Es el examen que utilizando procesos diversos en el laboratorio, est orientado a la bsqueda del microorganismo patgeno etiolgico de una infeccin que sustenta y confirma el diagnstico de un proceso infeccioso en todo material biolgico representativo de esta infeccin DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO Ningn proceso microbiolgico en el laboratorio o tcnica molecular o tecnologa de punta, ser aprovechada realmente sin una adecuada seleccin, obtencin y transporte de las muestras para el estudio correspondiente. CONCEPTOS
PLEURA MENINGES PERICARDIO PERITONEO UTERO SISTEMA CIRCULATORIO CONTAMINACION
Presencia de microorganismos en ubicacin no correspondiente inclusive los que en otras circunstancias podran corresponder a colonizacin saprofita GENERALIDADES
LUGAR ANATOMICO, muestra significativa o representativa
TECNICAS Y PROCEDIMIENTOS, apropiados que consigan contaminacin nula o mnima
CONTENEDORES, adecuados que permitan supervivencia de microorganismos, eviten derrames, contaminacin y bioseguridad (estriles, medios de transporte).
GENERALIDADES
VOLUMEN, adecuado y suficiente
TRANSPORTE, inmediato
TEMPERATURA, adecuada al ambiente
PREVIA TERAPIA ANTIBIOTICA
GENERALIDADES
IDENTIFICACION, correcta de la muestra
SOLICITUD DEL EXAMEN, identificacin correcta de los datos del paciente, tipo de muestra, examen que se solicita, mtodo de obtencin de la muestra
INFECCIONES PATOGENOS INFECCION COMUNITARIA INFECCION INTRAHOSPITALARIA INFECCIONES INFECCION COMUNITARIA INFECCION INTRAHOSPITALARIA Infeccin Urinaria Infeccin de las Vas Respiratorias Superiores Neumonas Enfermedad Diarreica Aguda Infecciones de piel y tejidos blandos
GRAM Mtodo de coloracin bacteriolgica con mayor valor y utilidad entre los empleados en el laboratorio de microbiologa: - Para el mdico elegir la terapia antimicrobiana emprica - Para el laboratorio valora la calidad de la muestra y orienta el estudio cultural de la misma
LECTURA E INTERPRETACION DEL GRAM
1. Clulas epiteliales 2. Clulas blancas sanguneas o Leucocitos 3. Microorganismos en coloracin y morfologa 4. Presencia de bacterias intracelulares 5. Opcional en la descripcin de los grmenes sugerir el posible gnero y especie segn el caso LECTURA E INTERPRETACION DEL GRAM Caso Clnico 1 Paciente mujer 30 aos, que recibe informacin preliminar de su urocultivo, es entregada a su mdico: -Clulas epiteliales escasas -Leucocitos, abundantes -Presencia de Bacilos gram negativos 1. Cmo interpreta el mdico el resultado? 2. Qu microorganismo sospecha como agente etiolgico de infeccin con este resultado? 1. Interpretacin
En el resultado de Gram se ve que la presencia de leucocitos reafirma la sospecha de un proceso infeccioso y se observan bacilos gram negativos 2. Sospecha de agente etiolgico
En el alcance de la morfologa, la coloracin y conociendo el perfil microbiolgico de la infeccin urinaria podemos sospechar en la presencia de Escherichia coli, informacin til para iniciar el tratamiento antibitico emprico INFECCION URINARIA INFECCION URINARIA - ITU
Es la invasin, multiplicacin y colonizacin del parnquima renal y/o sus vas de excrecin, por grmenes. Puede presentarse en cualquier edad o etapa de la vida y en ambos sexos.
FACTORES DE RIESGO ITU 1. Edad 2. Embarazo 3. Actividad Sexual 4. Patologa asociada: Obstruccin, Disfuncin neurgena, reflujo,gentico 5. Procedencia Hospitalaria 6. Instrumentacin urolgica previa 7. Episodios anteriores UROCULTIVO
Estudio microbiolgico que investiga la presencia de bacterias en orina, para identificar el gnero, especie y sensibilidad bacteriana
Es un procedimiento orientado al estudio cuantitativo para el diagnstico de infeccin del tracto urinario.
