Curs 3 Clasificarea proteinelor Structura proteinelor

16.10.2013

Structura primar Proteine cu structura secundar Keratina; Colagenul; Elastina Structura teriar Structura cuaternar

Proteine
Compui macromoleculari Sunt 1010 1012 tipuri de proteine n lumea vie

Clasificarea proteinelor

Dup compoziia chimic

proteinele simple formate numai din aa (lizozimul, ribonucleaza).

proteinele conjugate conin grupri adiionale (prostetice) hem (hemoglobina, mioglobina, citocromii, catalaza); coenzime provenite din vitamine (succinat dehidrogenaza, transaminazele, lactat dehidrogenaza); metale (feritina, ceruloplasmina); acizi nucleici (ribozomii, nucleozomii);

lipide (chilomicroni, VLDL, LDL, HDL);

glucide (imunoglobulinele, colagen).

Clasificarea proteinelor dup mrime i form

Proteine globulare
uor solubile n ap
intracelulare: hemoglobina, mioglobina, imunoglobulinele,

Proteine fibrilare
insolubile n ap extracelulare, cu roluri de susinere: collagen, cheratin, miozin, elastin.

Clasificarea proteinelor dup rol

structural: colagenul, elastina, keratina; catalitic (enzime): tripsina, chimotripsina, revers transcriptaza;

aprare: imunoglobulinele , interferonii

hormonal: insulina, glucagonul, parathormonul;

transport:
- albuminele serice (transport cationi, vitamine, metabolii) -hemoglobina (transport oxigen) -transferina (transport fier)

Structura proteinelor
Organizare structural: -structura primar; -secundar; -teriar; -cuaternar

a).Structura primar

Aminoacid Legtur
peptidic

b).Structur secundar

-foaie pliat
-helix Legturi de hidrogen

c).Structura tertiar

Lasou

d).Structura cuaternar

Structura primar a proteinelor sau structura covalent

Structura primar precizeaz:
-tipul; -cantitatea;

-secvena aa din molecul

O H3 N+ CH R1 C N H

R2 CH C O

H N

O CH C R3

 F. Sanger 1953 structura insulinei

 Secvena aa din proteine este determinat

genetic

-fiecare aa proteinogen este codificat de una

sau mai multe secvene de trei nucleotide numite codoni.

 Este important s tim structura primar a proteinelor ???

 Determinarea secvenei de aa este important

pentru:

a. patologia molecular

anemia falciform rezult din nlocuirea Glu din poziia 6 a lanului al Hb cu Val

b.determinarea structurii tridimensionale

Structura tridimensional a moleculelor proteice

se realizeaz structura cu energia

minim determinat de interacii

necovalente

 Mioglobina i hemoglobina au fost primele proteine pentru care s-a stabilit structura tridimensional prin difracie cu raze X In 1962 Perutz i Kendrew au primit premiul Nobel pentru aceast realizare Sunt reprezentate zonele de helix i gruparea prostetic numit Hem

 Cine determin realizarea structurii secundare i teriare a proteinelor ??? -axul catenei polipeptidice i cele -20 de tipuri de radicali legai la C

Structura secundar a proteinelor se refer la

aranjamentul spaial al axului catenei polipeptidice

O H3 N
+

R2 N H CH C O

H N

O CH C R3

CH R1

 Care este conformaia cea mai stabil ?

cea n care se realizeaz cel mai mare

numr de puni de hidrogen ntre gruprile NH- i CO- care aparin diferitelor grupri peptidice.
N H O C

Paquling i Corey au postulat 2 structuri secundare: -elicea i

structura

 Structura -helix
C

lanul din L-aa se rsucete n jurul unui ax, la nivelul legturilor simple;
C

O
C C

HO

gruprile CO- i NHdevin adiacente stereochimic i formez puni de hidrogen.

N C N C

O H
C N

HO O H
N
HH NN NN

O
N

Caracteristicile helixului
elice dreapt; distana ntre 2 aa pe vertical este 0,15 nm; pasul elicei, este de 0,54 nm i cuprinde 3,6 aa per pas; diametrul elicei este de 1,01 nm; radicalii R ai tuturor aa sunt orientai spre exteriorul -helixului

a)

Atomii C ai resturilor aminoacidice consecutive

b)

R R
0.54 nm 3,6 aminoacizi per tur Catena polipeptidic

R R R R

Structura se afl la proteinele fibrilare i globulare

Mioglobina, protein globular, conine 75% structur Keratina, proteina fibrilar, conine aproape 100% structur

Structura -foaie pliat

Toate legturile peptidice componente sunt implicate n legturi de hidrogen care sunt perpendiculare pe axul catenei.

Structura , se refer la legturile de hidrogen

dintre punile peptidice din cadrul aceluiai lan polipeptidic

Structura se refer la legturile de hidrogen dintre

punile peptidice, care fac parte din lanuri polipeptidice diferite.

