E N Z I M E

Caracteristici generale ale enzimelor

nsuiri caracteristice enzimelor
Complexul ES
Centrul activ al enzimelor
Energia de activare a reaciilor catalizate
enzimatic

2.Legtura:




A.Se formeaz sub influena F-XIIIa.
B.Este o legatur de tip baz Schiff
C.Se formeaz ntre lanurile L i H ale imunoglobulinelor
D.Se formeaz ntre lanurile alfa i beta din hemoglobin
E.Particip la formarea structurii primare a proteinelor
Vitaminele care pot fi transformate n coenzime pentru a
participa la reacii de oxido-reducere sunt:
A.Nicotinamida i riboflavina
B.Vitamina C i biotina
C.Biotina i nicotinamida
D.Tiamina i riboflavina
E.Tiamina i Biotina

Caracteristici generale ale
enzimelor


Ce sunt enzimele ?

catalizatori ai reaciilor chimice din
organismele vii
nsuirile comune cu catalizatorii
acioneaz n concentraii foarte mici;

nu se consuma n cursul reaciei;

nu modific constantele de echilibru ale reaciilor
pe care le catalizeaz;

grbesc numai atingerea strii de echilibru
pentru reaciile termodinamic posibile.
nsuiri caracteristice enzimelor

A.Sunt macromolecule proteice

B. Au eficien catalitic mult mai mare

C.Au specificitate

D. Activitatea lor poate fi reglat

A.Cu excepia ribozimilor (ARN)
enzimele sunt invariabil
proteine

Structur:
a. enzime cu structura strict proteic:
ribonucleaza
chimotripsina
lizozimul din mucusul nazal i lacrimi;


b. enzime cu structura heteroproteic:
parte proteica numit apoenzim

partea neproteic numit cofactor:

coenzim = component neproteic organic,
legat slab necovalent de apoenzim;

grupare prostetic = component organic
legat puternic de apoenzima (ex. hemul)

metal- legat permanent sau temporar



B.Enzimele asigur viteze mari reaciilor

reaciile enzimatice sunt de 10
6
- 10
12
ori mai rapide ca cele
neenzimatice
a.hidratarea CO
2
este catalizat de anhidraza carbonic ,
cea mai activ enzim:

10
5
molecule/ secund
reacia este de 10
7
ori mai rapid dect reacia necatalizat


CO
2
+ H
2
O H
2
CO
3
b.descompunerea H
2
O
2
catalizat de Fe
3+
i de
catalaz:



activitatea catalazei este de 2x10
6
ori mai
mare ca a Fe
3+


2 H
2
O
2
2 H
2
O + O
2
C.Specificitate

1. de reacie

2. de substrat: -absolut
-relativ: -de grup
-mai larg

3. stereospecificitate
1.Specificitate de reacie

Substrat + Reactant Produi

clasificarea enzimelor:
Oxido-reductaze;
Transferaze;
Hidrolaze;
Liaze;
Ligaze.

2.Specificitate de substrat
(selectivitate n alegerea substratului)
a.Specificitate absolut
E utilizeaz ca S un singur compus chimic:
-ureaza catalizeaz hidroliza ureei:


-acetilcolinesteraza catalizeaz hidroliza esterului colinei cu acidul
acetic:




-anhidraza carbonic

H
2
N CO NH
2
+ 2 H
2
O CO
2
+ 2 NH
3
H
3
C COO CH
2
CH
2
N
+
(CH
3
)
3
+
H
2
O H
3
C COOH + H
2
C CH
2
N
+
(CH
3
)
3
HO
b.Specificitate relativ:
de grup

E catalizeaz un tip de reacie pentru o familie de compui







Enzima are afinitate mare pentru alcoolul etilic
R CH
2
OH
Alcool dehidrogenaza
NAD
+
NADH + H
+
R CH O
b.Specificitate relativ
mai larg

Glicozidazele










(H, OH)
O
HO
OH
OH
CH
2
-OH
O
OH
OH
CH
2
-OH
O
O
HO
OH
OH
CH
2
-OH
O
O
O H
H
O H
CH
2
OH
H
H
HOH
2
C
1
1
2
5
(H, OH)
O
HO
OH
OH
CH
2
-OH
O
OH
OH
CH
2
-OH
O
Proteazele










NH CH CO NH
R
2
CH CO
R
3
R
3
= fenilalanin, tirozin
metionin, leucin
Pepsin
NH CH CO NH
R
2
CH CO
R
3
R
2
= lizin, arginin
Tripsin
NH CH CO NH
R
2
CH CO
R
3
R
2
= Phe, Tyr, Trp
Chimotripsin
Carboxil esterazele
C
O
O R
1
R

Curs 10

Complexul ES
Centrul activ al enzimelor
Cinetica enzimatic
Factori care influeneaz activitatea enzimatic
Ecuaia lui Michaelis Menten
Enzimele se deosebesc de catalizatorii
anorganici prin:
A.Nu modific echilibrele chimice la care conduc
reaciile reversibile

