INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA

M. Paz UMG-2013

Qu es la microbiologa?
Estudio de los organismos microscpicos 3 palabras griegas: mikros (pequeo), bios (vida) y logos (ciencia)

estudio de la vida microscpica

Surgi como ciencia tras el descubrimiento y perfeccionamiento del microscopio.

Qu son los microorganismos?

Organismos que no pueden ser observados a simple vista, al menos en parte de su ciclo. Organismos que viven como clulas aisladas o entidades que contienen cidos nucleicos capaces de replicarse, por lo menos en parte de su ciclo.

Incluidos: algas, hongos, protozoarios y bacterias

Ramas de la Microbiologa

Cmo afectan nuestra vida?

Diversos tipos de microorganismos son causantes de enfermedades y abundan casi en cualquier lugar por lo que permanentemente estamos expuestos a un contagio. Pueden afectarnos en el aspecto econmico ya que le producen enfermedades a los animales y a las plantas daando las cosechas y las clases de ganados y otros animales domsticos que sirven como fuente de alimento.

Cmo afectan nuestra vida?

M.O. de utilidad industrial: ms de cien especies microbianas son usadas en la produccin de sustancias que no pueden ser obtenidas de forma ms fcil o ms barata por otros medios. Ventajas: tamao, alta tasa metablica, posibilidad de cultivarse a gran escala, estabilidad gentica, etc.

Cmo afectan nuestra vida?

M.o. en la produccin de alimentos: lcteos Biotecnologa
alcohol producido por levaduras cido oxlico utilizado en tintes y colorantes. cido acrlico utilizado como intermediario en la produccin de plsticos. cido lctico empleado para acidificar alimentos y como anticongelante. cido actico Enzimas para aplicaciones tan diversas conversin de harina de maz en miel utilizada como endulcorante Industria farmacutica: antibiticos, hormonas (insulina y GH), factores de crecimiento, interfern, eritropoyetina, etc.

Epidemias
Descritas a lo largo de toda la historia de la humanidad. Atribuidas en la antigedad a hechizos o magia. SIN EXPLICACIN HASTA EL SIGLO XVII.

Anton van Leeuwenhoek

(1632-1723)

Sus primeros dibujos fueron publicados en 1684

Robert Hooke (1635-1702)

Lazzaro Spallanzani (1729-1799)

Robert Koch (1843-1910)

Iniciador de la bacteriologa mdica moderna. Estudi botnica, fsica y matemticas y MEDICINA. Otros intereses: arqueologa, antropologa, las enfermedades ocupacionales, como el envenenamiento por plomo, y la bacteriologa.

Postulados de Koch

Louis Pasteur (1822-1895)

Qumico y bilogo francs fundador de la microbiologa. Comenz investigando los procesos de fermentacin del vino y la cerveza y descubri la existencia de las bacterias que interferan en este proceso. En 1861 introdujo los trminos de aerbico y anaerbico. Introdujo el trmino virus sin hacer distincin y vacuna en honor a Jenner Desarroll vacunas que consiguieron salvar miles de vidas: clera aviar, antrax y rabia

Ferdinand Julius Cohn (1828-1898)

Considerado fundador de la microbiologa moderna y padre de la bacteriologa. En 1872 propuso la clasificacin de las bacterias: gnero, especie y variedades. Describi otros microorganismos patgenos transmitidos por agua contaminada, distintos al V. cholerae

Otros eventos importantes del siglo XIX

1878: Joseph Lister publica sus estudios sobre la fermentacin de la leche Bacterium lactis 1879: Albert Neisser identifica al agente causal de la gonorrea 1880: Alphonse Laverin encuentra al parsito de la malaria en glbulos rojos. 1881: Paul Erlich utiliza el azul de metileno

Siglo XX
Aerobiosis y anaerobiosis En 1938: invencin del microscopio electrnico: virus Tcnicas moleculares: secuenciacin del cido desoxirribonucleico (ADN). Descubrimiento de los priones por Stanley Prusiner y su equipo en 1982 ha abierto una va de estudio dentro de la microbiologa (simples protenas desprovistas de material gentico) En 1988 Kary Mullis utiliza la enzima de Thermus aquaticus para estabilizar la PCR (premio Nobel en 1993)

Alexander Fleming (1881-1955)

Descubri que algunas colonias crecidas de S. aureus eran destruidas por el crecimiento del hongo Penicillium Realiz la extraccin del compuesto activo: penicilina

Karl Woese (1928-

Por anlisis de rARN 16S

Stanley B. Prusiner 1997

California, EEUU Descubrimiento de los priones Enfermedad de las vacas locas y enf. Creutzfeldt-Jakob. Prion = protena + infeccin

Barry J. Marshall & J. Robin Warren (2005)

La lcera pptica: proceso infeccioso Helicobacter pylori Autoinoculacin (1984) Demostraron el tratamiento exitoso con antimicrobianos.