Tipuri de structuri
structur cu lanuri antiparalele
H N N R O H R O R O H N N H R O R O H N

H N

H N

H N

N O R H O R

N H O

Structur cu lanuri paralele

H N R O H N N R O H R O N H R O R O H N

H N

H N

H N

N R O H R O

N H R O

Structura ac de pr sau -turn

prolina i glicina sunt aminoacizii cei mai rspndii n

cadrul acestei structuri

H2 N HOOC

 Structura este n proporie de ~100% n fibroina din mtase; Structurile conin ntre 2-12 catene polipeptidice; Fiecare caten conine pn la 15 resturi aa.

Structura proteinelor fibrilare

keratina, miozina, colagenul, elastina

Keratina se afl n pr, unghii, piele

La mamifere: keratinele au structur n proporie de ~ 100% se afl cca. 30 variante de keratin n funcie de esut

 Structura primar
-au un coninut ridicat de Cys

-fiecare lan peptidic conine 7 aa care se repet

-n poziiile a i d predomin resturi nepolare -pasul elicei n -helix este 0,51 nm

Structura secundar
dimer protofilament protofibrile microfibrile

macrofibrile

a) Dimer

b) Protofilament

c)Microfibril

Capete N-terminale
~450 A

Capete C-terminale

Protofibril

Proprietile keratinelor
Keratinele pot fi: - cu coninut ridicat n sulf hard;
- cu coninut sczut n sulf soft Legturile disulfurice pot fi rupte prin reducere cu mercaptani. Tratarea prului cu un agent oxidant restabilete legturile de sulf ntr-o conformaie nou

Colagenul.
este cea mai abundent protein fibroas
(~25% din masa proteinelor organismului uman)

este componentul major al esutului conjunctiv din oase, dini

cartilagii, tendoane, cornee i din matricea fibroas a pielii i vaselor de snge.

reprezint 90% din matricea organic a osului

prezint rezisten la traciune

pstreaz integritatea esuturilor n constituia crora intr.

 Structura primar: (X Y - Gly)n

glicina (33%) prolina (10%) hidroxiprolina i hidroxilizina doi aminoacizi atipici (proporie mic) nu conine cistein

prolilhidroxilaza i respectiv lizilhidroxilaza n prezena

O2, a ionilor Fe2+ i a vitaminei C catalizeaz hidroxilarea prolinei i lizinei

Deficiena vitaminei C afecteaz hidroxilarea i, prin urmare, obinerea unui colagen normal.

Structura secundar
trei lanuri polipeptidice , fiecare formnd cte o elice cu rsucire spre stnga, se nfoar unul n jurul celuilalt

rezultnd un triplu helix (tropocolagen)

cu rsucire spre dreapta

 pasul elicei din lanurile este 9,3 (din cauza prolinei) pasul triplei elice este de ~28

 moleculele de tropocolagen se asociaz formnd microfibrile

Secventa de aminoacizi -helix

- Gly - X - Y - Gly - X - Y -Gly - X - Y -

Triplu helix

Tropocolagen

Fibrila de colagen

Fibra de colagen

 microfibrilele sunt stabilizate prin legturi covalente ncruciate la care particip resturile de Lys i His
numrul legturilor ncruciate crete cu vrsta microfibrilele se dispun n mod deosebit n diverse organe

 La mamifere:
19 varieti de colagen 30 lanuri , distincte genetic cel mai rspndit este colagenul de tip I [1 (I)]2 . 2(I)

 Colagenul, odat format, este relativ stabil metabolic; Reinoire 6 luni piele, 2 luni muschi, 1 luna ficat Degradarea colagenului este crescut n foame i n diferite stri inflamatorii, enzime colagenaze

Producerea excesiv de colagen are loc n ciroza hepatic

 Elastina este cea mai important protein din esuturile care necesit
elasticitate (plmn, artere, unele ligamente elastice). masiv in aorta

Spre deosebire de colagen:

nu conine hidroxilizin; conine ~30% Glicin, ~10% Prolin,

muli aa nepolari i o proporie foarte mic de hidroxiprolin

nu conine:
unitatea repetitiv (Gly-X-Y) triplul helix carbohidrai

 Este o singur varietate genetic de elastin;

Se sintetizeaz n fibroblati sub form de tropoelastin n care cteva resturi de prolin sunt hidroxilate la hidroxiprolin

Dup secreie n mediul extracelular formeaz agregate

insolubile extrem de stabile cu un turnover lent

 O scdere a cantitii de elastin se

nregistreaz n emfizemul pulmonar

Enzima elastaza

 Fibronectinele, o familie de glicoproteine care se afl n

matrixul extracelular i n plasm

sunt dimeri (250 kDa) unii prin puni disulfurice;

au rol:
n interaciile dintre celule i membranele bazale sau ntre diveri componeni ai matricei extracelulare i celule n embriogenez n meninerea integritii esuturilor n hemostaz

 Fibronectinele stabilesc legturi cu alte proteine

conectnd:
proteine extracelulare (colagen, laminin)

mucopolizaharide (proteoglicani)
receptori membranari (integrine)

proteine intracelulare care formeaz citoscheletul

(actin, vinculin)

Structuri supersecundare
In structura proteinelor globulare se combin elemente de structur secundar -helix

-foaie pliat
secvene nerepetitive

Unitate --

Greek key

-meander

-barell

 Resturile prolil, mpiedic rsucirea elicoidal a lanurilor polipeptidice Resturile glicil, confer lanurilor polipeptidice flexibilitate structuri de forma literei , formate din 6 pn la

16 resturi aminoacidice au rol n procesele biologice

de recunoatere.