UROCULTIVO
Basado en la presencia de un nmero significativo de bacterias generalmente 100.000 bacterias /ml
Existe flora normal en: Uretra anterior - Zona prepucial - Regin vulvovaginal
Usualmente se elimina en los primeros 10 a 15 ml de orina emitida espontneamente.
TIPOS DE MUESTRAS DE ORINA PARA UROCULTIVO
Por Chorro Medio espontneo
Por Cateterismo urinario o Sondaje vesical
Por Sondaje vesical permanente
Por bolsa colectora
Por Puncin Suprapbica ENVASE ESTERIL Caso Clnico 2
Mujer 30 aos con disuria, polaquiuria, tenesmo vesical, adicionalmente refiere fluido vaginal.
1. Qu exmenes indica? 2. Cmo explica la obtencin de la muestra de orina? 1.EXAMENES DE ORINA QUE INDICA 1. ORINA SIMPLE RESULTADO INMEDIATO 2. UROCULTIVO NEGATIVO RESULTADO EN 24 HORAS POSITIVO RESULTADO EN 48 HORAS 1. EXAMENES DE ORINA QUE INDICA EXAMEN DE ORINA SIMPLE O EXAMEN DE ORINA COMPLETO Preferencia 1 orina de la maana UROCULTIVO A cualquier hora mnimo 2 a 4 horas de retencin
AISLAMIENTO MICROORGANISM O GENERO Y ESPECIE RECUENTO DE COLONIAS ANTIBIOGRAMA O PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD 2. OBTENCION DE ORINA CHORRO MEDIO ESPONTANEO
Higiene de los genitales externos (principalmente en mujeres), retiro del prepucio (hombres) Descartar la orina en el primer chorro (uretra) Colectar aprox 40 ml del chorro medio Utilizar frasco estril Transportar al laboratorio en mximo 2 horas UROCULTIVOS
FALSOS POSITIVOS
Contaminacin con secrecin vulvovaginal Orina no refrigerada Contaminacin de los antispticos utilizados Errores de laboratorio UROCULTIVOS
FALSOS NEGATIVOS
Tratamiento antibitico previo Arrastre de antispticos en la higiene Obstruccin uretral completa Orinas con pH muy bajo <5 o muy alto>8 Baja densidad urinaria (1003) Microorganismos inusuales que requieren medios especiales Caso Clnico 3 Paciente de 80 aos con sonda foley permanente febril, en un resultado de Urocultivo se informa: - Gram: Ausencia de leucocitos, bacilos gram negativos y cocos gram positivos presentes. - Cultivo: Se aislan Pseudomonas sp 50,000 UFC y Estafilococo saprofiticus 60,000 UFC - Antibiograma: No requiere Cmo se interpreta el gram? Que significa la presencia de los microorganismos? Porqu no se realiza el antibiograma?
El paciente es portador de sonda foley, factor externo que incrementa el riesgo de infeccin urinaria y contaminacin La ausencia de leucocitos o reaccin inflamatoria aleja la posible presencia de infeccin El aislamiento de flora mixta nos induce a pensar en contaminacin de la muestra No corresponde a realizar antibiograma en la sospecha de contaminacin en la muestra recibida
1. Interpretacin del Caso RESULTADOS DE UROCULTIVOS
INFECCION URINARIA Microorganismo presente, nombre de gnero y especie Recuento de colonias 100,000 UFC/ml o 10 5
UFC/ml
Antibiograma o Susceptibilidad Antimicrobiana RESULTADOS DE UROCULTIVOS
OTROS CONDICIONES Cultivo sin aislamientos: CULTIVO NEGATIVO Cultivos con aislamientos menores de 10 5 UFC, solo identificacin de microorganismos, solicitando nueva muestra Cultivos con aislamientos mixtos, se informar como FLORA MIXTA, solicitando nueva muestra
TABLA N 14: FRECUENCIA MICROORGANISMOS UROCULTIVOS POSITIVOS PACIENTES ADULTOS AMBULATORIOS HNERM 2011
Acinetobacter baumannii 15 No figura identificacion 16
