RNA de interferncia

Histrico
Dc .80 RNA com propriedades catalticas (ribozimas) Dc 90 Plantas transgnicas que deveriam expressar pigmentos apresentaram flores brancas Ausncia da sntese do pigmento houve o inesperado silenciamento do transgene e do gene endgeno das clulas dessas flores

93 C. elegans

 Descobriram molculas de RNAdf Andrew Z. Fire e Craig C. Mello 2006 Nobel

O que RNAi?

Fita que se pareia ao mRNA

Ligao impede a traduo

Inibio da sntese proteica

 RNAdf

Silenciar expresso de genes

Pela capacidade do RNAdf de interferir na expresso

gentica, comeou a ser chamado de RNAi

Fita de RNA complementar ao mRNA

No complementar ao mRNA, pode ser +(53) ou (35)

Tipos de RNAi
miRNA

shRNA

siRNA

miRNA

- Transcrio por RNA Polimerase II ou III; - Pri-miRNA (vrias nt), ao Drosha (RNase endonuclease III), cofator DGCR8/Pasha; - Pre-miRNA (60 a 80 nt), auxlio da Exportin 5, cofator Ram-GTP;

-Pre-miRNA, sofre ao da Dicer (RNase III); - MicroRNA (18-26 nt), associao ao Complexo de Induo de Silenciamento do Rna (RISC) / Argonauta.

Localizao genmica

Caractersticas
Cada microRNA age em ,aproximadamente, 300

mRNA diferentes. Cada mRNA pode sofrer interveno de diferentes microRNAs. Grande parte dos miRNA so encontrados em genes parlogos 50% dos genes so encontrados prximos, sendo transcritos por nica unidade de transcrio.

 Em casos excepcionais, podem ocorrer por

promotores isolados. Cerca de 20-30% dos genes codificantes podem ser alvo de microRNA;
So regies altamente conservadas; Podem ser exportados para outras clulas

Recentemente tem sido demonstrada a existncia de uma ligao entre RNAi e corpos GW (GWB), os quais parecem ser os stios envolvidos na represso da traduo de mRNAs por miRNAs. Os GWB (ou P bodies) so estruturas citoplasmticas recentemente descritas que esto envolvidas no controle da expresso gnica ps-transcricional. Esse controle regula o turnover de mRNA bem como a remoo de RNAs aberrantes e com mutaes nonsense. A formao dos GWB parece depender de protenas especficas e RNA, em particular, miRNAs.

siRNA e shRNA

 de RNA fita dupla de aproximadamente 22 nucleotdeos Incapazes de codificar protenas;

Funo na regulao ps-transcricional;

Degradao ou bloqueio na traduo de mRNAs

mensageiros.

Extremidade 3 com 2 nucleotdeos livres

siRNA assimtrico

Caractersticas
siRNA so produzidos a partir de dsRNA; dsRNA provm da sntese por vrus ou sequncias

repetitivas introduzidas;
Podem funcionar como:
Defesa antiviral Silenciamento de mRNA

Diferenas entre siRNA e miRNA

Molcula endgena (miRNA) Molcula exgena (siRNA)

 uso de molculas de RNAdf exgenas como

ferramenta pode reduzir a expresso de genes especficos (efeito conhecido como knock-down)
sequncia da molcula de RNAdf definida pelo

pesquisador para interferir no seu gene alvo preferido

 Estratgia tambm possvel in vivo

Desenvolvimento de frmacos

 siRNA introduzido diretamente em cultura

visando a degradao de um gene especfico tamanho da duplex que deve ter de 19 a 30 pares de base Maiores que isso resposta imune
Introduo na clulas formao de complexos dessas

duplexes com polmeros qumicos ou lipdeos, normalmente catinicos

shRNA

siRNA

RNA in vivo
Estudos em camundongos e animais maiores

(macacos)
silenciamento atravs de RNA tem sido investigado

tendo como alvo vrios tipos de doenas, como cncer, doenas respiratrias, inflamao, doenas neurolgicas, autoimunes e no combate a processos infecciosos

 Teste clnicos em Fase I Sem efeito txico Em vrios casos produziu o efeito desejado

V Diretriz de dislipidemias

RNAi em cncer
Cerca de 50% dos genes miRNA localizam- se em

regies genmicas frgeis ou associadas ao cncer, atuando em oncogenes ou genes supressores tumoral.
Cada tecido canceroso apresenta expresso

alterada de miRNAs podendo-se utilizar isso como uma assinatura especfica de cada cncer.

miRNA let-7 miR-15a, miR-16 mir-17, mir-18, mir-19a, mir-92-1

Alvo de ao Regula negativamente oncogene RAS Regula negativamente oncogene BCLl-2 Desconhecido

Funo Inibe o crescimento e diferenciao de clulas pulmonares tumoral Inibe a apoptose Tumorognese

miR-17-92 cluster
miR-21 miR- 372, miR-373

Regula negativamente E2F1 e Rb

Regula negativamente PTEN Regula negativamente LATS2

Inibe a proliferao celular

Ativa a apoptose Ativa proliferao celular