Structura teriar a proteinelor

descrie mpachetarea lnului polipeptidic ca urmare a interaciunilor necovalente dintre radicalii R de la C

este dictat de structura primar

a).Structura primar

Aminoacid Legtur
peptidic

b).Structur secundar

-foaie pliat
-helix Legturi de hidrogen

c).Structura tertiar

Lasou

d).Structura cuaternar

Tipuri de legturi necovalente dintre radicalii R ai aa

Legturi ionice - ntre radicalii cu sarcin negativ (din Asp, Glu) -radicalii cu sarcin pozitiv ( din Lys i Arg):

NH CH CO Aspartil
CH2 COO
-

NH H3N
+

(CH 2) 4

CH CO Lizil

Puni de hidrogen
ntre radicalii cu grupri: -alcoolice (din Ser, Thr) -fenolice (din Tyr) -amidice (din Gln i Asn):

NH CH CH2 OH CO Seril

H O
CH2

NH CH CO Seril

Interaciuni hidrofobe
ntre resturile aa nepolari ca Val, Leu, Ile, Phe, Ala:

NH CH CH3 CO Alanil

H3 C CH H3 C

NH CH CO Valil

Legturi disulfurice
ntre resturi de Cys
NH CH CO Cisteinil CH 2 S NH S CH 2 CH CO Cisteinil

Etape n mpturirea proteinei

Localizarea radicalilor n structura tridimensional a

proteinelor n funcie de polaritatea lor

Radicalii nepolari de la Val, Leu, Ile, Met i Phe ocup n cea mai mare parte interiorul proteinei, fiind lipsii de contactul cu apa Radicalii polari, cu sarcin electric de la Arg, His, Lys, Asp i Glu sunt de obicei localizai la suprafaa proteinei n contact cu apa. Gruprile polare nencrcate electric de la Ser, Thr, Asn, Gln i Tyr sunt de obicei la suprafaa proteinei dar se pot localiza i n interiorul moleculei.

 Titina = conectina codificat de gena TTN (363 exoni) Este o protein gigant (varianta uman conine 34.350 amino acizi), Metionin-------Izoleucin responsabil de elasticitatea musculaturii striate funcioneaz ca un arc molecular it serves as an adhesion template for the assembly of contractile machinery in muscle cells

Mioglobina
protein globular se afl n muchi rezervor tisular de oxigen. conine o parte proteic numit globin i o grupare neproteic denumit hem.
Hem

 75% din lanul polipeptidic formeaz -helix Lanul polipeptidic cuprinde 8 segmente elicoidale (denumite A, B, C, .H) Prolina se afl n 4 puncte de terminare a elicelor

C F G E H B

 Neuroglobina
-a fost identificat n anul 2000 ca protein implicat n homeostazia celular a oxigenului -n 2003 s-a stabilit structura tridimensional 3D a neuroglobinei umane

Neuroglobina Este hemoprotein intracelular exprimat n:

sistemul nervos central i periferic lichidul cerebrospinal retin i esuturi endocrine

Monomer care leag reversibil oxigen, mult mai puternic dect Hb -furnizeaz protecia creierului n condiii de hipoxie sau ischemie

Structura cuaternar
proteine oligomere, sunt alctuite din mai multe lanuri peptidice, numite protomeri

protomeri prezint fiecare structura sa primar, secundar i teriar.

 Asamblarea protomerilor, structura cuaternar, se realizeaz numai prin fore slabe necovalente Complementaritatea suprafeelor de contact asigur un grad nalt de specificitate structurilor cuaternare

Proteina

Masa proteinei Kdaltoni

Numr protomeri

Masa protomerilor Kdaltoni

Creatin kinaza
Miozina

80
468

2
2

40
212

Lactat dehidrogenaza

150

35

Glicogen fosforilaza Hemoglobina Ceruloplasmina

270 64,5 151

4 4 8

92,5 16 18

Glutamin sintetaza

592

12

48,5

Importana structurii cuaternare

Structura cuaternar permite reglarea activitii proteinelor

Defectele pot fi reparate prin simpla nlocuire a subunitii

aperonii moleculari
sunt proteine care:
favorizeaz mpturirea corect a proteinelor; permit proteinelor greit mpachetate s se rearanjeze n forma lor nativ; faciliteaz transportul proteinelor prin membrane

aperonii = proteine de oc termic (Hsp) deoarece viteza lor de

sintez crete cu creterea temperaturii

Hsp 70, proteine cu masa molecular 70-kD i aperonine,

proteine mari cu multe subuniti.

