Respuesta inmune de los Odontoblastos en la pulpa dental

JOURNAL OF EXPERIMENTAL ZOOLOGY (MOL DEV EVOL) 312B:425436 (2009)

Estudiante: Raimundo Luco Brquez

Introduccin
Bacterias en medio rico en azcar -> cido que desmineraliza Esmalte (protector impermeable de Dentina y Pulpa). Bacterias (Gram +) atacan y a la vez se mueven por los Tbulos Dentinarios, gatillando inflamacin y respuesta inmune donde subyace la Pulpa.

P
Puede haber eliminacin del agente microbiano y bloqueo de la ruta de infeccin -> nueva formacin de Dentina, pero que conllevan eventos inflamatorios en la pulpa. En caso de no solucionar el problema se generan: Pulpopatas irreversibles, Necrosis Pulpar, infecciones Radiculares y enfermedades periapicales.

 Se seala la importancia de encontrar nuevos Agentes que limiten el proceso Inflamatorio y respuestas Inmunes en la Pulpa para mantener la vitalidad y salud del Tejido. Hay que reconocer a las Clulas y Molculas que gatillan y amplifican estas respuestas. Por lo tanto sabemos que el Odontoblasto est involucrado en el Inicio, desarrollo y mantenimiento de los eventos hablados recientemente. Caractersticas del OB: Derivan de la Cresta neural. C mesenquimticas organizadas como una lnea densa en la Interface P-D. Presentan Procesos Odontoblsticos incluido en el tejido Dentinario. Funciones: Sntesis y depsito de matriz de Col 1 + Glicoprotenas (Predentina) que luego se mineraliza (CHP) y se forma Dentina. 1 lnea de defensa del Diente.

 Este artculo nos muestra cmo: 1. Se reconocen a estos patgenos y sus efectos de inflamacin e inmunidad.

2. Cmo se expresan los receptores de patgenos y la eventual quimiotaxis de citoquinas que respectan a la salud de la pulpa.

Reconocimiento de Bact. por OB.

Inmunidad innata en reino animal se basa en el reconocimiento de patrones moleculares asociados a patgenos (PAMPs) por los receptores de reconocimiento de patrones (PRRs).

PRRs

PAMPs

PAMPs incluyen componentes de la pared celular bacteriana: - Lipopolisacaridos (LPS) Gram (-). - Peptidoglicano. - LIpopeptidos triciclados y diacliclados. - Acido lipoteicoico (LTA) Gram (+). - Flagelina. - Protena fngica. - DNA y RNA bacteriano.

 Tipo de reconocimiento importante de PAMPs

Receptores tipo toll.

Tienen caractersticas de glicoprotenas transmembrana.

Se han identificado 10 TLRs humanosConstan de un dominio EXTRACELULAR y uno INTRACELULAR (citoplasmtico). Extracelular: rico en repeticiones de leucina, llamado LRR , encargado en el reconocimiento de agonistas. Intracelular: homologo al receptor de la IL-1, llamado TIR, responsable de la transduccin de seales intracelulares.

Receptores tipo Toll:

Gatillan la fase efectiva de la respuesta inmune a travs de la activacin de NF-Kb. Secrecin de citoquinas pro-inflamatorias. Quimioquinas que reclutan y activan clulas inflamatorias de la sangre. Produccin de pptidos antimicrobianos. Maduracin de clulas dendrticas presentadora de antgeno. TLR humanos se expresan en la pulpa dental sana, aunque en diferentes niveles. El TLR2 del Odontoblasto puede ser activado por el LTA. Esta activacin increment el gen TLR2 e indujo la transcripcin nuclear del NF-Kb. Una sobre regulacin del TLR2 fue observada en vivo en Odontoblastos de pulpa en molares de ratn, siendo inflamada con una bacteria gram + intradentinal (LTA).

Inmunolocalizacin de TLR2 en OB estimulado con cido Lipoteicoico (LTA).

Control negativo con isotipo IgG de ratn. (A) No se detect tincin en las clulas no estimuladas. (B) Se observ una acumulacin de TLR2 en la superficie celular de los Odontoblastos que se estimularon con LTA (flecha).

Inmunolocalizacin de NF-kB en odontoblastos estimulado con LTA.

(A) No se observ tincin en las clulas incubadas con el control de isotipo IgG. (B) Una dbil tincin (marrn claro) se detecto en el citoplasma de los odontoblastos no estimulados se incubaron con el anticuerpo anti-NF-kB. (C) Se observ una fuerte tincin (marrn oscuro) en el ncleo de las clulas estimuladas que se incubaron con el anticuerpo anti-NF-kB.