B.Prezint specificitate de reacie

C.Majoritatea sunt proteine

D.Intervin numai n reacii chimice posibile din punct
de vedere termodinamic

E.Aciunea lor este susceptibil de reglare


3.Specificitate stereochimic
Enzimele disting
-un enantiomer levogir de cel dextrogir;
-un izomer cis de cel trans.
Lactat dehidrogenaza
NAD
+
NADH + H
+
COOH
C
CH
3
H HO
Acid L-lactic
COOH
C
CH
3
O
Acid piruvic
O N
N
N
N
NH
2
O
H
2
C
OR OH
O P O
-
O
O P O
-
O
N
+
O
H
2
C
OH OH
CONH
2
N
COOH
Acidul nicotinic Amida acidului nicotinic
(niacina) (niacinamida)
N
CONH
2
Nicotinamid-adenin dinucleotid (NAD
+
)
(R = H formeaz NAD
+
; R = -PO
3
H
2
formeaz NADP
+
)
Vitamina PP
succinatdehidrogenaza






acidul maleic (izomerul cis) nu se obine nici n urme:
FAD FADH
2
CH
2
CH
2
COOH
COOH
Acid succinic
COOH
C
C
HOOC
H
H
Acid fumaric
CH
2
COOH
Vitamina B2
Conine heterociclul numit izoaloxazin
N N
N
NH
CH
2
O
O
C H
3
C H
3
CH CH CH
OH OH OH
O CH
2
P O
O
-
O
P O
O
-
O
N
N
N
N
NH
2
O
H
2
C
OH OH
lumicrom
lumiflavin
riboflavin
flavin adenin mononucleotid (FMN)
adenozin
adenozin 5`-monofosfat
(AMP)
flavin adenin dinucleotid (FAD)
(H)
(H)
(H)
(H)
(OH)



6.Activitatea catalitic a enzimelor poate fi
modulat de anumii ageni reglatori.
Complexul ES
reprezentare reacii enzimatice :
E + S ES E + Produsi
Centrul activ al enzimelor

Enzimele sunt macromolecule

care prezint

Centrul activ = entitate tridimensional
unde se leag substratul




Centrul activ al enzimelor =
o regiune restrns din protein
cu structura chimic i geometric bine
determinate

Cine confer structura Centrului Activ ?
natura resturilor aminoacidice i
organizarea secundar, teriar i
cuaternar a proteinei.

Centrului activ al chimotripsinei




His - 57 din lanul B;

Ser - 195 din lanul C;

Asp - 102 din lanul B.
A
B
C
S S
S S
o-chimotripsina contine 5 legturi disulfurice
S S
S S
S S
Structura tridimensional a ochimotripsinei
Triada Asp-His-Ser
Centrul activ conine resturi aa ce creaz o
entitate tridimensional complementar cu
substratul.









Inhibitorii interfer cu proteazele
utilizate de HIV pentru
transformarea proteinelor
precursor (gag, pol, env) n
proteine precursoare.

Inhibitorul proteazelor blocheaz
centrul activ al enzimelor






Fatty Acid Desaturases - Integral
Membrane Metalloenzymes
ScienceDaily (Oct. 16, 2006) Univ Chicago

S-a identificat structura tridimensional a
enzimei de degradare a insulinei, care
degradeaz i amiloidul | implicat n boala
Alzheimer.
Enzima este o int promitoare

Formarea plcii amiloid
Centrul activ al enzimelor
centru de legare prezint resturi aminoacidice care
asigur legarea substratului

centru catalitic prezint resturi aa responsabile de
catalizarea propriu-zis

Resturile de aa din situsurile catalitice ale enzimelor
sunt: Cys, Ser, His, Tyr, acid Glu i Asp, Lys cu
gruprile funcionale:



OH, SH, NH
3
+
, COO
-
HN
+
NH
imidazol
Triada Asp-His-Ser
Complexul enzim substrat
(ES)
structuri labile, cu o via foarte scurt
ntre E i S se stabilesc:
- fore necovalente (puni de hidrogen,
interaciuni hidrofobe, interaciuni electrostatice)
sau
-covalente reversibile

Complementaritatea chimic i geometric
determin legarea E-S
Modelul clasic (lact cheie)
al CA al enzimei n raport cu structura substratului,
propus de Emil-Fischer








Este un model rigid.

Modelul lact cheie
Substrat
Enzim Complexul ES
Modelul dinamic centrul indussau
complementaritate indus,
produs de Koshland, este acela de mna n mnu
Modelul indus presupune o flexibilitate a
zonei n care se afl centrul activ
Modelul centrului indus
Substrat
Enzim
Complexul ES

Cum acioneaz enzimele ?
Mecanismul de aciune privit din 2 perspective:
modificarea energiei n timpul reaciei;
rolul centrului activ n realizarea catalizei din punct
de vedere chimic
Ce este energia liber de
activare ?
Toate reaciile chimice sunt nsoite de variaii ale
energiei
In organismele vii temperatura i presiunea ==
constante
Energia liber de reacie AG caracterizeaz reaciile din
lumea vie

Reaciile posibile termodinamic decurg cu scderea
energiei libere a reactanilor
AGprodui AGreactani <0

reacie exergonic, AG<0
reacie endergonic, AG>0



Cum se modific energia n timpul reaciei ?
Virtual, toate reaciile chimice au o barier energetic ce separ
rectanii de produi

Aceast barier numit energie liber de activare este
diferena dintre energia reactanilor i energia intermediarului
care se produce n timpul formrii produsului.