Enterobacter aerogenes 14 Trichosporum beigelii 13 Morganella morganii 7 Candida glabrata 5 Candida parapsilosis 4 Stenotrophomona maltho 4 Stafilococo saprophyticus 3 Estreptococo agalactiae 3 Citrobacter koseri 3 VIGILANCIA DE LA SENSIBILIDAD PORCENTUAL A LOS ANTIBIOTICOS DE MICROORGANISMOS PREDOMINANTES UROCULTIVOS ADULTOS 2011 - HNERM TABLA N 18 SENSIBILIDAD Escherichia coli DE UROCULTIVOS ADULTOS DE PACIENTES AMBULATORIOS HNERM - 2011 N CEPAS A/S AK AM AUG CAX CAZ CFT CFZ CP CPE
CRM FD GM IMP LVX P/T 1682 24 94 15 60 61 61 62 54 27 63 54 90 63 100 28 95 N CEPAS PI T/S TE TIM TO 1682 20 27 33 75 52 Escherichia coli en Pacientes Ambulatorios BLEE BLEE BLEE por especialidades, con presencia 34% 35% 36% de Betalactamasas de Espectro Nefrolo ga Urolog a Emerg encia Extendido A/S= Ampicina/Sublactam, AK= Amikacina, AM= Ampicilina, AUG= Amoxicilina/Ac. Clavulnico, CAX= Ceftriaxona, CAZ= Ceftazidima, CFT= Cefotaxima, CFZ= Cefazolina, CP= Ciprofloxacina, CPE= Cefepime, CRM= Cefuroxima, ETP= Ertapenem, FD= Nitrofurantoina, GM= Gentamicina, IMP= Imipenem, LVX= Levofloxacina, P/T= Piperacilina/Tazobactam, PI= Piperacilina, T/S= Trimetoprim/Sulfametoxazol, TE= Tetraciclina, TIM= Ticarcilina/Ac. Clavulnico, TO= Tobramicina Sensibilidad Escherichia coli Urocultivos adultos HNERM 2011 0 20 40 60 80 100 120
A / S
A K
A M
A U G
C A X
C A Z
C F T
C F Z C P
C P E
C R M E T P
F D
G M
I M P L V X
P / T
T / S
T E
T I M
T O Antibiticos %
S e n s i b i l i d a d Hospitalario Comunitario Emergencia ENFERMEDAD DIARREICA AGUDA DEFINICION La diarrea es una alteracin en el movimiento caracterstico del intestino con un incremento en el contenido de agua, volumen o frecuencia de las evacuaciones por lo tanto una disminucin de la consistencia , quedando lquida o blanda as como se presenta un incremento de la frecuencia de los movimientos intestinales igual o mayor a tres evacuaciones en un da.
GENERALIDADES
La enfermedad diarreica aguda es una de las enfermedades ms comunes en nios menores de 5 aos y la segunda causa de morbi - mortalidad a escala mundial. Son la segunda mayor causa de muerte de nios menores de cinco aos, y ocasionan la muerte de 760 000 millones de nios cada ao. Se trata de una entidad autolimitante y por lo tanto para su manejo corresponde principalmente a la evaluacin del estado general y sobretodo de la hidratacin y compromiso general del paciente.
GENERALIDADES
Es debida en cerca del 70% a una etiologa viral, quedando en 20% a la etiologa bacteriana y 10% a la etiologa parasitaria. En el cuadro clnico se asocia frecuentemente con sntomas de nuseas, vmito y clico abdominal. Es considerada como episodio de diarrea igual o menor a 14 das de evolucin.
ETIOLOGIA EN LA ENFERMEDAD DIARREICA AGUDA DIARREA VIRAL DIARREA BACTERIANA Rotavirus Grupo A Salmonella Adenovirus entrico S. typhi y paratyphi Astrovirus Salmonella no tifoidea Calicivirus humanos S. enteritidis Norovirus S. typhimurium Sapovirus Shigella -- Shigella sonnei Campylobacter: Campylobacter jejuni DIARREA PARASITARIA Yersinia - Yersinia enterocoltica Giardia lamblia -- Escherichia coli: enteropatognico, - Cryptosporidium parvum enterotoxignico, enterohemorrgico, enteroinvasivo, otros - Aeromona
Asociacin Espaola de Pediatra .