Impturirea greit a proteinelor (protein misfolding)

Se asociaz cu amiloidozele i bolile prionice Amiloidozele Cine determin impturirea greit a proteinelor ?
se poate produce spontan sau poate fi determinat de o mutaie genetic.
Precursorul proteinei amiloid Clivare enzimatic Amiloid A Agregarea spontan a amiloidului cu formarea fibrilelor de foi -pliate

Extracelular Membran Intracelular

Clivare enzimatic

Formarea plcii amiloid

Bolile prionice
Prionii sunt proteine implicate n maladii ca:

encefalopatia spongiform transmisibil

maladia Creutzfeldt Jakob la om

scrapie in sheep i mad cow disease

Forma neinfecioas a prionilor este prezent n creierul mamiferelor fiziologic normale, pe suprafaa neuronilor i a celulelor gliale Ea are aceiai structura primar cu proteina infecioas

 Protein normal protein infecioas transformare determinat de modificarea conformaiei tridimensionale

Agentul infecios este, o versiune modificat a proteinei normale, care acioneaz ca template pentru transformarea proteinei normale ntr-o form patogenic.

Modificarea conformatiei proteinei

Cresterea exponential a formei infectate

 PI proteine Denaturare proteine

Curs 4

23.10.2013

Hemoproteine
Mioglobina

Hemoglobina; citocromii
Proteine plasmatice
serumalbumine
globuline

Hemoproteinele
proteine conjugate (hem + parte proteic):
-hemoglobina; -mioglobina; -citocromii; -diverse oxidaze i peroxidaze

Hemul
Hem = grupare prostetic -conine Fe2+ i protoporfirina IX Protoporfirina IX = compus tetrapirolic, cu caracter aromatic, cu urmtorii substitueni: 1, 3, 5, 8 grupri CH3 (metil, M); 2, 4 grupri CH=CH2 (vinil); 6,7 grupri CH2-CH2-COOH (propionic, P)

M HC N P HC H N

V CH N CH V

N H

P M Protoporfirin IX

 Protoporfirina leag coordinativ un ion de Fe2+ formnd hemul

Ionul feros din hem are cifra de coordinaie 6

Hemul este aezat n cavitatea hidrofob a hemoproteinelor

Mioglobina
protein globular se afl n muchi rezervor tisular de oxigen
Hem

conine o parte proteic numit globin i o grupare neproteic denumit hem. (87 prox 58 distal)

Legarea O 2 n mioglobin
leag reversibil un mol de O 2
Mb + O2 MbO2

rol n depozitarea i dispersarea tisular

la nivel

His proximal

N Fe N
O=O
2+

N
His distal

Metmioglobin
Mb n care se afl Fe3+ nu poate lega O2 oxigenul este nlocuit cu o molecul de ap

hem din proteine poate lega i: CO, NO, H2S

cu afinitate mult mai mare dect O2

Mb leag O2 la presiunea mic a acestuia din esuturi

O2 PO2=100mm Hg Hemoglobin + CO2 Hemoglobin + O2 PO2=20 mm Hg Muschi CO2 Mioglobin + O2 Mitocondria

CO2 Plmn Snge

Curba de oxigenare a Mb
100
Saturare cu O2 (%)

Arc de hiperbol
Mb

80 60 40 20

20

40

60

80 100 120 Presiunea O2 (mm Hg)

P50 pentru Mb = 1 torr

Hemoglobina
protein intracelular (eritrocite) Tetrameric (are structur cuaternar) d culoarea sngelui fiecare subunitate a Hb = hem + globin, unde se leag oxigenul hem din Mb hem din Hb

Structura hemoglobinei
protein oligomer

a)

b)

Hem Locul de legare a 2,3-bisfosfogliceratului

Specii moleculare de Hb
Hb A1 = Hb A2 = d

Hb F = g
Hb E = e

Rolul fiziologic al Hb
Hb transport
O2 de la plmn la esuturi CO2 i protonii de la esuturi la plmn.

Curba de oxigenare a hemoglobinei.

Hb fixeaz 4 molecule de O2 cooperativitate
O2 O2 O2 O2

Hb

HbO2

Hb(O2)2

Hb(O2)3

Hb(O2)4

Curba de oxigenare a Hb este o sigmoid

Valoarea P50 pentru Hb este de 26 mm Hg
100

Mioglobin

Hemoglobin (pH=7,4)

Saturare cu O2 (%)

80 60 40 20

Tesut

Plmn

P50 (Hb) 20 40 60 80 100 120 Presiunea O2 (mm Hg)

Legarea O2 la Hb se face prin cooperativitate

Strile conformaionale T i R ale Hb

Starea T - conformaia deoxiHb -interaciuni intracatenare i intercatenare; -opt legturi ionice

NH3

Asp 94 Arg 141 Lys 40 His 146 Asp 94 Asp 126 Asp 126 Lys 40

His 146

COONH3+

COONH3
+

Arg 141

COONH3+

COO-

Starea R - conformaia oxiHb

Planul protoporfirinei
H2C C CH N CH H2C CH N

Fe

2+

Fe

2+

Histidina proximal (F 8)

O2

CH

Forma T

Helix F

Leu Leu Histidina proximal (F 8) Val Forma R

Fe
Planul protoporfirinei
O2

Factori care influeneaz eliberarea O2 de pe Hb:

-temperatura
-pH-ul -presiunea CO2 -2,3-bisfosfogliceratul

Transportul CO2 i efectul Bohr

efect Bohr
Eliberarea O2 de ctre Hb crete cu scderea pH-ului i creterea presiunii pariale a CO2.