B T A
-
Durata reactiei
Stare de tranzitie
E
n
e
r
g
i
a

l
i
b
e
r

(reactie necatalizat)
Stare de tranzitie
(reactie catalizat)
Stare initial
Energia liber de activare
a reactiei (necatalizate)
Energia liber de activare
a reactiei (catalizate)
Stare final
Energia total
eliberat
Produsi C + D
Reactanti A + B
Enzima nu modific energia liber a reaciei
catalizate (AG
0
), a reactanilor sau produilor, i deci
nu modific echilibrul reciei (constanta de echilibru)

Enzima furnizeaz o cale de reacie alternativ, prin
micorarea energiei libere de activare (ca urmare
a micorrii entropiei substratului)
Formarea strii de tranzitie
Mecanisme chimice folosite de centrul
activ pentru a transforma

Substrat Produi
Centrul activ al E stabilizeaz starea T
*
a
substratului
Cataliza covalent

Enzime care formeaz intermediari covaleni enzim-substrat:

Clasa serinei
Tripsina, Chimotripsina, Elastaza, Acetilcolinesteraza

Clasa cisteinei
Gliceraldehid 3P-dehidrogenaza, Papaina

Clasa histidinei
Glucozo 6-fosfataza, Succinil~CoA sintetaza

Clasa lizinei
D-aminoacid oxidaza, Transaldolaza
Triada Asp-His-Ser
Cataliza acido-bazic
Enzimele conin grupri funcionale care pot
aciona ca donori sau ca acceptori de protoni:
amino, carboxil, sulfhidril, imidazol, hidroxilul
fenolic.


hidroliza esterilor carboxilici i fosforici, reacii de
izomerizare
Glucozo-6-fosfat izomeraza
Exist un factor de tensiune n cataliza
enzimatic ?


legarea S la E poate deforma att enzima ct i
substratul

centrul activ al unor enzime este relativ nepolar

Care dintre urmtoarele afirmaii referitoare la
enzime sunt adevrate:
A.Scad AG
0
(energia liber) a reaciei catalizate
B.Scad energia de activare a procesului catalizat
C.Deplaseaz echilibrul reaciei catalizate n sensul formrii
produilor
D.Catalizeaz ruperea i/sau formarea unor legturi
covalente
E.Cresc viteza de apariie a produilor de reacie
Enzimele:
A.Sunt polizaharide naturale
B.Au structur asemntoare vitaminelor
C.Pot cuprinde n structura lor toi aminoacizii naturali
D.Pot fi reprezentate de anumite molecule de acizi nucleici
E.Pot fi localizate n membranele celulare deoarece au
structur lipidic



Cinetica enzimatic

Factori care influeneaz activitatea
enzimatic
Teoria cinetic Michaelis-Menten
Ecuaia Lineweaver Burk
Inhibiia activitii enzimelor

Cinetica enzimatic

Cinetica studiaz reaciile chimice:
desfurarea n timp a reaciei;
factori care influeneaz viteza reaciilor;
etapele intermediare prin care trec
reactanii pn devin produi.
Viteza unei reacii = variaia n timp a
concentraiei reactanilor sau a
produilor de reacie.

A B



ecuaii cinetice


dt
] A [ d
v =
dt
] B [ d
v + =
Viteza de reacie este proporional cu
produsul concentraiilor reactanilor

Pentru o reacie:
A Produi V = K [A]

Pentru o reacie:
A + B Produi V = K [A][B]

K = constanta de vitez sau viteza specific
(V de reacie la concentraii 1M ale reactanilor)

Activitatea enzimatic
U.I. (unitatea internaional) = activitatea enzimei care
transform 1 mol substrat/minut n cond standard de pH,
temperatur, cofactori

Activitatea molecular = nr. molecule de S transformate n
produs de ctre o molecul de E /secund.

Activitatea specific = nr. de uniti de activitate enzimatic /
mg de protein total.

Constanta catalitic (turn-over number) = nr. de transformri
S P catalizate de fiecare CA al E n unitatea de timp.
Factorii care influeneaz
activitatea enzimatic
Temperatura;
pH;
[E];
[S];
prezena inhibitorilor



Temperatura
T optim = temp. la care activitatea enzimelor
este maxim










50
100
20 40 60
temperatura
activitatea
enzimatic
%
T
optim
pH
pH-uri extreme denatureaz enzimele
Variaii mici de pH n zona de stabilitate a enzimei
modific v.
V
i
t
e
z
a

d
e

r
e
a
c
t
i
e

(
v
)
Pepsina
Fosfataza
alcalin
amilaza salivara
[E]
[S] = constant, v este proporional cu
cantitatea de enzim
activitatea
enzimatic
%
concentratia enzimei
Ecuaia Michaelis Menten


V = f([s]) la [E], temp., pH = constante







Michaelis i Menten au introdus parametrii cinetici KM i Vmax
activitatea
enzimatic
concentratia substratului
v
max
v
max
2
K
M
saturatie
E + S
K
1
K
2
ES E + Produs
K
3

Unde E, ES i S sunt n echilibru
[E
total
]=[ES]

V
max
=K
3
[E
total
]

La echilibru
v1 = v2 + v3
K1[E][S] = K2[ES] + K3[ES]
K1[E][S] = [ES](K2 + K3)
E + S
K
1
K
2
ES E + Produs
K
3
Etapa rapid Etapa lent
KM
KM este o msur a afinitii dintre E i S
(afinitile enzimelor pentru substraturile lor sunt
cu att mai mari cu ct valorile KM sunt mai mici).


