivo contenido en una placa de Petri, de modo que la superficie de filtracin quede hacia arriba. Cerrar e invertir la placa e incubar a 44C(+/-1C) durante 24h ( +/-2h ). Lectura e interpretacin La lectura de los resultados requiere el examen de las colonias aparecidas sobre la membrana y el examen de los halos en la capa de agar subyacente a la membrana. La fermentacin de la lactosa provoca la formacin de un halo amarillo. Por ello se considera coliformes a quellas colonias que presentan halo amarillo, halo amarillo con centro naranja (Escherichiay Citrobacter), o halo amarillo con centro rojo ladrillo (Klebsiellay Enterobacter). La densidad se estima como el total de coliformes totales por 100ml, utilizando aquellos filtros de membrana que tengan 20-80 colonias de coliformes y no ms de 200.

 Anlisis microbiolgico: Enterococos fecales (Norma UNE-EN ISO 7899-2: 2001) Fundamento Los Enterococos pueden considerarse como indicadores de contaminacin fecal. Sin embargo, algunos Enterococos presentes en las aguas pueden proceder de otros hbitats. Se pueden detectar y cuantificar las especies: Enterococcusfaecalis, E. faecium, E. duransy E. hirae. Adems, pueden determinarse ocasionalmente otras especies de Enterococcusy algunas especies de Streptococcus (en particular S. bovisy S. equinus). Estas especies de Streptococcus no tienen una supervivencia larga en agua y probablemente no puedan determinarse cuantitativamente. Como Enterococos intestinales se consideran aquellos microorganismos capaces de reducir el cloruro de 2,3,5trifeniltetrazolio(TTC) y de hidrolizar la esculina en las condiciones y sobre unos medios especficos Mtodo Se utiliza para la determinacin del nmero de Enterococos intestinales mediante filtracin de un volumen determinado del agua a analizar a travs de filtros de membrana e incubacin de los mismos sobre medios de cultivo a temperaturas adecuadas.

Procedimiento Se filtran 100 mldel agua a analizar previamente homogeneizada. Se coloca el filtro de membrana sobre el medio de Slanetzy Bartleyy se incuban las placas a 37Cdurante 48 h. Lectura e interpretacin Tras la incubacin, se consideran como colonias tpicas de enterococos todas las que muestren un color rojo, marrn o rosado, en el centro o en toda la colonia, consecuencia de la reduccin del TTC (incoloro) a trifenilformazn (rojo) Nota: Si hay colonias tpicas se realizar un ensayo confirmativo. Para ello, con ayuda de unas pinzas estriles, se transfiere el filtro de membrana con las colonias, sin invertirla, sobre una placa con agarbilis-esculinaazida , precalentada a 44C. Se incuba a 44Cdurante 2 h y se lee la placa inmediatamente. En este medio, los enterococoshidrolizan la esculina dando origen a esculetina (6,7-dihidrocumarina) que se combina con los iones Fe3+formando un compuesto de color marrn a negro. Por tanto, se considera que todas las colonias tpicas que muestren un color de marrn a negro, en el medio circundante, dan reaccin positiva y se cuentan como enterococos.

Anlisis microbiolgico: Clostridium perfringens (incluidas esporas) Fundamento Las bacterias incluidas en el gnero Clostridium tienen morfologa bacilar, son Gram positivas, anaerobias estrictas y capaces de formar esporas. La especie C. perfringens estn normalmente presente en heces. Sus esporas son resistentes al calor, a los procesos de desinfeccin y a los tratamientos de depuracin habituales de las aguas (cloracin), por lo que su supervivencia en agua es mayor. La diferenciacin de C. perfringens de otras especies de Clostridium, se basa en su capacidad de fermentar la sacarosa con produccin de cido, en su incapacidad de fermentar la celobios a (debido a la ausencia de -D-glucosidasa) y en la produccin de fosfatasa cida.

 Mtodo Se utiliza de mtodo de filtracin para la determinacin del nmero de C. perfringens mediante filtracin de un volumen determinado del agua a analizar a travs de filtros de membrana e incubacin de los mismos sobre medios de cultivo a temperaturas adecuadas. Procedimientos Siguiendo el mtodo de filtracin, se filtran 100 ml del agua a analizar, previamente homogeneizado. Se coloca el filtro de membrana sobre el medio de m-CP y se incuban las placas a 44Cdurante 24 h en condiciones de anaerobiosis.

 Lectura e interpretacin Tras la incubacin, se consideran como colonias tpicas de C. perfringens todas las que muestren un color amarillo opaco, consecuencia de la acidificacin del medio tras la fermentacin de la sacarosa, y que cambien a color rosa o rojo al cabo de 20 a 30 segundos de exposicin a vapores de hidrxido amnico. En general, el resto de las especies de Clostridium aparecen de color azul-verdoso si, adems de fermentar la sacarosa, son -D-g lucosidas apositivas (hidrolizan el indoxil--D-glucsido) o de color prpura si no fermentan la sacarosa. NOTA: Aunque no est incluido en la Normativa se realizar una tincin de Gramde una de las colonias positivas para observar al microscopio.

Anlisis microbiolgico: Bacterias aerobias UNE EN ISO 6222:1999 Fundamento Las bacterias aerobias son todas las bacterias hetertrofas, aerobias o anaerobias facultativas, mesfilas y psicotrficas capaces de crecer en un medio de agarnutritivo. Este recuento de colonias es til para evaluar el estado de los recursos de agua en su origen y la eficacia del proceso de tratamiento de las aguas destinadas al consumo humano e indica la limpieza y el estado de los sistemas de distribucin. De igual modo, permite detectar cambios anmalos en el nmero de microorganismos en la red de distribucin. As, todo aumento repentino del nmero obtenido puede advertir de la existencia de un foco de contaminacin y requerira su inmediata investigacin.

Mtodo Este mtodo se basa en contar el nde colonias desarrolladas en una placa de medio de cultivo slido, en el que se ha sembrado un volumen conocido de agua muestra, transcurrido un tiempo y una temperatura de incubacin determinados. Procedimiento Preparar 3 tubos con 9 ml de agua peptonada cada uno. Inocular el caldo de peptona con diluciones decimales de la muestra de agua problema expresados en 10-1, 10-2, 10-3. De cada dilucin depositar 1 ml en cada placa de Petri. Verter 30 ml de medio de cultivo de agaren cada placa y dejar solidificar (5-10min), invertir las placas y meterlas en la estufa a 37C (+/-1C), incubar durante 48h. Tambin se emplean placas con medio agarextracto de levadura en las que se siembra un volumen conocido de agua, y la incubacin se lleva a cabo a 22Cdurante 72 horas. Lectura y expresin de resultados Transcurridos 48h (+/-3h) contar todas las colonias desarrolladas en cada placa. El resultado se expresar, como n de bacterias totales en 1 ml. Se estima utilizando aquellos filtros de membrana que tengan 2080 colonias de coliformes y no ms de 200.

GRACIAS