100
Saturare cu O2 (%)

pH=7,6 pH=7,4

80 60 40 20 pH=7,2

20

40

60

80 100 120 Presiunea O2 (mm Hg)

Efectul Bohr, creterea afinitii Hb pentru O2, cu creterea pH-ului

Prin efectul Bohr Hb furnizeaz O2 suplimentar muchiului n contracie

muchiul n contracie, P <20 torri. Muchiul genereaz acid lactic pH-ul poate ajunge de la 7,4 la 7,2.

La pO2 de 20 tori Hb elibereaz de ~10 ori mai

mult oxigen la pH=7,2 dect la pH=7,4

 Transportul CO2 la plmn:

15% din CO2 este transportat la plmn sub form

de carbamai
gruprile NH2 ale aa terminali din lanurile Hb i a altor proteine, leag CO2 forma T (deoxi) a Hb leag mai mult CO2 dect forma R (oxi).

NH2 + CO2

+ + H R NH COO ion carbamat

 85% din CO2 este transportat n form de ion bicarbonat la plmn:

CO2 + H2O H2CO3

anhidraza carbonic

H2CO3
-

H + HCO3

Plmn
Expirare CO2+H2O CO2
AC

Snge

Muschi
Respiratie

HCO3- +H+

HCO3- +H+

AC

CO2

CO2+H2O

H2O Hb HbH+ HbH+

H2O MbO2 Hb O2 O2

Inspirare O2 pO2=100 tori

HbO2

HbO2

Mb pO2=20 tori

Bisfosfogliceratul se leag la deoxi-Hb

Se afl n eritrocite n raport molar 1:1 cu Hb micoreaz afinitatea Hb pentru O2 de 26 de ori

OC H H C C O O PO32O PO3
2-

H D-2,3-bisfosfoglicerat

Structura hemoglobinei
protein oligomer

a)

b)

Hem Locul de legare a 2,3-bisfosfogliceratului

His 143 Lys 82

G

His 2

NH3+

NH3+

His 2

Lys 82

His 143

 Curba de oxigenare a hemoglobinei n absena 2,3bisfosfogliceratului

Fr 2,3-BPG

100
Saturare cu O2 (%)

80
Cu 2,3-BPG

60 40 20

20

40

60

80 100 120 Presiunea O2 (mm Hg)

 lanurile peptidice g din Hb F nu leag 2,3-bisfosfogliceratul

Hematii de la ft

100
Saturare cu O2 (%)

80 60 40 20
O2 trece de la oxihemoglobina matern la deoxihemoglobina fetal Hematii de la mam

20

40

60

80 100 120 Presiunea O2 (mm Hg)

In prezena 2,3-bisfosfogliceratului Hb F are afinitate mai mare pentru oxigen

dect Hb matern.

 Hb transport NO, vasodilatator, la celulele din pereii capilarelor tisulare favoriznd eliberarea O2

Aspecte clinice
Glicozilarea Hb A1 n diabetul zaharat

-peste 12% din cantitatea total de Hb poate fi glicozilat n

diabet (NORMAL ~ 5%)

Hemoglobinopatiile (mutaiile n structura subunitilor

proteice): -Hb S sau anemia cu hematii n form de secer Glu 6 Val

-Thalasemiile sunt anemii hemolitice determinate de producerea

unor cantiti insuficiente de subunitii sau din hemoglobin.

Citocromii
transport electroni

Structura citocromului c

In legtur cu Hb este corect afirmaia: A. Hb leag 4 molecule de 2,3-bisfosfoglicerat B. OxiHb i dezoxiHb au aceiai afinitate pentru protoni C. Acidoza (scderea pH-ului) micoreaz sigmoidicitatea curbei de saturare cu oxigen a Hb D. Hb transport NO la celulele din pereii capilarelor tisulare favoriznd eliberarea O2 E. Afinitatea Hb pentru oxigen scade cu creterea procentului de saturare cu oxigen a acesteia

Afirmaia corect att pentru mioglobin, ct i pentru hemoglobin este:

A. Leag hemul ntr-o cavitate hidrofil
B. Curba de saturare cu oxigen este influenat de variaia pH-ului mediului

C. Contine subuniti proteice legate covalent ntre ele

D. Leag bioxidul de carbon sub form de carbamino-derivai

E. Are o proporie foarte mare de structur ca structur secundar

Structura hemoglobinei
protein oligomer

a)

b)

Hem Locul de legare a 2,3-bisfosfogliceratului

Proteinele plasmatice
Concentraia proteinelor Linia de start plasmatice 7g/dl
g

Alb

Albumine 55 (%) 1-globuline 4 2-globuline 8 -globuline 12 g-globuline 16 Fibrinogen 200-400 mg/dl