Harald zur Hausen (2008)

Descubrimiento en la causa de cncer cervical por el Virus del Papiloma Humano

Francoise Barr-Sinnousi & Luc Montagnier(2008)

Descubrimiento del Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH) Cultivo de VLA en 1983 en el Instituto Pasteur despus llamado VIH.

1987

Microscopios
Ojo humano 0.2 mm. Microscopio ptico, resolucin mxima 0.2 micras (1 micra). Microscopio electrnico, resolucin mxima 0.5nm

Microscopios

Microscopios

Ejemplo: Staphylococcus aureus

Datos de Guatemala
Tasa de mortalidad: 4,8 por 1.000 hab. Causas principales de mortalidad (ambos sexos): neumona y diarrea. Seis grandes grupos de causas:
enfermedades transmisibles 13% tumores 7% enfermedades del aparato circulatorio 12% afecciones perinatales 8% causas externas 13% Datos INE otras 47%. Guatemala

Mortalidad en Guatemala

Mortalidad en Guatemala

Causas bacterianas importantes de mortalidad

Tuberculosis Ttanos Clera Tos ferina

Siglo XIX
Reino Plantae:
algas (inmviles y fotosintticas) hongos (inmviles y no fotosintticos),

Reino Animalia
Infusorios (microorganismos mviles)
organismos perfectos: dotados de todos los sistemas orgnicos presentes en seres superiores. Divididos en metazoos, protozoos y bacterias

Cambios histricos
Haeckel (1866): introdujo reino Protista
Seres vivos sencillos, fotosintticos y/o mviles Protozoos, algas, hongos y bacterias.

Copeland (1938): introdujo reino Monera

Separa a las bacterias.

Margulis (1969): introdujo reino Fungi y reino Protoctista (m.o. eucariotas y parientes macroscpicos: mohos mucosos no hongos). Woese (1977): ARQUEOBACTERIAS Y EUBACTERIAS

Taxonoma molecular

procariota s

Las bacterias forman el conjunto de los procariotas: ADN libre en el citoplasma y no incluido en un ncleo. Reino Monera.
Los restantes organismos unicelulares se clasifican como eucariotas: genoma en el ncleo: Reino Protista: protozoos y algas unicelulares Reino Hongos: microscpicos y macromicetos Los virus constituyen un mundo aparte, ya que no pueden reproducirse por s mismos, sino que necesitan parasitar una clula viva para completar su ciclo vital.

Procariotas
organizacin celular material gentico (cromosoma circular de ADN de doble hebra) inmerso en el citoplasma Replicacin: fisin binaria carecen de orgnulos rodeados de membrana Ribosomas: coeficiente de sedimentacin de 70S Citoplasma envuelto por una membrana celular Pared celular de peptidoglicano, excepto las arqueas.

TAMAO: clula eucariota vrs clula procariota

Tamaos

FORMAS DE LAS BACTERIAS

cocos

bacilos

espiroquetas

Formas
1. Cocos: (clulas ms o menos esfricas); 2. Bacilos: (en forma de bastn, alargados), que a su vez pueden tener varios aspectos: cilndricos fusiformes en forma de mazo, etc. Segn los tipos de extremos, stos pueden ser: redondeados (lo ms frecuente), cuadrados, biselados, afilados. 3. Espirilos: al igual que los bacilos, tienen un eje ms largo que otro, pero dicho eje no es recto, sino que sigue una forma de espiral, con una o ms de una vuelta de hlice. 4. Vibrios: proyectada su imagen sobre el plano tienen forma de coma, pero en el espacio suelen corresponder a una forma espiral con menos de una vuelta de hlice. Otros tipos de formas: filamentos, ramificados o no anillos casi cerrados formas con prolongaciones (con prostecas)

Formas
cocos bacilos vibrios

espiroquetas

filamentosas

Superficie vs. volumen

En una clula esfrica: cuanto menor sea el radio (r) mayor ser la razn S/V lo que significa que el pequeo tamao de las bacterias permite mayor contacto directo con el medio ambiente inmediato que las rodea reciben las influencias ambientales de forma inmediata. condiciona una alta tasa de crecimiento. La velocidad de entrada de nutrientes y la de salida de productos de desecho es inversamente proporcional al tamao de la clula, y a su vez, estas tasas de transporte afectan directamente a la tasa metablica. Por lo tanto, en general, las bacterias crecen (se multiplican) de forma rpida.

