Se conoce como transgnesis al proceso de

transferir genes a un organismo.

Transgnico: es una planta o un animal que en
cuyas clulas se ha introducido un fragmento de
ADN exgeno o sea un ADN que no se encuentra
normalmente en ese organismo.


Podemos estudiar qu efecto tiene este gen
sobre todo el organismo.
Es muy importante porque muchas
enfermedades no afectan solamente a un tipo de
clulas sino que afectan a las interacciones
entre muchos tipos diferentes de clulas.
Este tipo de tecnologa permite modelar
enfermedades humanas en otras especies donde
se puede estudiar la biologa y posibles terapias
para la enfermedad.


La produccin de animales transgnicos es cada vez
ms cotidiana existiendo ya animales transgnicos
como:
ratn rata conejo cerdo vaca cabra
oveja.





La tcnica se realiza fundamentalmente por
microinyeccin y son de la siguiente forma:



Se aslan un nmero grande de vulos fertilizados
los cuales se consigue sometiendo a las hembras a
un tratamiento hormonal provocndole una
superovulacin.
La fertilizacin se puede hacer in vitro o in vivo.


Los cigotos obtenidos se manipulan uno a uno y con una
micropipeta a modo de aguja se introduce una solucin que
contiene ADN.


Estos vulos son reimplantados en hembras que actuarn
como nodrizas permitiendo la gestacin hasta su trmino.

Por ltimo despus del destete los animales son sometidos a
chequeos

Una estrategia ms poderosa para la transgnesis
implica la introduccin de ADN extrao en clulas
embrionarias Totipotentes o clulas embrionarias
madres.

Estas clulas son tomadas del interior de la blstula
en desarrollo se pasan a un medio donde se tratan
con distintos productos para conseguir que las
clulas no se diferencien haciendo que se
mantengan en su estado embrionario.

El ADN extrao se introduce en las clulas mediante
diversas tcnicas luego las clulas transfectadas son
reintroducidas en una blstula y es reimplantada en
una hembra.

Con esta tcnica los neonatos son quimeras o sea
tienen clulas de origen distinto parte con el material
gentico original y parte transfectadas mediante este
cruce se consiguen animales transgnicos.


La transgnesis en plantas se da mediante la introduccin de un
transgen que es parte de un constructo gnico denominado vector.

Este proceso ocurre mediante la transferencia de manera directa o
indirecta de ADN.

Esta introduccin se da por:

microinyeccin, electroporacin, polietilenglicol, wiskers o agujas
plsticas y por bombardeo de micropartculas.

La Mejora de Plantas se remonta a los tiempos ms
antiguos mediante el procesos de seleccin.

Los orgenes de la Gentica estn ntimamente
relacionados con la investigacin de los hibridistas
que son experimentales de plantas.

A partir del redescubrimiento de las leyes de Mendel
la aplicacin de los conocimientos genticos impuls
el desarrollo de la Mejora.

La Mejora Gentica de Plantas tiene como fin obtener
los genotipos que produzcan los fenotipos que mejor
se adapten a las necesidades del hombre.

Beneficios:

Mejora de productividad aumentando la capacidad
productiva potencial.

Mejora de resistencia obteniendo genotipos resistentes a
plagas, enfermedades y condiciones ambientales
adversas.

Mejora de caractersticas agronmicas obteniendo
nuevos genotipos que se adaptan mejor a las exigencias y
aplicacin de la agricultura.

Mejora de calidad atendiendo al valor nutritivo de los
productos vegetales obtenidos.

Domesticar nuevas especies transformando a
especies silvestres en cultivadas con utilidad y
rentabilidad para el hombre.


Hace ya unos veinte aos se logr obtener los
primeros ratones transgnicos
mediante transferencia gnica por inyeccin directa
de ADN extrao en un cigoto obtenido por
fecundacin in vitro llamado transgnesis.

El paso siguiente consisti en probar que tambin se
podan obtener ratones transgnicos que
incorporaran en su genoma un gen (transgn) de
otra especie.

Como era de esperar a los ratones transgnicos
siguieron los conejos, ovejas y cerdos transgnicos a
los que se les haba introducido por microinyeccin
ADN del gen humano que codifica para la hormona
de crecimiento en un intento de aumentar el tamao
de estos animales.
Sin embargo este avance no tuvo aplicacin
zootcnica porque la presencia del transgn modifica
la fisiologa del animal producindole efectos
colaterales

Especies en las que se han obtenido animales
transgnicos:


ANIMALES TRANSGNICOS
MAMFEROS AVES PECES
Ratn
Rata
Conejo
Vacuno
Cerdo
Oveja
Cabra
Pollo
Codorniz
Salmn
Trucha
Tilapia
Carpa
Pez gato
Medaka
Dorada

Microinyeccin de ADN en ncleo de ovocito.

Microinyeccin de ADN en citoplasma de cigoto (vulo fecundado)

Electroporacin de cigoto.

Transfeccin de clulas totipotentes.

Co-inyeccin en ovocitos de una mezcla de cabezas de
espermatozoides y ADN exgeno.

Vectores virales.

Transfeccin de gametos.

Transferencia de ncleos transfectados (clonacin)


Integracin mltiple (en tndem o no)

Lugar de integracin indeterminado (efecto de
posicin)

Metilacin y falta de expresin
Mosaicismo (germinal y somtico)

Expresin especfica/ectpica
Expresin variable

Expresin variable dentro de lneas (variegacin)
OBJETIVOS: APLICACIONES
La potencialidad de la biotecnologa
estriba en producir cantidades ilimitadas
de:

Substancias de las que nunca se haba dispuesto
con anterioridad.
Productos que se obtenan en pequeas
cantidades.
Abaratamiento de los costes de produccin.
Mayor seguridad en los productos obtenidos.
Nuevas materias primas ms abundantes y
menos caras.