Sensul de migrare Albumine g

Serumalbuminele
proteine sintetizate n ficat
Au pI = 5 La pH-ul fiziologic migreaz spre anod avnd o ncrcare negativ

 Menin presiunea coloid osmotic a plasmei

Sunt transportori:
Hormoni vitamine Medicamente Cationi acizi grai liberi bilirubin

sistem tampon plasmatic

Globulinele
-globulinele care cuprind: -antiproteaza (antitripsina), apolipoproteina A; -globulinele care cuprind: haptoglobina, ceruloplasmina; -globulinele care cuprind: transferina, apolipoproteina B, componentele C3 i C4 ale complementului g-globulinele care cuprind: anticorpii

Hipergamaglobulinemie policlonal (difuz)

-infec ii bacteriene cronice -boli hepatice cronice -boli autoimune

Hipergamaglobulinemii monoclonale (paraproteinemiile)

Prolifereaz o singur clon de limfocite B Ig cu structur identic (ex.proteine Bence - Jones)

Rspuns imediat determinat de

stres, inflama ie cauzat de infec ii, distruc ii tisulare, traume chirurgicale

Inflamaie cronic
(endocardit bacterian, tuberculoz, poliartrita cronic, colagenoze= (Proliferare plasmocite din mduv, ganglioni, splin)

Sindrom nefrotic

 Sindrom nefrotic (pierdere de proteine pe cale renal)

Scad proteinele serice totale i extrem de accentuat proteinele cu mas mic (albuminele, siderofilina, antitrombina III, componente 1), datorit eliminrii prin urin ca urmare a creterii permebilitii filtrului glomerular fa de proteine

Cresc proteinele serice cu mas mare (2 macroglobulina, fibrinogenul, lipoproteinele i IgM) dei nu se elimin renal i au turnover rapid
Scderea concentraiei albuminelor serice duce la reducerea presiunii coloid osmotice a plasmei (apariie edeme) fapt ce stimuleaz sinteza hepatic de proteine

inclusiv de albumine dar acestea se elimin renal

Crete colesterolul i lipemia

Hipogamaglobulinemia (sindromul deficien ei de anticorpi)

-hipogamaglobulinemiile trectoare ale nou-nscu ilor -hipogamaglobulinemii: congenitale legate de sex (lips plasmocite, limfocite circulante normale) de tip alimfocitar (lips plasmocite, hipoplazie timus i esuturi limfatice) -hipogamaglobulinemii c tigate (sindrom nefrotic, lezarea celulelor productoare)

Pierdere enteral de proteine

eliminare proteine plasmatice n tractul digestiv Lipsesc hipercolesterolemia i hiperlipemia i globulinele nu cresc ca n nefroz

Curs 5
Imunoglobuline

30.10.2013

Proteine cu rol n coagulare

Imunoglobulinele

Sunt proteine hidrosolubile numite anticorpi (Ac)

Loc de legare antigen

VL

VL Lant usor CL CL
COO-

Loc de legare antigen

VH Lant CH 1 greu

OOC

VH CH 1

Fab

Papaina
OHC

Fab

Zon flexibil
CHO Zon de legare a complementului

CH 2 Fc CH 3

CH 2
Punti de sulf

CH 3

V = Zone variabile C = Zone constante

OOC

COO-

 In ce lichide biologice se afl ???

saliv, lacrimi, lapte matern, majoritar n plasm;

nu pot traversa bariera hemato-encefalic sau filtrul renal.

Cine le produce ??? sunt elaborate de limfocite B (plasmocite) n urma unui stimul antigenic;

Ce rol au ??? Ac + Ag complexul Ag-Ac care

blocheaz antigenul i
iniiaz procese care distrug antigenul

Funciile sistemului imun

recunoatere antigeni; declanarea cilor pentru distrugerea antigenilor recunoaterea i distrugerea celulelor nonself

 Care sunt celulele responsabile de producerea anticorpilor ????

Limfocite
organele limfoide primare (timus i mduva hematogen).
organele limfoide secundare (splin, ganglioni limfatici, amigdale) limfocite circulante - aproximativ 25% din elementele figurante albe

 Ce rol are sistemul imunitar ???

Dup mecanism rspunsul imun poate fi: Umoral mediat de limfocitele B Celular mediat de limfocitele T

Rspunsul imun umoral

se bazeaz pe producerea de Ig
Mediat de limfocite B maturate n mduv

Antigen

Y
Limfocite B

Diferentiere proliferare

Plasmocite

Ig

(Y)

Rspunsul imun celular

Mediat de limfocite T maturate n timus Receptorii limfocitelor T:
pot exista numai ca molecule ataate la suprafaa limfocitelor T;

recunosc numai epitopii rezultai din procesarea antigenelor native i care au fost expui la suprafaa celulelor prezentatoare de antigen (macrofage, monocite, limfocite B, celule dendritice) n conjuncie cu moleculele MHC II (complexul major de histocompatibilitate).