M
1
3 2
K
K
K K
] ES [
] S ][ E [
=
+
=
Ecuaia Michaelis - Menten
Ecuaia de vitez a reaciilor enzimatice cu un singur
substrat sau ecuaia lui Michaelis-Menten
reprezentare grafic vo = f([S]) este un arc de hiperbol.






KM este numeric egal cu [S] la care viteza reaciei este
semimaxim
] [
] .[
max
S K
S V
v
M
+
=
] S [
] S [ K
] S [ V
2
V
M
max max
=
+

=
M
K
2
max
V
v =

Ecuaia Lineweaver Burk
Ecuaia Michaelis-Menteninversat este ecuaia unei drepte.
max max
V
1

] [
1 1
+ =
S V
K
V
M
] [
] .[
max
S K
S V
v
M
+
=
- 1/K
M
0 1/[S]
1/V
1/V
max
Panta = K
M
/V
max
Inhibiia activitii enzimelor
Inhibiia activitii enzimelor
scderea activitii catalitice a enzimei n prezena
unui compus chimic denumit inhibitor

Inhibitorii pot fi:
endogeni (metabolii)
exogeni (substane toxice,medicamente)

Inhibiia poate fi:
- ireversibil
- reversibil
Inhibiia ireversibil
legturi covalente ntre E i I

Cnd [I] = [E], activitatea catalitic a enzimei este redus
la zero.

diizopropil-fluorofosfatului (DIFP), un compus utilizat ca
paralizant (acetilcolinesteraza este foarte sensibil la
aciunea DIFP)

E + I EI
NH CH CO
CH
2
OH
+
P
F
O
O O HC
CH
3
CH
3
CH
CH
3
CH
3
DIFP
- HF
NH CH CO
CH
2
O
P
O
O O HC
CH
3
CH
3
CH
CH
3
CH
3


Hemoproteinele (citocromi, hemoglobina) sunt
inactivate de ctre: CO, CN care se leag de ionul de
Fe
2+
din hem


Curs 11

Inhibiia activitii enzimelor
Enzime alosterice
Reglarea activitii enzimelor
Inhibiia reversibil


Ce efecte are Ic asupra celor doi
parametrii cinetici vmax i KM ?

Inhibiia reversibil poate fi:
Competitive
Necompetitiv
Uncompetitiv

E + I EI
Inhibiia reversibil competitiv
Ic este analog structural al S
se leag n centrul activ al enzimei prin aceleai grupri ca S;

ntr-un sistem cu: E, S i Ic au loc reaciile:
E + S ES E + Produsi
+
I
EI
1/V
1/V
max
activitatea
enzimatic
concentratia substratului
v
max
v
max
2
K
M
saturatie
- 1/K
M
`
K
M
`
+ Ic
+ Ic
- 1/K
M
1/[S] 0
reacia enzimatic atinge vmax dar la concentraii mari
de S.
aparent creste KM, deci afinitatea enzimei pentru S
scade i nu se modifica vmax;
Ic (compui naturali sau de
sintez)
Acizii dicarboxilici: oxalic, malonic,
malic, oxaloacetic, pirofosfat sunt inhibitori
competitivi ai succinat dehidrogenazei
(SD).
FAD FADH
2
CH
2
CH
2
COOH
COOH
Acid succinic
COOH
C
C
HOOC
H
H
Acid fumaric
CH
2
COOH
Sulfanilamida
Folat sintetaza, la bacterii este pclit i sintetizeaz un
intermediar cu sulfanilamid n locul acidului para-amino-
benzoic care nu se poate transforma n acid folic.
Cum acidul folic este indispensabil bacteriilor, acestea
mor.
NH
2
SO
2
NH
2
NH
2
COOH
Sulfanilamida
Acid p-aminobenzoic
N
N N
N
H
2
N
OH
CH
2
NH CO NH
COOH
CH
2
CH
2
CH
COOH
9 10
5
pterina
acid p-aminobenzoic
acid glutamic
acid pteroic
Analogi structurali ai bazelor
purinice i pirimidinice


se utilizeaz n chimioterapia cancerului.

inhib sinteza de acizi nucleici,
mpiedicnd diviziunea celular care este
mult mai rapid n tumori
Metotrexat


analog al acidului folic se folosete n
chimioterapia leucemiilor.
N CH
2
N
N
N
N C
H
2
N
NH
2
H
R
N CH CH
2
C
O
-
O
H
COO
-
O
R=H aminopterin
R= -CH
3
metotrexat
Inhibiia reversibil
necompetitiv
Substratul i inhibitorul necompetitiv (In) nu sunt
analogi structurali, nu au dimensiuni
comparabile.