Superficie vs. volumen

Tamao pequeo intercambio ms eficiente, permite mayor velocidad metablica

Agrupaciones
Las bacterias normalmente se multiplican por fisin transversal binaria. En muchas especies, las clulas hijas resultantes de un evento de divisin por fisin tienden a dispersarse por separado al medio, debido a la actuacin de fuerzas fsicas (movimiento browniano). Esto hace que al observar al microscopio una poblacin de estas bacterias veamos mayoritariamente clulas aisladas. Diplococos y diplobacilos: agrupaciones pares

Agrupaciones
Si la tendencia a permanecer unidas es mayor y por ms tiempo, nos encontramos con varias posibilidades, dependiendo del nmero de planos de divisin y de la relacin entre ellos:
Estreptococos o estreptobacilos

Si existe ms de un plano de divisin, en el caso de cocos podemos encontrar tres posibilidades:

dos planos perpendiculares: ttradas o mltiplos tres planos ortogonales: sarcinas (paquetes cbicos) muchos planos de divisin: estafilococos (racimos irregulares).

Bacilos: en empalizada, en V o L, letras chinas.

Estructura celular

Pared celular
Bacteria:
Gram positivo Gram negativo Sin pared

Archaea:
Diversas estructuras Sin pared

Funciones de la pared
Rigidez (mantener la forma, evitar la lisis). Comunicacin con el medio exterior. Puede estar involucrada en patogenicidad (LPS) Barrera para algunas molculas. Espacio periplsmico (enzimas de transporte, hidrolticas, etc.)

Formacin de protoplastos
Mediante procedimientos de laboratorio se puede lograr eliminar total o parcialmente la pared celular bacteriana. Se denominan protoplastos las clulas bacterianas a las que se ha desprovisto totalmente de pared celular, mientras que esferoplastos son aquellas clulas bacterianas que poseen restos de pared.

Formacin de Protoplastos

Baja concentracin de solutos Alta concentracin de solutos

Lisozima -- protena que rompe el enlace glicosdico 1-4 en el peptidoglicano

Gram +

Bacteria

Gram-

Estructura del Peptidoglicano

Pared Celular Gram Positivo

Otros compuestos qumicos caractersticos de la pared de Gram+

cidos Teicoicos
Polmero de alcohol (ribitol o glicerol)

cidos Teicurnicos cidos Lipoteicoicos

Polmero de 16 a 40 unidades de glicerol unido a un glicolpido

cidos Miclicos

Membrana Externa de Gram Negativos

Porinas - protenas que permiten el pasaje de molculas pequeas a travs de la membrana - especficas e inespecficas

Lipopolisacrido (LPS)

Lpido A (NAG-P + grupos acilos) Ncleo del polisacrido contiene KDO (cetodesoxioctonato) y otros carbohidratos (ramnosa, cido galacturnico) usualmente especfico de especies O-antgeno nmero de repeticiones variables tambin contiene carbohidratos especfico de cepa A menudo txico para animales - endotoxina Crea superficies densamente hidroflicas

Funciones del Periplasma (E. coli)

Protenas de periplasma de E. coli Protenas de unin para aminocidos histidina, arginina Enzimas de biosntesis Ensamblado de murena Enzimas de degradacin de polmeros proteasas Enzimas detoxificantes Beta-lactamasas: penicilinasa

Algunas bacterias no poseen pared Mycoplasma

Membrana celular ms gruesa pueden tener esteroles y lipoglicanos. Pleomrficos

Pared celular de Archaea

No contiene peptidoglicano Puede ser de
pseudopeptidoglicano (pseudomurena) tie G+ pseudomurena cubierta de protena, tie G+ monocapa superficial de protena o glicoprotena, sin pseudomurena (halfilos, metanognicos y termoacidfilos) tie G -

Existen Archaea sin pared

Pseudopeptidoglicano de Archaea

Funciones de la pared
Rigidez y resistencia osmtica (mantener la forma, evitar la lisis). Comunicacin con el medio exterior. Puede estar involucrada en patogenicidad (LPS) Barrera para algunas molculas (porinas en gram negativos). Espacio periplsmico (enzimas de transporte, hidrolticas, etc.)

La membrana celular
Estructura:

Bicapa fosfolipdica con protenas embebidas; puede contener tambin hopanoides de estructura similar al colesterol. En Archaea, teres de alcohol isoprenoide, algunas forman monocapas.