 Limfocitele T

-celule T killer
-celule T helper -celule T supresoare

Antigeni
antigeni = orice substan
exo- sau endogen

capabil s declaneze un rspuns imun.

In ce const declanarea unui rspuns imun ??? stimularea producerii de Ac sau receptori celulari care se pot cupla specific cu Ag inductor.

Proprietile antigenelor
Imunogenitatea = Ag determin organismul s produc un rspuns;

Ce presupune rspunsul imun:

-selecia clonal (clon = o populaie de celule identice); -activarea metabolic a clonei; -expansiunea clonal

Imunogenicitate

Antigen

Y
Limfocite B

Diferentiere proliferare

Plasmocite

Ig

(Y)

Specificitatea

Ag induce sinteza de Ac care se combin doar cu Ag care au indus rspunsul

 Care sunt componentele macromoleculei antigenice ???

Ag complet: component haptenic i componenta purttoare

 determinani antigenici sau epitopi = locul specific de pe antigen la care se leag anticorpul

pe suprafaa unui antigen pot exista 10 pn la 1000 determinani antigenici

 Antigenele pot fi: imunogene sau complete -declanaz rspuns imun -reacioneaz specific cu produsele rezultate haptene sau Ag incomplete -greutate molecular mic -reacioneaz cu Ig specifice -nu pot iniia un rspuns imun umoral tradus prin producie de anticorpi, dect cuplate cu o macromolecul purttoare.

Condiii de antigenicitate
s fie non-self s aib o greutate molecular mai mare de 10.000 dal s aib conformaie spaial stabil structura chimic s fie ct mai complex

Clase de antigene
Proteinele sunt cele mai puternic antigenice Glucidele i lipidele pot deveni antigene numai legate de proteine. Acizii nucleici sunt slab antigenici.

Structura anticorpilor
Anticorpii sunt tetrameri cu formula molecular H2L2

-dou lanuri grele identice H (heavy) -dou lanuri uoare identice L (light)

Loc de legare antigen

VL

VL Lant usor CL CL
COO-

Loc de legare antigen

VH Lant CH 1 greu

OOC

VH CH 1

Fab

Papaina
OHC

Fab

Zon flexibil
CHO Zon de legare a complementului

CH 2 Fc CH 3

CH 2
Punti de sulf

CH 3

V = Zone variabile C = Zone constante

OOC

COO-

Funciile imunoglobulinelor
recunosc Ag i se combin cu el

Ag + Ac

Ag - Ac

O molecul tetrameric de Ig este bivalent

Clasele de anticorpi
IgG cu lanuri grele de tip g; i lanuri uoare l sau k
IgA cu lanuri grele de tip ; i lanuri uoare l sau k IgM cu lanuri grele de tip m; i lanuri uoare l sau k IgD cu lanuri grele de tip d; i lanuri uoare l sau k IgE cu lanuri grele de tip e; i lanuri uoare l sau k

Rolul anticorpilor
IgG -sunt monomeri bivaleni -75-80% din Ig organismului -traverseaz bariera placentar -IgG apar dup IgM i IgE -se afl n snge, limf, lichide interstiiale -se sintetizeaz n cantiti mari. -activeaz complementul

IgA

pot fi monomeri i dimeri reprezint 15% din Ig organismului.

se afl n snge, n secreii i pe suprafaa mucoaselor

IgA nu activeaz complementul.

IgM
sunt pentameri cu cinci situsuri de legare a Ag
reprezint 3% din Ig organismului. se gsesc predominant intravascular (80%). pot traversa bariera vascular alterat, aprnd n focarele inflamatorii. nu se transmit transplacentar, dar apar n concentraii reduse n colostru i secreii. IgM intervin dup IgE, dar naintea IgG.

IgE
sunt monomeri, sunt bivalente. se mai numesc reagine. IgE sunt circulante sau fixate la suprafaa mastocitelor, avnd rol n strile de hipersensibilitate de tip anafilactic. Dup imunizare, sunt primii anticorpi care apar (ntre ziua a 7-a i a 10-a). Nu activeaz complementul.

IgD
sunt monomeri, sunt bivalente. reprezint 0,2% din totalul Ig serice. IgD se afl pe suprafaa limfocitelor B, n structura receptorilor.

n legtur cu hepatenele sunt corecte afirmaiile: A.Sunt macromolecule B.Pot funciona ca antigene complete C.Legate covalent de o macromolecul pot funciona ca determinani antigenici D.Se leag puternic de anticorpii specifici E.Nu acioneaz niciodat ca determinani antigenici

Care dintre afirmaiile de mai jos n legtur cu imunoglobulinele nu sunt corecte ? A. Legarea antigenului se face printr-un domeniu situat la capetele carboxi-terminale B. Migreaz electroforetic cu fraciunea gama a globulinelor plasmatice C. Leag antigenul prin legturi covalente D. Contine legaturi disulfurice intre lanturile de tip H E. Pot functiona ca receptori de membran ai limfocitelor B, pentru antigeni nativi

Proteine implicate n coagularea sngelui.