Se modifica Vmax
KM nu se modific n prezena inhibitorului.
E + S ES E + Produsi
+
I
EI + S ESI
+
I
1/v
1/v
max
activitatea
enzimatic
concentratia substratului
v
max
K
M
+ Ic
+ Ic
- 1/K
M
1/[S]
0
v
max
/ 2
v
`
max
/ 2
v`
max
1/v`
max



grupri - SH libere (nu din centrul activ), pot
lega slab Ag
+
, Hg
2+
, Pb care micoreaz sau
chiar anuleaz activitatea enzimelor (aa se
explic efectul otrvitor al unor metale grele).
Pb inhib ferochelataza
Inhibiia reversibil
uncompetitiv
Un astfel de inhibitor modific i K
M
i
Vmax
E + S ES E + Produsi
+
I
ESI
Enzime alosterice

Sunt proteine oligomere (dimeri, tetrameri, etc.)

Au mai multe centre de legare pentru S (cte
un centru pentru fiecare subunitate.

Curbele v = f([S]) sunt sigmoide

Vmax se atinge atunci cnd toate centrele active
sunt ocupate cu S;
Parametrii cinetici pentru enzimele oligomere
sunt:
-Vmax i
-S0,5(S50), concentraia substratului pentru
care reacia are o vitez semimaxim.

Aspectul sigmoid al curbei v = f([S])
reflect o modificare a afinitii enzimei
pentru substrat.
activitatea
enzimatic
concentratia substratului
v
max
K
M
v
max
/ 2
Enzimele care dau curbe v=f([s])
sigmoide sunt denumite
alosterice


Liganzii fixai pot fi:
identici (de ex. Substraturi n ambele centre)
sau
diferii


centru izosteric leag substratul


centru alosteric (allos=altul)
(poate fi situat pe acelai lan polipeptidic dar n regiune
diferit)

leag un efector alosteric
Activatori alosterici
Inhibitori alosterici
activitatea
enzimatic
v
max
K
M
50
%
100
1
2
3
[S]

Dup natura centrelor alosterice i a liganzilor
pentru aceste centre, efectele alosterice sunt:

Efecte homotrope (presupun cooperarea
ntre dou centre izosterice

Efecte heterotrope (cooperare ntre un centru
izosteric i un centru alosteric)
Alosteria
Reglarea cantitativ a enzimelor
Reglarea eficienei catalitice
Complexe multienzimatice
Antienzime
Izoenzime
Denumirea enzimelor
Clasificarea enzimelor

Alosteria

capacitatea unor liganzi de a modifica funciile
unor proteine
prin
inducerea unor tranziii alosterice (modificri
conformaionale).

Caracteristici eseniale pentru Enzimele
alosterice:

-catalizeaz etape cheie din cile metabolice;

ireversibile, cu AGo < 0

-au structur cuaternar

Dou Modele
explic
mecanismul de aciune
al E Alosterice
1.modelul concertat (simetric)
2.modelul secvenial

Elemente comune ale modelelor
Fiecare monomer al oligomerului are centrul
su activ
Monomerii coopereaz n fixarea substratului :
homotrop
heterotrop

Reglarea alosteric se face cu consum
minim de energie
Modelul simetric
Subunitile dimerului, pot avea dou
conformaii;
-R (relaxat) cu afinitate mare pentru
substrat
-T (tensionat) cu afinitate mic pentru
substrat.
Modelul impune simetria dimerului,
care exist numai n forma R sau T.
La enzimele heterotrope:

Activatorii stabilizeaz starea R

Efectorii negativi stabilizeaz starea T
Modelul secvenial



admite interacia strii R cu starea T

Legarea lui S la primul monomer se face
cu dificultate
Ce tip de cooperare am ntlnit la
realizarea rolurilor Hemoglobinei ????
Hemoglobina fixeaz

O2 prin cooperativitate (homotrop)

coordonat de factorii: H+; CO2; 2,3-
DPG (heterotrop)

Reglarea activitii enzimelor

Viteza reaciilor enzimatice cheie din cile
metabolice depinde de:

cantitatea de enzim;


eficiena enzimelor

Reglarea cantitii de enzim
prin dinamica proceselor de biosintez
i de degradare



Aminoacizi Proteine
K
s
K
d

Enzimele constitutive: Ks = Kd

Catalizeaz procese fundamentale pentru
existena celulei.
Se gsesc n celule n cantiti relativ
constante.
Ele nu sufer fluctuaii mari n raport cu
factorii de mediu.

Enzimele inductibile: Ks > Kd

Sunt implicate n ci catabolice.

se sintetizat numai n prezena substratului

Substratul acioneaz ca un inductor,
accelernd sinteza enzimelor.
Enzimele represibile: Ks < Kd

Sunt implicate n procese anabolice

Sinteza lor este ncetinit de produsul final al
reaciei catalizate;

Represia se face de obicei, prin intermediul
complexelor corepresori - aporepresori.


Controlul degradrii proteinelor (enzimelor)

-se face independent de controlul sintezei;

-se face prin intermediul ubiquitinei;

-este proces dependent de ATP.

Reglarea eficienei catalitice a enzimelor

Factorii ?????