Inmunolocalizacin de TLR2 en la pulpa dental de terceros molares cariados humanos.

(A) La capa de odontoblastos bajo la caries estaba manchada (color marrn), mientras que en la dentina sana no lo estaba. (B) Algunas clulas dentro y alrededor de la capa de odontoblastos estaba ms fuertemente teida que la capa odontoblastica misma, sugiriendo que el TLR2 estaba tambin sobre regulado en algunas clulas de la pulpa que no son odontoblastos. (flechas y puntas de flecha blancas, respectivamente).

(C) Los ncleos de las clulas de la pulpa dental no estaba manchado, excepto algunas aisladas cerca de los vasos sanguneos (flecha negro). (D) No fue visible la tincin de odontoblastos bajo dentina sana.

 Las bacterias Gram (+) son el principal microorganismo presente en las lesiones de caries superficiales y moderadas de la dentina.

En la medida en que infeccin de Caries progresa a ocurre una modificacin en la microflora, caracterizada por un incremento en las Gram (-) anaerbicas principalmente.

LPS es el componente de la pared celular Gram negativa .Es generalmente reconocido por el TLR4.

En vivo, la expresin TLR4 fue detectada en la pulpa y en la capa de Odontoblastos de un diente sano.

Una de las principales consecuencias de la activacin de TLR es la regulacin al alza de los efectores moleculares de la inmunidad innata entre ellos las defensinas . Las beta-defensinas en pulpa dental sana solo se encontr expresada dbilmente en los odontoblastos la tipo 1 no as la tipo 2 y 3. en cambio en los cultivo se encontr expresada la tipo 2 de no as la tipo 1 y 3. Las citoquinas pro inflamatorias tnf-alfa y interleuquinas casi no se expresan en dentina sana pero aumenta en dentinas inflamadas o invitro. Quimiocinas inflamatorias son expresadas por leucocitos circulantes y otras clulas slo despus de la activacin.

Quimiocinas homeostticas son continuamente expresadas en los tejidos tales como la piel, mucosas intestinales y los pulmones

Las quimiocinas
17 genes de quimiocinas se expresan en la pulpa dental, en orden decreciente de nivel de expresin, CXCL12, CCL2, CXCL9, CX3CL1, CCL8, CXCL10, CCL16, CCL5, CXCL2, CCl4, CXCL11, CCL3, CXCL3, CXCL1, CXCL5, CCL19 y CXCL8. Genes receptores de quimiocinas CXCR4, CCR1, CCRL1, CXCR6, CCR5, CX3CR1, CCRL2, CCR10 y CXCR3 muy baja expresin de CXCL8 confirmaron que nuestras muestras de pulpa eran no inflamadas el tejido de la pulpa se detectaron ciertas citoquinas junto con uno de sus receptores. Estos incluyen CXCL12 (que se une al CXCR4), CCL3, CCL5 y CCL16 (CCR1), CCL3, CCL4, CCL5 y CCL8 (CCR5), CX3CL1 (CX3CR1), y CXCL9, CXCL10 y CXCL11 (CXCR3).

Comparacin de la expresin de quimiocinas en odontoblastos generados in vitro

Se obtuvo que: Los odontoblastos no estimulados expresan los genes que codifican para CCL2, CXCL12 y CXCL14, que son tres quimiocinas conocidas para conducir el reclutamiento de las DC inmaduras.
Produjeron CCL26, un antagonista natural para CCR1, CCR2 y CCR5 que se expresa generalmente por los monocitos y DC

 Se encontraron odontoblastos pre-enviados bajo las lesiones de caries de dentina activos para expresar la protena CCL2. esta atrae a las CD inmaduras, monocitos, clulas T activadas, clulas nk y los basfilos a travs de CCR1 y CCR2 CXCL2 y CXCL10 fueron reguladas por LTA. A travs de la regulacin positiva de ambas quimiocinas. CXCL1, una quimiocina cerca de CXCL2 cuya funcin principal es tambin para atraer a los neutrfilos. El gen CXCL1 fue regulado en odontoblastos estimulados con LTA, poli (I: C) y LPS. pero fue regulado slo por poli (I: C) en fibroblastos de. Esto sugiere que los odontoblastos y fibroblastos de pulpa pueden diferir en sus respuestas inmunes

 Las quimiocinas expresadas por los odontoblastos in vitro, CCL2, CXCL2 y CXCL12 son pro-angiognicos, mientras que CXCL4, CXCL1 y CXCL14 son angioestticos. In vivo, la produccin de quimiocinas angiostticas en la pulpa dental sana podra estar involucrado en el mantenimiento de los vasos sanguneos de la capa de odontoblastos.