Coagularea sngelui este o component a hemostazei care implic: -vasoconstricie -aderarea i activarea trombocitelor la locul leziunii vasculare.

 La coagulare particip componeni plasmatici sau tisulari.

Componenii cascadei de coagulare

Majoritatea sunt enzime care se activeaz n cascad se noteaz cu cifre Romane, de la I la XIII (factorul VI nu exist) sufixul a arat c factorul este activ.

 ionii de Ca2+ reprezint factorul IV Factorii V i VIII nu sunt enzime

Factorul III sau factorul tisular este produs de endoteliul vascular F III + Ca2+ activeaz F VII

 Se afl n snge, n form inactiv de zimogeni se activeaz prin proteoliz, n cascad

Calea intrinsec
Kalikrein, Kininogen

Calea extrinsec Traum tisular

Factor XII

Factor XII a Factor tisular Factor XI a Factor VIIa Factor VII

Factor XI

Factor IX

Factor IXa
VIIIa VIII

Factor X Factor X a
Va V

Factor X

Protrombina II

Trombin

Factor XIII

Fibrinogen I

Fibrin

Factor XIIIa

Retea stabilizat de fibrin

Fibrinogenul
Factorul I al coagulrii protein plasmatic hidrosolubil este precursorul fibrinei (Factorul Ia) Concentraia plasmatic: 200-400 mg/dl (2-3% din proteinemia total)

Structur
Este un hexamer (ABg) Lanurile B i g au oligozaharide legate N-glicozidic

are 17 puni disulfurice

fibrinopeptidele A i B conin resturi de Glu i Asp;
n segmentul B se gsesc i resturi de tirozin sulfatat.

Fibrinopeptidul A Fibrinopeptidul B

Lantul A

Lantul B Lantul g

-COO-

-NH3+ 47,5 nm

-COO-

Transformarea fibrinogen-fibrin
Fibrinogen H2 O Fibrinopeptide Monomer de fibrin Agregare

Chiag moale de fibrin Factor XIIIa (transamidaz)

Chiag stabil de fibrin

2.Legtura:

A.Se formeaz sub influena F-XIIIa

B.Este o legatur ntre un rest de Lys i un rest de Gln C.Se formeaz ntre lanurile L i H ale imunoglobulinelor D.Se formeaz ntre lanurile alfa i beta din hemoglobin E.Se formeaz ntre agregatele de fibrin

Protrombina (Factorul II)

sintetizat n ficat Captul N-terminal al protrombinei conine multe resturi de acid glutamic carboxilat, carboxilarea este un process dependent de prezena vitaminei K

O OC CH R NH CH CH 2 CO NH CH

COO

CO

COO CH 2 CH 2 Protrombin NH CH

O OC CH O2; CO2

COO CH 2

CO OH CH 3 R OH

Protrombin O

NH

CH

CO

CH 3 R O

Trombina
proteaz care activeaz un numr mare de factori din cascada de coagulare: fibrinogen (factorul I); factorul de stabilizare a fibrinei (factorul XIII); factoru V; factorul VIII; factorul XI.

Reglarea procesului de coagulare

1. Inhibarea formrii chiagului

Natural

 De ctre componeni plasmatici

inhibitorul cii extrinseci

antitrombina III

proteina C este o serin proteaz plasmatic, dependent de vitamina K, activat de trombin, care transform factorii activi VIIIa i Va n forme inactive

 trombomodulina este o glicoprotein din endoteliul

vascular, care acioneaz ca receptor pentru trombin

Complexul trombin-trombomodulin:

scade afinitatea trombinei pentru fibrinogen

crete afinitatea trombinei pentru proteina C

2.Degradarea chiagului (fibrinoliza).

Plasminogenul este activat de: urokinaza (activatorul plasminogenului din rinichi) factorul tisular activator al plasminogenului (proteaz eliberat de endoteliul vascular).

Factor tisular Plasminogen Plasmin Cheag de fibrin Peptide solubile

n contrast, 2-antitripsina, proteina plasmatic, se leag de plasmina activ inhibnd fibrinoliza.

 Urokinaza Factorul tisular activator al plasminogenului Streptokinaza (o proteinaz bacterian cu activitate similar, sunt utilizate n clinic pentru dizolvarea chiagurilor formate n urma unor afeciuni cardiace).

 Homeostazia plachetar este meninut de:

Tromboxan A2 produs de plachetele activate care Promoveaz agregarea plachetelor Stimuleaz vasocostricia musculaturii netede vasculare Prostaciclina produs de celulele endoteliului vascular
Inhib agregarea plachetar Stimuleaz vazodilataia

Efectul opus al TXA2 iPGI2 inhib formarea trombilor la locul injuriei

Care dintre afirmatiile de mai jos, referitoare la fibrinogen, sunt corecte ? A. Este necesar transformrii protrombinei in trombin B. La pH fiziologic, molecula este ncrcat negativ C. Nu prezint structur cuaternar D. Are solubilitate n ap mai mic dect fibrina, ntruct are masa molecular mare E. Conine resturi de tirozin sulfatate