Activitatea unor Enzime alosterice depinde de concentraia
substratului:





Reglarea printr-un intermediar:





A B C P
E
1
E
2
E
3
A B C D Produsi
E
1
E
2
E
3
activitatea
enzimatic
concentratia substratului
v
max
K
M
v
max
/ 2

Hexokinaza:
-prezent n toate esuturile extrahepatice,
-are afinitate mare pentru glucoza (KM = 0,15 mM)
-esuturile preiau glucoza din snge la orice valoare
a glicemiei

Glucokinaza:
-prezent numai n ficat
-are afinitate mic pentru glucoza (KM = 10 mM)
- este activ dup ingestia de glucide

Glucoz + ATP Glucozo-6-P + ADP
Reglarea activitii enzimelor alosterice prin produsul final
(inhibiie de tip feed back)
A B C D Produsi
E
1
E
2
E
3
A B C
E
1
E
2

D P
1
E P
2
E
3
E
4
Reglarea covalent
Apare la organismele superioare

i presupune activare prin

ruperea unor legturi covalente


enzime interconvertibile

Conversia are loc prin:

fosforilare-defosforilare;

nucleotidilare

activare prin proteoliz

proces unidirecional
Enzime interconvertibile prin fosforilare
<==> defosforilare

Fosforilrile:
-sunt catalizate de kinaze
(reglate hormonal, interconvertibile fosfo-defosfo);
-sunt ireversibile;
-necesit ATP

Defosforilrile:
-sunt ireversibile;
-se fac hidrolitic n prezena unor fosfataze;
-fosfatazele sunt supuse unui control hormonal.

Enzim (Ser-OH) Enzim (Ser-OP)
forma defosfo forma fosfo
ATP ADP
P
i
H
2
O
proteinkinaze
fosfataze
enzime active n forma fosforilat
glicogen fosforilaza implicat n catabolismul
glicogenului

Enzime active n forma defosfo
glicogen sintaza implicat n proces anabolic

activarea este implicat ntr-o cascad de evenimente
declanate de legarea unui hormon la o membran celular

Reglarea covalent prin
proteoliz
Proenzimele (zimogenii)

sunt produse la locul de sintez n form
inactiv

activarea se face la locul de aciune.

Activarea se face

sub influena factorilor de mediu i

Autocatalitic
printr-un proces ireversibil de rupere a unor legturi
peptidice specifice.

De ce este necesar existena
zimogenilor ?

se obin foarte rapid
prin transformri minore
cantiti mari de enzime active.

Enzimele proteolitice digestive

secretate de stomac: pepsinogenul

secretate de pancreas: tripsinogenul,
chimotripsinogenul, proelastaza,
procarboxipeptidaza

Enzimele coagulrii sngelui
(secretate de ficat n form de proenzime)

Enzimele sistemului complement


a.Enzimele proteolitice digestive
hidrolizeaz proteine:

Transformarea
HCl
pepsinogen pepsina
(- segment terminal (44 aminoacizi) cu
caracter bazic)


Transformarea
Tripsinogen tripsin
enteropeptidaz
(denumire veche enterokinaz)

(fragment N-terminal de 6 aminoacizi din tripsinogen)

Tripsina activeaz tripsinogenul, chimotripsinogenul,
proelastaza, i procarboxipeptidaza.

Zimogenii pancreatici se activeaz cnd coninutul
stomacal a ajuns n duoden.

Transformarea
chimotripsinogen chimotripsin

este activat de tripsin
se face prin ndeprtarea a dou dipeptide

Chimotripsina cuprinde trei lanuri peptidice i
cinci puni de sulf.

Centrului activ al chimotripsinei




His - 57 din lanul B;

Ser - 195 din lanul C;

Asp - 102 din lanul B.
A
B
C
S S
S S
o-chimotripsina contine 5 legturi disulfurice
S S
S S
S S
Structura tridimensional a ochimotripsinei
Enteropeptidaz
Tripsinogen
Tripsin
Chimotripsinogen
Chimotripsin
Procarboxipeptidaza A
Carboxipeptidaza A
Carboxipeptidaza B
Procarboxipeptidaza B
In intestin
Enzimele coagulrii i fibrinolizei.

Exist dou ci iniiate de activatori diferii
care converg ntr-o cale final comun

calea intrinsec, cu participare de factori
sanguini;

calea extrinsec, la care particip i factori
de origine exclusiv tisular.

Iniierea procesului de coagulare este urmat de
activarea n cascad a factorilor de coagulare

Care sunt avantajele unui rspuns reglator n
cascad ?

-o cantitate foarte mic de iniiator declanaz un
rspuns amplu.
-fiecare etap a cascadei amplific rspunsul

Fibrinoliza. Componenii necesari
dezagregrii chiagului se gsesc n snge
n form inactiv i se activeaz proteolitic



Plasminogen Plasmin
Cheag de fibrin Peptide solubile
Factor tisular
Antienzimele
Antienzime (antiproteaze) = proteine
reglatoare

Serpinele sunt inhibitori de serin proteaze
Se leag necovalent n centrul activ al serin
proteazelor:


antitrombina III

o
1
antiproteaza

(denumit i o1 antitripsina)
inhibitorul pancreatic al tripsinei

inhibitorul proteinei C (proteina C este o
serin proteaz plasmatic dependent de
vitamina K, activat de trombin, care
transform factorii activi VIIIa i Va ai
coagulrii n forme inactive).