Estructura de la Membrana Citoplasmtica

Membrana citoplsmica

Los lpidos en Bacteria y Archaea tienen diferentes enlaces qumicos

Ester - Bacteria Eter - Archaea

Isopreno

Funciones de Membrana Citoplasmtica

Barrera de Permeabilidad slo molculas pequeas, sin carga, hidrofbicas, pueden atravesar la membrana por difusin. Ancla de Protenas transporte, generacin de energa, quimiotaxis Generacin de fuerza proton motriz En fottrofas: Estructuras intracitoplasmticas, soportan el aparato fotosinttico (Vesculas y tbulos) Sntesis de pared y estructuras extracelulares.

Membrana citoplasmtica de E. coli

Estructura celular procariota - ADN

No tiene ncleo. El ADN est en el citoplasma
nucleoide: zona que ocupa el ADN

Es haploide.
Genoma es una nica molcula de ADN de doble cadena, circular.

El genoma contiene 1 - 6 x 106 pares de bases (bp)

procariotas de vida libre: 1000-5000 genes

No contiene histonas (protenas para empaquetamiento de ADN). Puede contener otros elementos genticos no genmicos: plsmidos y genomas fgicos.

Procariotas

No tienen membrana nuclear

ADN Cromosmico
ADN circular cerrado Superenrrollado.

No hay procesamiento del ARNm La transcripcin est ligada a la traduccin.

Citoplasma
Protenas (enzimas, complejos enzimticos, estructurales) Ribosomas (70S: 55 protenas, rARN 5S, 16S, 23S)- polisomas mARN, tARN Otras macromolculas, solutos Sin estructura visible al microscopio No tienen citoesqueleto.

Estructuras caractersticas
Estructuras con funciones especficas. No todos los microorganismos las tienen. Son caractersticas de gnero y especie (taxonoma) Ejemplos:
fimbrias, flagelo, pili, endospora, cpsula, inclusiones citoplasmticas

Fimbrias Pili-Pelos-Flecos L
Fimbria - filamento proteico corto, involucrado en funciones de adhesin a superficies. Pelos ordinarios: adhesin Pelo sexual - unin a clula receptora durante la conjugacin.

Flagelos

Ms de 40 genes involucrados La energa la proporciona la fuerza protomotriz

Flagelos
Slo detectados por tcnicas de tincin especficas

Anaerobaculum mobile sp.

Flagelo insertado lateralmente

Barra 0,5 micras

Endosporas

Resistencia al calor, radiacin, desecacin. Producidas principalmente por los gneros Bacillus y Clostridium Permite la supervivencia en ambientes desfavorables ADN protegido por cido dipicolnico y protenas. Luego de la activacin por stress, la disponibilidad de nutrientes dispara la germinacin y el crecimiento La localizacin de la espora en la clula puede ser usada para su identificacin

Estructura de la espora

Formacin de esporas

A- ADN se duplica y enrolla alrededor del eje central (filamento axial) B- Uno de los cromosomas se rodea de membrana plasmtica. C- el protoplasto es rodeado por la clula madre D- se sintetizan las cubiertas de la espora. E- se elimina agua, se forma estructura resistente al calor. F- se libera la espora por lisis de la clula madre. DIPICOLINATO DE CALCIO EN EL CENTRO DE LA ESPORA

Inclusiones citoplasmticas
Algunas bacterias tienen estructuras internas grnulos de almacenamiento polifosfato,azufre, polihidroxibutirato (PHBs) vesculas de gas flotacin Carboxisomas, clorosomas.

Grnulos de polihidroxibutirato (PHBs)

vesculas de gas flotacin

Cubiertas extracelulares
Glicocliz: Material externo a la pared celular: polmero de carbohidratos o pptidos
HOMO Y HETEROPOLMEROS Cpsulas Capas mucilaginosas Capa S: Subunidades proteicas o glicoproteicas.
G+, G- y Archaea

Funciones
Proteccin Adhesin

Glicoclix

Tincin negativa

Microscopa electrnica

El rbol filogentico universal

Diferencia entre la estructura celular de Bacteria, Archaea y Eucarya

Propiedad Bacteria Eucarya Archaea

Membrana NO SI nuclear Organelos NO SI Tamao 70S 80S ribosoma Peptidoglicano SI NO en la pared Esteroles en NO SI membrana (hopanoides) Lpidos de Ester unidos Ester unido a membrana a glicerol glicerol

NO
NO 70S NO

SI
Eter, ramificados