PARMETROS USADOS EM HPLC

Reteno
Eficincia da coluna
Assimetria de pico
Condies de separao
Quando um componente da amostra interage
com a F.E. ocorre um atraso na sua eluio
PARMETROS USADOS EM HPLC
PARMETROS DE RETENO
Tempo de reteno (tR): Intervalo de tempo compreendido entre
o ponto de injeo e a mxima resposta do detector para o
analito correspondente
Volume de reteno (VR):
tR x vazo da F.M.
Fator de capacidade (k):
medida direta da fora de
interao da amostra e a F.E.
Tempo de eluio da F.M. (t0): tempo que a
F.M. (ou componente no retido pela F.E.
gasta para passar pela coluna
PARMETROS USADOS EM HPLC
EFICINCIA DA COLUNA
A eficincia de uma coluna cromatogrfica medida em termos de
nmero de pratos tericos (N)

Um prato terico corresponde a uma etapa de equilbrio da substncia
entre a fase estacionria e fase mvel

Quanto maior o nmero de pratos tericos maior ser a eficincia (picos
mais estreitos) na anlise
Altura do prato Terico (H):
H = L/N, onde L o comprimento
da coluna em mm.
PARMETROS USADOS EM HPLC
FATOR DE ASSIMETRIA OU FATOR DE CAUDA
Pico simtrico

T 1
Assimetria (tailing) uma das formas mais comuns de se avaliar o
alargamento dos picos (considerados Gaussianos) sendo uma medida da
disperso dos componentes da amostra no sistema cromatogrfico
algumas molculas do soluto so mais fortemente retidas na fase estacionria
do que outras, formando uma cauda no pico (tailing), enquanto caudas frontais,
ocorrem quando a reteno do soluto na fase estacionria menor do que se
esperava, ou seja, h uma preferncia das molculas do soluto pela fase mvel.
Temperatura
Composio da F.M.
Vazo
Substituio da . coluna
PARMETROS USADOS EM HPLC
FATOR DE ASSIMETRIA OU FATOR DE CAUDA
Est relacionada com o desgaste natural da coluna e/ou condies
experimentais inadequadas e pode comprometer a reprodutibilidade e a
exatido da medida da rea do pico
Como contornar:
PARMETROS USADOS EM HPLC
FATOR DE SEPARAO OU SELETIVIDADE
Capacidade de um sistema diferenciar dois compostos,
definida por , sendo uma caracterstica da coluna
cromatogrfica
A resoluo entre duas substncia a razo entre a
diferena das distncias de migrao ou os tempos de
reteno e a mdia das larguras das bandas
PARMETROS USADOS EM HPLC
RESOLUO
SEPARAES EM HPLC
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A separao baseia-se na migrao
diferencial entre a F.E. e F.M.
F.E.- permanece fixa na coluna
F.M.- Carrega a amostra
pela F.E.
Injector
Detector
Column
Solvents
Mixer
Pumps
Waste
Injector
Detector
Column
Solvents
Mixer
Pumps
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Injector
Detector
Column
Solvents
Mixer
Pumps
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time
Injector
Detector
Column
Solvents
Pumps
Mixer
Chromatogram
Start Injection
mAU
time