La Biotecnologa ha incorporado la transgnesis
animal con los fines que se indican a
continuacin:

Mejora de caracteres productivos.
Resistencia a enfermedades.
Animales transgnicos como biorreactores
para la sntesis de protenas de alto valor
(protenas teraputicas)
Las "granjas farmacuticas" o
"granjas moleculares"
Donacin de rganos: Xenotransplantes.


La Biotecnologa ha aplicado estas tcnicas
experimentales de transgnesis y ya hoy se estn
estableciendo las primeras granjas farmacuticas en
las que se cran ovejas, cabras, vacas o cerdos
transgnicos que producen en su leche protenas
teraputicas humanas.




Pues bien con ayuda de la transgnesis se han obtenido
por diversos procedimientos ovejas transgnicas
portadoras del gen humano que codifica la a -1 para que
se exprese exclusivamente en las clulas de la glndula
mamaria para pacientes de enfisema hereditario que
necesitan ingerir grandes dosis de a -1-antitripsina para
suplir su deficiencia en plasma.

El mismo grupo de investigacin ha obtenido tambin
ovejas transgnicas portadoras del gen humano que
codifica el factor IX de coagulacin de la sangre.

Primero mediante la tcnica de microinyeccin en el
proncleo del cigoto y ms tarde mediante la tcnica de
clonacin


Las cabras tambin pueden constituir unos buenos
biorreactores
de protenas humanas puesto que producen 4 litros/da
de leche y sus perodos de gestacin y de desarrollo
son cortos
(5 y 8 meses, respectivamente)

Con la transgnesis se obtuvo cabras portadoras del
gen humano que codifica el activador tisular de
plasmingeno que al estar unido al promotor del gen
de la b -casena de la cabra produca hasta 2-3 mg/ml
de plasminogeno en la leche del animal.

La protena poda ser aislada con una pureza del
98%

Cabras transgnicas portadoras
de un gen humano. La tcnica
para producir un animal
transgnico consta de varios
pasos:

a) se produce un transgn.

b) se realiza una fertilizacin in
vitro.

c) se inyecta el gen transgnico
en el cigoto.

d) se implanta el embrin en una
madre sustituta.

De esta manera se han
producido conejos, cabras,
ovejas y chanchos transgnicos.

La gran produccin lechera de las vacas son de 10.000 litros/ao y 35 g
protena/litro de leche esto las convierte en poderosos biorreactores de
protenas humanas.

Con la transgnesis se obtuvieron vacas portadoras del gen humano
de la lactoferrina que se sintetizaba en la leche del animal por estar
unido al promotor de la casena bovina.
Se inyectaron 1.154 pro ncleos de otros tantos cigotos obtenidos por
fecundacin in vitro, de los cuales sobrevivieron 981.
A los 9 das transfirieron 129 embriones a vacas estimuladas
hormonalmente quedando solo 21 de ellas preadas y slo 16 llevaron
a trmino la gestacin.
Se obtuvo un macho y una hembra (que era un mosaico).
El macho dio positivo para la presencia del gen humano en todos los
tejidos analizados (placenta, oreja y sangre) estimndose que era
portador de 5 a 10 copias del gen humano.

En el caso de las vacas otros objetivos pueden ser la aplicacin de la
tcnica conocida como "modelo de la glndula mamaria" para reducir la
lactosa o fabricar "in vivo" leche maternizada suprimiendo mediante la
tcnica de "knockout" del gen de la b -lactoglobulina de la leche de vaca
para imitar a la leche humana que no la tiene.


Desde el primer trasplante de corazn la tcnica
de trasplante de rganos se ha generalizado en
la prctica mdica habiendo alcanzado altsimos
niveles de perfeccin.

Sin embargo uno de los retos pendientes es el de
la oferta y la demanda: desgraciadamente
muchos pacientes mueren antes de tener acceso
al trasplante deseado.

Por ello la posibilidad de recurrir a especies
animales como donantes de rganos se plante
hace ya muchos aos que se realizado
xenotrasplantes de rin, corazn, hgado y
mdula sea procedentes mayoritariamente de
chimpanc y mandril con un resultado negativo
en todos los casos

TRASPLANTES DE RGANOS DE ANIMALES A HUMANOS
Donante Organo Supervivencia Nmero de
trasplantes
Chimpanc Rin Un paciente, nueve meses 12
Mono mico Rin 10 das 1
Mandril Rin 4 das y medio 1
Mandril Rin Un paciente, dos meses 6
Chimpanc Corazn Extirpado 1
Chimpanc Hgado Un paciente, 14 das 3
Mono Corazn Fracas (sin datos) 1
Mandril Corazn Rechazo agudo 1
Chimpanc Corazn 4 das 1
Mandril Corazn 3 semanas 1
Mandril Hgado 70 das 1
Cerdo Hgado 34 horas 1
Mandril Hgado 26 das 1
Mandril Mdula sea El paciente vive, pero el trasplante fracas 1
La utilizacin de rganos procedentes de monos tena la lgica de
su proximidad evolutiva con la especie humana, pero la diferencia
de tamaos de los rganos entre las especies supona un serio
inconveniente.

Por eso se pens en el cerdo como posible donante.

Respecto a la utilizacin de cerdos transgnicos como reservorio
de rganos para posibles trasplantes de corazn, rin o hgado a
pacientes humanos hay que ser todava muy cauto en relacin
con las expectativas creadas.

No obstante, quedan por resolver an numerosos interrogantes,
entre ellos la posibilidad de que se transmitan al hombre
infecciones virales de origen animal.

De ah la importancia que tendra la posible utilizacin de cerdos
transgnicos ante la demanda creciente de rganos y las
correspondientes listas de espera.