Migracin clulas dendrticas a la capa de Odontoblastos

Cuando dentina esta siendo atacada por caries, las clulas dendrticas son reclutadas y se acumulan junto a los odontoblastos para captar a los antgenos que difunden por los tbulos dentinarios afectados.

 Dos caminos principales de clulas dendrticas: Cel. Dendrtica plasmocitoide. Cel. Dendrtica mieloide:
- Coexpresan HLA-DR, Factor XIIIa y CD68.
- Localizadas principalmente en la regin subodontoblstica, perivascular y a lo largo de las Clulas Nerviosas.

 Clulas maduras CD68 negativas / DC-LAMP positivas localizadas cerca del piso de la cmara pulpar y zona central de las races.
Migran a los linfonodos en respuesta a CCL19. CXCR4, CCR1 y CCR5 se expresan en clulas dendrticas inmaduras.

CXCL12 quimioquina mas fuertemente expresada en la pulpa

 Odontoblastos estimulados in vitro con LTA aumentan la migracin de clulas dendrticas inmaduras.
Estudio en ratones con pulpitis: clulas dendrticas de la pulpa activadas por bacterias Gram (+) migraron a los linfonodos despus de 24 horas.
Clulas dendrticas de la pulpa son capaces de iniciar respuesta inmune adaptativa contra microbios orales o subproductos

Dentinognesis y la respuesta inmune

Predentina es depositada por odontoblastos durante toda la vida del diente, pero de reduce durante lesiones de caries en la dentina. Colgeno tipo I es regulado por LTA NF-kB disminuye expresin de A1 (I) y a2 (L) en los genes de colgeno.

Supresin casi completa en la expresin del gen de la dentina (DSPP) rol en mineralizacin de la predentina.

 Mecanismos reguladores coordinados son activados para disminuir sntesis de matriz de la predentina y su mineralizacin durante la fase inicial de la respuesta inmune. Disminucin del gen TGF-B1 en odontoblastos estimulados con LTA respuesta inmune innata efectiva y respuesta inmune adaptativa protectora en la pulpa dental infectada.

Perspectivas Teraputicas
El depsito de dentina es considerado como un elemento clave para la vitalidad y salud del tejido pulpar. El Hidrxido de Calcio y un agregado de Trixido mineral induce a la formacin de dentina -> carente de rigidez. La TGF-B1, BMP-2, -4 y -7, Sialoproteina del hueso, pptidos de amelogenina -> testeadas in vitro e in vivo para estimular la formacin de dentina despus de la desmineralizacin de sta. Inducen Dentinognesis pero en un contexto sin inflamacin.

Esto sugiere fuertemente que el control de la inflamacin y la respuesta inmune es un prerrequisito para recuperar la salud pulpar y que debe ser temprano.

 Estrategias de Combate frente a Patologas:

1. Bloquear al patgeno mediante los receptores tipo Toll 2 (y 4): Existe un TLR2 en el plasma sanguneo, leche materna y saliva secretada por la G. Partida, a los que se pueden capturar y neutralizar sus ligandos mediante una competencia inhibitoria y as prevenir la excesiva inflamacin.
Ej: La TAK-242 inhibe de este modo a la produccin de citoquina de la unin del LPS con el TLR4, probablemente bloqueando los adaptadores MD-2 y/o TRAM del TLR.

2.

Inhibir la sealizacin intracelular y la Transduccin: Aumenta y potencia la efectividad en los Agentes teraputicos.

Ej: Bloquear seales de transduccin intra citoplasmtica por medio de molculas que se enlazan a los TIR o por la eliminacin de protenas claves involucradas en la transduccin por parte de estas molculas que ubiquinizan y degradan.

3. Inactivacin de Quimiocinas liberadas por el Odontoblasto: Mediante el uso de anticuerpos neutralizadores en s mismo o en sus receptores de Quimiocinas con el fin de limitar y controlar las quimiocinas para bajar la inflamacin de los tejidos -> es efectivo y apropiado el tratamiento teraputico. Ej: En el contexto Pulpar hay que identificar los receptores de Quimiocinas ms eficientes en traer CD inmaduras al Odontoblasto.

Conclusin
La informacin recopilada en este estudio sugiere que: 1. Los odontoblastos tanto como las primeras clulas pulpares atacadas por bacterias intradentinarias, son los potenciales iniciadores de la respuesta inmune e inflamatoria en la pulpa dental. 2. Son por consecuencia objetivos preferenciales para nuevas estrategias teraputicas diseadas para prevenir el desarrollo de daos por inflamaciones irreversibles en la pulpa, con fin de mantenerla sana y con vitalidad.