Antitrombina III:
-prezent n plasm;

-inactiveaz trombina i ali factori ai coagulrii: IXa,
Xa, XIa

-Heparina mrete viteza de formare a complexelor
ireversibile ntre antitrombina III i serin proteazele
coagulrii.


o1-antiproteaza:
-protein plasmatic;
-este o1-globulin

inhib elastaza, tripsina i alte proteaze


o1-antiproteaza sintetizat
de ficat
de monocitele i macrofagele alveolare
are rol n protejarea esuturilor de aciunea elastazei

Elastaza = enzim proteolitic distructiv, secretat de
neutrofilele activate poate distruge elastina din pereii
alveolelor pulmonare

O deficien la nivelul o1-antiproteazei poate
duce la instalarea emfizemului pulmonar


Inhibitorul pancreatic al tripsinei:
-este o protein cu masa mic, produs de
pancreas.

-se leag de tripsin, prevenind distrugerea
pancreasului.


Izoenzimele
Izoenzimele:
- proteine oligomere
-catalizeaz aceeai reacie n toate
esuturile;
-difer prin:
structur
distribuie tisular.
Diferenele structurale pot influenta
proprietile fizico-chimice:

pH izoelectric

mobilitate electroforetic

masa molecular

difereniere prin nsuirile catalitice:

afiniti diferite fa de acelai substrat;
sensibiliti diferite la aciunea unor efectrori
alosterici;

_
specificiti distincte pentru coenzime



Izoenzimele LDH (lactat dehidrogenaza)

enzim intracelular

LDH are structur cuaternar omogen sau
heterogen;
lanuri M (muscle)
LDH = tetramer
lanuri H (heart).


LDH are cinci izoenzime:
H
4
, H
3M
, H
2
M
2
, HM
3
, M
4


sau

dup mobilitatea electroforetic
LDH
1
LDH
5


Reacia catalizat:
Lactat dehidrogenaza
NAD
+
NADH + H
+
Acid L-lactic
COOH C H
3
C
O
Acid piruvic
COOH CH H
3
C
OH
Izoenzimele LDH au afiniti diferite pentru
piruvat (sau lactat):
H4 i H3M
inim
afinitate mic pentru piruvat
(l transform greu n lactat)

M4 i M3H
muchi scheletici i ficat
afinitate mare pentru piruvat



Determinarea activitii enzimelor serice
poate fi folosit n clinic pentru stabilirea
originii esutului lezat

Izoenzimele creatin kinazei
(creatin fosfokinaza)

Creatin kinaza:
-enzim intracelular;
-dimer format din dou subuniti:
B (de la brain)
M (de la muscle)

Are trei izoenzime:
MM (prezent n muchi i miocard)
BB (prezent n creier i muchi)
MB (prezent n urme numai n miocard).


reacia catalizat este reversibil:

Creatin + ATP Fosfo-creatin + ADP

Creterea activitii creatin kinazei-MB n ser,
indic lezarea miocardului (infarct de miocard).

Infarct
Ore
Activitatea CK2
n plasm la 24
ore dup infarct
Activitatea LDH
n plasm la 36 -
40 ore de la
infarct
Complexe multienzimatice
Asamblri de proteine ntr-un complex, cu
scopul de a crete eficiena global a
procesului.
Rolul lor:
cataliza coordonat a unei succesiuni de
reacii;
minimalizarea unor reacii secundare.

Exempl: acid gras sintetaz, complexul
piruvat dehidrogenazei, etc.
Clasificarea i denumirea
enzimelor
Denumirea enzimelor
se pot utilza trei modaliti:
-adugarea sufixului az la numele
substratului (zaharaz, ureaz, glucozidaz)

-denumire dup aciunea specific a enzimei
(guanilat ciclaz, lactat dehidrogenaz, glutation
reductaz)

-denumiri particulare fr legtur cu reacia
catalizat: pepsin, chimotripsin, tripsin.

Numele enzimei cuprinde:
-denumirea substratului,
-tipul reaciei catalizate,
-coenzima

Fiecare enzim este codificat de patru cifre, care
definesc:
-clasa;
-subclasa;
-sub-subclasa;
-numrul de ordine al enzimei din ir.

Clasificarea enzimelor

Sunt 6 clase de enzime dup tipul de reacie
catalizat:
1.Oxidoreductaze
2.Transferaze
3.Hidrolaze
4.Liaze
5.Izomeraze
6.Ligaze
Oxidoreductazele catalizeaz reacii redox
(transfer de electroni sau de hidrogen)

Subclase:
Dehidrogenazele catalizeaz transferul de
hidrogen de la substrat (SH2) pe o coenzim
redox (NAD
+
; NADP
+
; FMN; FAD):

SH
2
+ Co S
ox
+ CoH
2
O N
N
N
N
NH
2
O
H
2
C
OR OH
O P O
-
O
O P O
-
O
N
+
O
H
2
C
OH OH
CONH
2
N
COOH
Acidul nicotinic Amida acidului nicotinic
(niacina) (niacinamida)
N
CONH
2
Nicotinamid-adenin dinucleotid (NAD
+
)
(R = H formeaz NAD
+
; R = -PO
3
H
2
formeaz NADP
+
)
Vitamina PP
Vitamina B2
Conine heterociclul numit izoaloxazin
N N
N
NH
CH
2
O
O
C H
3
C H
3
CH CH CH
OH OH OH
O CH
2
P O
O
-
O
P O
O
-
O
N
N
N
N
NH
2
O
H
2
C
OH OH
lumicrom
lumiflavin
riboflavin
flavin adenin mononucleotid (FMN)
adenozin
adenozin 5`-monofosfat
(AMP)
flavin adenin dinucleotid (FAD)
(H)
(H)
(H)
(H)
(OH)

