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MEXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES
“ZARAGOZA”
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
PRACTICA 14:
FISIOLOGIA BACTERIANA (PRUEBAS
BIOQUIMICAS)
ALUMNOS: **Castañeda Piña Juan Carlos
**Escobar Blanco Luís
**Ordóñez Piña Imelda
Importancia de la fisiología
bacteriana (Pruebas bioquímicas)
Generalidades
**La mayoría de las Rx bioquímicas metabólicas
de microorganismos es controladas por
medio de enzimas.
A B C
*Temperatura
*pH óptimo de crecimiento
*Concentración de oxigeno y CO2
*Tipo de medio de cultivo
*Tipo de esterilización
*Tipo de microorganismo
CALDO ROJO DE FENOL
OBJETIVO:
Determinar la capacidad de que un M.O.
fermente un CHO especifico y producir un
H+ o un H+ con gas.
El estudio de algunas especies como:
*Lactobacilos *Shigella Sp
*Bacillus sp *Proteus Sp
*Streptococcus sp *Klebsiella Sp
*Enterobacter *Clostridium Sp
*Sallmonella Sp
Fermentadores de glucosa: todos los
miembros de las Enterobacteriaceae.
Homolácticas Heterolácticas
Fermentación Fermentación
Ácido mixta Butilenglicolica
- Diferenciación de especies
- Diferenciación de géneros
Fundamento
La reducción de nitrato (NO3-) a nitrito
(NO2) y a nitrógeno gaseoso (N2) por lo
común se produce en condiciones de
anaerobiosis.
METODO
INOCULALAR POR
DIFUSION EL CALDO INCUBAR EL
NITRATO CON EL TUBO A 35 C
MICROORGANISMO DURANTE 24- 48
HORAS
NO
Color
Agregar 5 gotas de
rojo
Alfa- Naftilamina y 5
gotas de ácido
Agregar Fin de sulfanilico
la
zinc
prueba
Reacciones
- -
NO3 + 2e + 2H NO2 + H 2O
Caldo Nitrato
Composición:
Peptona......................5 gr
Extracto de carne......... 3 gr
Nitrato potásico........... 1 gr
Agua destilada........... 1000 ml
Disolver los ingredientes y ajustar el pH a 7
y distribuir 5 ml en cada tubo.
Microorganismos utilizados
como control
Positivo (+)
Escherichia coli
Pseudomonas aeruginosa
Negativo (-)
Acinetobacter Iwoffi
INTERPRETACION
Resultados
Fase I
Resultado positivo (+)
- Color rojo oscuro en 1-2 min
Resultado negativo
-Falta de desarrollo de color
Agar Almidón
Peptona 5g
Extracto de carne 3g
Cloruro de sodio 5g
Agar 20g
Agua destilada 1.000mL
Método
INCUBAR A 35 c
Inocular la placa DURANTE 24-
con el 48 HORAS
microorganismo
Cubrir la placa
con solución de
lugol
MICROORGANISMOS
UTILIZADOS COMO CONTROL
ANAEROBIOS ANAEROBIOS AEROBIOS AEROBIOS NEGATIVO
POSITIVO (+) NEGATIVO (-) POSITIVO (+) (-)
Bacteroides Clostridium Bacillus subtilis Escherichia coli
fragilis bifermentans
Clostridium
perfringens
Interpretación
Resultados
- Positivo (+)
Medio de color
púrpura-azul con un
área incolora.
-Negativo (-)
Medio de color
púrpura-azul en el
crecimiento.
Precauciones
Registrar los resultados inmediatamente
después de agregar el reactivo de yodo
ya que el color azul formado puede
aclararse, lo que da un resultado falso
positivo en ausencia del almidón.
Pruebas de
ROJO DE METILO –
VOGES PROSKAUER
ROJO
DE
METILO
ROJO DE METILO
OBJETIVOS
Los MR -
ACETOÍNA
[H] neutralidad /
CO2 y O2.
ROJO DE METILO
Metabolismo gral. De E. coli
2 ac. Láctico + ac. Acético +
2 EtOH + 2 CO2 + 2 H2
ACETOÍNA
ROJO DE METILO
Fórmula de Clark y Lubs a pH 6,9
Peptonas 7.0 g
Glucosa 5.0 g
(dextrosa)
Buffer fosfato 5.0 g
dipotásico
Agua destilada 1,000 mL
ROJO DE METILO
Pesar la cantidad
exacta y Δ solución
fraccionar
5 mL por tubo
rehidratar con agua
suavemente
inóculo liviano
debajo de la
superficie Esterilizar
Incubar del medio,
121º, 15 lb, 15’.
mín:
35º, 48 h
tapas fl ojas.
recom:
30º, Interpretar
3 -5 días. Agregar Resultado:
indicador +ó-
ROJO DE METILO
Microorganismos utilizados para el control de calidad
Bacteria MR +/- VP +/ -
E. coli + -
Enterobacter - +
aerogenes
ROJO DE METILO
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
MR + Cultivo suficientemente
ácido para permanecer el
color rojo (pH 4,4), en la
superficie del medio.
2
acetoína
+ CO2
VOGES - PROSKAUER
Fórmula de Clark y Lubs a pH 6,9
Peptonas 7.0 g
Glucosa 5.0 g
(dextrosa)
Buffer fosfato 5.0 g
dipotásico
Agua destilada 1,000 mL
VOGES - PROSKAUER
Pesar la cantidad
Δ solución fraccionar
exacta y
rehidratar con agua suavemente 5 mL por tubo
mín:
35º, inóculo liviano
18-24 h debajo de la Esterilizar
Incubar superficie
del medio, 121º, 15 lb, 15’.
tapas flojas.
recom:
30º,
3 -5 días. Agregar Interpretar
Reactivos Resultado:
VP +ó-
VOGES – PROSKAUER
® Reactivos VP de Barritt
α- naftol al 5%
A en EtOH
absoluto
B KOH al 40%
VOGES - PROSKAUER
® Reactivos VP de Coblentz
α- naftol al 5% en
A EtOH al 95%
Creatina al 0.3% en
KOH al 40%.
B Creatina N-metil-N-
guanilglicina;
NH:C(NH2N(CH3)C
H2COOH.
VOGES - PROSKAUER
® Reactivos VP único de O’Meara (modificado)
Creatina al 0.3%
en KOH al 40%
VOGES - PROSKAUER
®Método de utilización
KOH 40%
Acetoína + α-naftol Diacetilo + 2 H2O
o 2
condensación
Diacetilo + Núcleos de guanidina color
rosado-rojo
de la peptona
VOGES - PROSKAUER
® Microorganismos utilizados para el control de calidad
Bacteria VP +/ -
E. coli -
Enterobacter +
cloacae
VOGES - PROSKAUER
® INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
VP+
color rosado-rojo, en la
superficie del medio (acetoína
presente).
VP -
Color amarillo en la superficie
del medio; color cobrizo se
debe a los reactivos cuando
se mezclan.