Importana studierii enzimelor din p.d.v.

medical
Absena ereditar a unei enzime boli grave
ex. absena fenilalanil-hidrolazei oligofrenia fenilpiruvic

deficit de glucokinaz n diabet

lipsa vitaminelor, componente ale sistemelor enzimatice boli grave:
pelagr, scorbut, beri-beri, diverse forme de anemii, etc.

determinarea activitii unor enzime din snge (ser) permite un
diagnostic precoce sau un diagnostic difereniat:

Unele substane chimice toxice i manifest aciunea interfernd cu
unele enzime
ex. organofosforicele (insecticide)

unele substane antibacteriene i manifest aciunea blocnd sistemele
enzimatice bacteriene, fr a afecta metabolismul gazdei
H
2
N COOH H
2
N S NH
2
O
O
acid p-amino-benzoic
sulfamida
Scurt istoric
Fermentarea mustului, oetirea vinului, dospirea pinii, fermentarea brnzei, etc.
sec. al.XVII-lea - van Helmont - fermentaia alcoolic - substane excitante =
fermeni
inceputul sec. al XIX-lea - descoperirea multor reacii enzimatice i izolarea
unor fermeni: amilaza, pepsina din sucul gastric, emulsina din migdalele
amare, tripsina din sucul pancreatic.
1860- Pasteur - procesele enzimatice au loc numai cu participarea celulelor
vii
1870 -Kuhner - introduce termenul de enzime = in aluat
1897- fraii Buchner - sucul extras din celulele de drojdie pot fermenta
zahrul!!!
1926 - J.B. Sumner - izoleaz ureaza din extractele de fasole Jack - proteine!!?
1930-36- Northrop - cristalizeaz enzimele pepsina, tripsina, chimotripsina.
CATALIZ I BIOCATALIZ
I n vivo
t ~ 37
o
C (ct)
p ~ 760 mm Hg (ct)
V = 0
I n vitro
t ridicate
p ridicate sau sczute
V 0
Q 0

Catalizatorii



particip la reaciile chimice, dar se regsesc neschimbai la sfritul
reaciei (calitativ i cantitativ);

intervin doar n reacii posibile termodinamic

nu modific poziia echilibrului chimic, doar grbesc atingerea strii de
echilibru

mresc viteza de reacie
H
2
O
2
H
2
O

+ O
2
Pt fin divizata v = 10
4
v
0
Catalaza v = 3 x 10
11
v
0
H
2
O

+ CO
2
H
2
CO
3
Anhidraza carbonica v = 10
7
v
0
Activitatea enzimatica "in vivo"
E + S ES E + P
Specificitatea enzimelor
A. Specificitate de aciune;
B. Specificitate de substrat: - absolut
- relativ;
C. Stereospecificitate
Specificitate de aciune
H
2
N CH
R
COOH
R C
O
COOH NH
3
+
aa-oxidaza
aa-decarbonilaza
R CH
2
NH
2
CO
2 +
R C
O
COOH
transaminaza
R' C
O
COOH
R' C
NH
2
COOH
Selectivitate
C C
COOH
HOOC
H
H
acid fumaric
+ NH
4
aspartaza
C
COOH
H
2
N
CH
2
COOH
H
-H
acid L-aspartic
HOOC
CH CH
COOH

+
FAD + FADH
2
COOH
CH
2
CH
2
COOH
succinat
dehidr ogenaza
Specificitate de substrat

Ex. relaxani musculari

CH
3
C
O
O CH
2
CH
2
N
CH
3
CH
3
CH
3
+ H
2
O
CH
3
C
O
OH CH
2
CH
2
N
CH
3
CH
3
CH
3
HO
acetilcolina
CH
2
C
O
O CH
2
CH
2
N
CH
3
CH
3
H
3
C CH
2
C
O
O CH
2
CH
2
N
CH
3
CH
3
CH
3
succinilcolina
+
Nomenclatur
Iniial: ptialina. pepsin, tripsin.

1883 - substrat + az ex. ureaz, arginaz, aspataz.

completare: substrat + tip reacie + az ex. alcool dehidrogenaza

1961 - Comisia pentru Enzimologie (Uniunea Internaional de
Biochimie) - cod format din patru cifre
- enzimele clasificate n ase clase
Enzime Tipul reaciei catalizate
Oxidoreductaze r. oxidare-reducere
Transferaze Transferul unei grupri de la
un compus la altul
Hidrolaze r. de hidroliz
Liaze Reacii de adiie sau eliminare
Izomeraze r. de izomerizare
Ligaze r. de condensare a dou
molecule mici
ex. E.C. 1.1.1.1. = alcooldehidrogenaza

1 - denumirea clasei

1 - legtura implicat CH
2
- OH

1 - acceptorul de H
+
- NAD
+

enzima: alcooldehidrogenaza

Structura enzimelor
Centrul activ
Clasificarea enzimelor n funcie de structur
enzime de natur exclusiv proteic
holoenzime - apoenzim + cofactor
- gr. prostetic
- coenzim
- ion metalic
+
apoenzima
inactiva
(proteina)
coenzima
(parte neproteica)
enzima activa
(holoenzima)
Proenzime
tripsinogen tripsina + hexapeptid
enterokinaza
(proenzima) (enzima activa)
pepsinogen pepsina + polipeptid
(proenzima)
(enzima activa)
HCl
autocataliza
Importan
- sinteza enzimelor la locul de aciune ar fi mult prea
lent;
- sintetizate n form activ, enzimele i-ar putea
manifesta activitatea imediat, la locul de sintez,
determinnd apariia unor anomalii metabolice;
- transportul lor, de la locul de sintez la locul de
aciune n form activ ar putea avea, de asemenea
consecine foarte grave.