Reductazele catalizeaz transferul de hidrogen de
la o coenzima redus (adesea NADPH) la un
acceptor:



S
ox
+ CoH
2
SH
2
+ Co

Oxidazele catalizeaz transferul de echivaleni
reductori de la un substrat la dioxigen, reducndu-l
fie la ap, fie la peroxid de hidrogen:



SH
2
+ 1/2 O
2
S
ox
+ H
2
O
SH
2
+ O
2
S
ox
+ H
2
O
2


Peroxidazele catalizeaz transferul de echivaleni
reductori de la un substrat la un peroxid (HOOH
sau R-OOH)

SH
2
+ HOOH S
ox
+ 2 H
2
O



Dioxigenazele ncorporeaz dioxigenul n molecula
de substrat (care cuprinde o legtur dubl):


CH CH + O
2
O CH
CH O +

Monooxigenazele ncorporeaz numai un atom de
oxigen n substrat, celalalt atom al dioxigenului este
redus la ap.

Multe monooxigenaze sunt hidroxilaze care implic
participarea sistemului redox:
NADP
+
- (NADPH+ H
+
)


R-H + O
2
+ (NADPH + H
+
) R-OH + H
2
O + NADP
+
Transferazele
catalizeaz reacii de transfer a unei grupri de la un donor ctre un
acceptor


Subclase:
Aminotransferaze (transaminaze) catalizeaz transferul
unei grupri amino ntre un amino i un cetoacid.
Coenzima participant este piridoxal fosfatul.



AX + BY AY + BX
COOH CH R
1
NH
2
COOH C R
2
O
COOH C R
1
O
COOH CH R
2
NH
2
+
+


Aciltransferazele catalizeaz transferul restului acil
de pe compui cu potenial chimic ridicat
(R-CO~SCoA), pe acceptori potrivii cu formare de
esteri, amide, anhidride:

R-CO~S-CoA + R
1
-OH R-CO-OR
1
+ CoA-SH
Acid pantotenic
O CH
2
C CH C NH
CH
3
CH
3
OH
O
CH
2
CH
2
CO
O
N
O
H
2
C
O OH
O P O
-
O
O P O
-
N
N
N
NH
2
NH
SH
CH
2
CH
2
O
-
O
-
O
P
T
i
o
e
t
a
n
o
l
a
m
i
n
a
A
D
P
Coenzima A - SH
Fosforil transferazele (kinaze) catalizeaz
transferul resturilor fosforil de pe ATP pe
substraturi:




Metiltransferazele catalizeaz transferul
gruprilor metil, coenzima care poart aceast
grupare fiind tetrahidrofolatul (FH4).

Glucoz + ATP Glucozo-6-P + ADP
N
N N
N
H
2
N
OH
CH
2
NH CO NH
COOH
CH
2
CH
2
CH
COOH
9 10
5
pterina
acid p-aminobenzoic
acid glutamic
acid pteroic
Hidrolazele

Subclase
Esterazele care pot fi:
carboxilesteraze (cu substrat R-COOR)
tiolesteraze (cu substrat R-CO -SR)
fosfomonoesteraze (substrat R-O-PO3H2)
fosfodiesteraze sau fosfataze (substrat R-O-PO2H-O-R1)
Glicozidaze
Peptidaze
A-B + H
2
O A-H + B-OH
Liazele
catalizeaz reacii de adiie reversibile,
la legturi multiple.
Anhidraza carbonic catalizeaz
hidratarea dioxidului de carbon:


CO
2
+ H
2
O H
2
CO
3
Fumaraza catalizeaz hidratarea acidului
fumaric la acid malic:

+ H
2
O
HC
CH
2
COOH
COOH
OH
Acid malic
COOH
C
C
HOOC
H
H
Acid fumaric
Fumaraza


Sintazele catalizeaz legarea a dou molecule fr

implicarea ATP

oaminolevulinat sintaza
glicogen sintaza
NOS - nitric oxid sintaza
Izomerazele
catalizeaz reacii de izomerizare:

Racemazele transform un enantiomer
dextrogir n enantiomerul levogir
L-Alanina D-Alanina
Epimerazele schimb configuraia unui singur
atom de carbon asimetric



Izomerazele cis-trans modific configuraia
unei duble legturi

D-Glucoz D-Galactoz
Acid fumaric Acid maleic
Mutazele schimb poziia unei grupri n
molecul



HC
H
2
C
OPO
3
H
2
COOH
OH
HC
H
2
C OH
COOH
OPO
3
H
2
Acid 3-fosfogliceric Acid 2-fosfogliceric
mutaz
Ligazele
catalizeaz reacii de condensare cuplate cu scindare de
ATP



Sinteza glutaminei catalizat de glutaminsintetaz:


A-H + B-OH A-B
ATP
ADP + P
i
Acid glutamic + NH
3
Glutamin
ATP
ADP