Izoenzime
LDH - tetrameri: - tip cardiac pur H
4

- tip muscular pur M
4

- hibrizi: H
1
M
3,
, H
2
M
2
,
,
H
3
M
1


CK (CPK) - dimer - CK- BB - n creier
CK - MM - n musculatura striat
CK- MB - doar din miocard!!
,



Enzime alosterice
sunt proteine oligomere, alctuite din subuniti identice sau diferite,
de regul n numr par: doi (mai rar), patru, ase,etc.
reaciile catalizate de aceste enzime sunt endoterme i ireversibile; ele
imprim sensul unic al cilor metabolice din care fac parte;
intervin de obicei n prima etap a unui lan de reacii, asigurnd prin
aceasta controlul intensitii procesului i ireversibilitatea lui;
fiecare monomer posed un centru activ, o molecul de enzim poate
lega concomitent mai multe molecule de substrat ;
fixarea substratului pe una din subuniti influeneaz legarea lui pe
celelalte, exist deci fenomenul de cooperativitate;
pe lng centrii activi, monomerii prezint i centri alosterici, de care
se vor lega efectorii alosterici (compui cu mas molecular mic,
fr analogie cu substratul, care pot activa reaciile enzimatice
(efectori pozitivi) sau le pot inhiba (efectori negativi)). Efectorii
alosterici sunt, n general, prezeni n locul de aciune al enzimelor,
variind doar concentraia lor;
enzimele alosterice sunt inhibate de produsul final de reacie printr-un
proces numit retroinhibiie sau inhibiie prin feed-back.

Distribuia intracelular a enzimelor. Importan clinic
Enzima Provenien Modificri patologice Observaii
Aspartat-
aminotransferaza
(AST, ASAT)
Ficat, miocard,
muchi, mici cantiti
n plmni, rinichi,
pancreas, eritrocite
Creteri marcate: infarct
miocardic, hepatit acut, leziuni
toxice ale ficatului
Creteri moderate: hepatite
cronice, mononucleoz
infecioas, colici biliare
n ficat: 60% n
citosol, 40% n
mitocondrii
Alanin-
aminotransferaza
(ALT, ALAT)
Citosolul
hepatocitelor, mici
cantiti n rinichi,
pancreas, miocard,
muchi
Creteri marcate: hepatit acut
i leziuni toxice ale ficatului
Creteri moderate: hepatite
cronice, mononucleoz
infecioas, colici biliare
Localizat mai ales
n hepatocitele de la
periferia lobului
hepatic
Lactat
dehidrogenaza
(LDH)
Musculatur, ficat,
miocard, rinichi,
eritrocite
Creteri marcate: infarct
miocardic, leziuni toxice ale
ficatului, anemie megaloblastic,
cancer testicular
Creteri moderate: boli
musculare, hemoliz, limfoame
maligne,sindrom mielo-
proliferativ.
SE disting cinci
izoenzime:LDH
1
,
LDH
2
cresc n
infarct miocardic i
anemie
megaloblastic
LDH
4
, LDH
5
cresc
n boli musculare i
leziuni acute ale
ficatului.
Creatinkinaza
(CK, CPK)
Musculatur, miocard,
creier
Creteri marcate: infarct
miocardic, distrofie muscular
progresiv, dermatomiozite,
rhabdomioliz.
Creteri moderate: injecii
intramusculare cu diazepam,
tetracicline; hipotiroidism.
S-au evideniat trei
izoenzime: dimerii
CK-MM muscular)
CK.-MB (miocard),
CK-BB (creier)
Glutamat-
dehidrogenaza
Ficat, mici cantiti n
rinichi, plmni i
miocard
Creteri n leziuni severe
(necroze) ale hepatocitelor.
Enzim
mitocondrial
(unilocular)
- amilaza Glande salivare,
pancreas
Creteri importante: pancreatita
acut
Creteri moderate: parotidit,
ulcer perforat, insuficien renal,
opiacee, colici biliare i
macroamilazemie.
s-au evideniat
izoenzime
pancreatice i
salivare. Amilaza se
elimin prin urin.
Fosfataza alcalin
(AlP)
Ficat, oase, duoden,
rinichi
Creteri: colestaz, boli osoase
asociate cu reacie osteoblastic
Scderi: hipofosfatazie genetic,
mixedem, acondroplazie.
Se disting izoenime
osoase, hepatice i
intestinale.
Fosfataza acid
(AcP)
Prostat, eritrocite,
plcue, rinichi i
ficat.
Creteri: carcinom de prostat cu
depirea capsulei; uneori n
carcinoame mamare cu metastaze
osoase
Enzima este
instabil. Izoenzima
prostatic este
tartrat-inhibabil.
-glutamil-
transferaza (GT,
GGT)
Rinichi, pancreas,
ficat
Creteri importante: colestaz,
alcoolism, tumori hepatice
Creteri moderate: hepatite
cronice, pancreatite, tratamente
ndelungate cu barbiturice
Enzim inductibil
Colinesteraza
(CHE)
Secretat activ de
ctre hepatocite
Scderi importante: ciroz
hepatic, intoxicaii cu
organofosforice
Scderi moderate: denutriie,
hipotiroidism, anemii severe,
reacie de faz acut.
Creteri: sindrom nefrotic,
obezitate android, diabet de tip2.
s-au descris mutaii
care afecteaz
activitatea CHE i
mai ales deficit de
hidroliz a
succinilcolinei.
Influena concentraiei substratului
V
S
V
max
V
max
2
K
M
Influena concentraiei
enzimei
V
E
V = k
E
Influena temperaturii
V
T
Influena pH-ului
V
pH