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Acta md. peruana v.28 n.3 Lima jul./set. 2011 - Manejo de la enfermedad diarreica aguda en nios hospitalizados en el Hospital III Grau EsSalud Resultados bacteriologicos y parasitologicos segun tipo de diarrea en las Direcciones de Salud Cajamarca, Lambayeque, Loreto y Lima Este 2001 Leucocitos Sensibilidad % Especificidad % (IC95%) (IC95%) 0 100 0 1 a 5 92.3 42.6 (87.2 - 95.7) (37.5 - 47.9) 6 a 10 63.2 84.3 (55.4 - 70.5) (80.2 - 87.9) 11 a 20 47.1 91.9 (39.3 - 55) (88.6 - 94.4) 21 a 50 20 97.9 (14.3 - 26.9) (94.9 - 98.5) > 50 3.2 99.7% (1.2 - 7) (98.6 - 99.9)
Adaptado de RUIZ, PELEZ et al Accuracy of fecal lactoferrin and other stool tests for diagnosis of invasive diarrhea at a Colombian pediatric hospital. The Pediatric Infectious Disease Journal Vol. 18(4),April 1999,pp 342-346 Rev. Gastroenterol. Per; 2011; 31-3: 258-277 Rev. gastroenterol. Per v.32 n.1 Lima ene./mar. 2012
Uso de una prueba rpida de rotavirus en la prescripcin de antibiticos en diarrea aguda peditrica: un estudio observacional, aleatorizado y controlado COPROCULTIVOS
Orientado a la bsqueda de enteropatgenos comunes: Salmonella diferentes especies Shiguella diferentes especies Campylobacter sp
O estudios especiales para sospechas especiales: Vibrio identificando especies
Las pruebas de susceptibilidad principalmente para informacin epidemiolgica de vigilancia Caso Clinico 4
Paciente de 18 meses febril, con deposiciones lquidas, hace 2 das, 5 cmaras diarias. En las deposiciones hay presencia de mucosidad y rasgos sanguinolentos. Estado general, irritable, inapetente, vmitos, ojos hundidos, no orina hace 8 horas. Exmen fsico: T rectal 39C, signo del pliegue positivo, mucosa oral seca, irritable.
Qu sindromes presenta el paciente? Qu exmenes solicita? 1. Sindromes
Sindrome de Deshidratacin Sindrome Febril Sindrome Diarreico
2. Exmenes a Solicitarse
1. Reaccin Inflamatoria 2. Deteccin de Antgenos de Rotavirus Adenovirus 3. Deteccin rpida de Campylobacter 4. Coprocultivo
ENFERMEDAD DIARREICA AGUDA MUESTRA DE ESTUDIO HECES -Colectar en envase limpio -Cantidad mnima 5 gr -Seleccionar preferentemente de la zona mucosa o sanguinolenta 2. ROTAVIRUS (ELISA INMUNOCROMATOGRAFIA) RESULTADO INMEDIATO 1. REACCION INFLAMATORIA EXAMEN DIRECTO EN FRESCO RESULTADO INMEDIATO 3. CAMPYLOBACTER (GRAM TRUNCO INMUNOCROMATOGRAFIA) RESULTADO INMEDIATO 4. COPROCULTIVO Y SENSIBILIDAD RESULTADO EN 4 DIAS REACCION INFLAMATORIA
Exmen cuantitativo de presencia de leucocitos en frotices en fresco directo de heces
POSITIVO: Leucocitos 15 / campo
Resultado asociado a EDA etiologa segn bacteriana o viral
ROTAVIRUS - ADENOVIRUS
Prueba inmunocromatogrfica COLORACION PARA CAMPYLOBACTER
Uso del Gram truncado, para la bsqueda de microorganismos con formas curvas, se colorea el frotis de heces en porta objeto con este pero solo con la Violeta de Genciana, entonces la observacin se har como de gram positivos COPROCULTIVO
Estudio microbiolgico cultural para la bsqueda de microorganismos patgenos del tracto gastrointestinal, importante para la validez de el aislamiento de los bacterias enteropatogenas, agentes etiolgicos de la enfermedad diarreica aguda bacteriana: Salmonella Shiguella Campylobacter Vibrios COPROCULTIVO El aislamiento de los patgenos proporcionan la: - Identificacin de microorganismos en gnero y especie - Antibiograma o Prueba de Susceptibilidad para mostrar el perfil de sensibilidad y resistencia de los enteropatgenos BACTEREMIA - SEPSIS BACTEREMIA - SEPSIS BACTEREMIA SEPSIS EVENTOS INTIMAMENTE RELACIONADOS EVENTOS RELACIONADOS BACTEREMIA Concepto esencialmente microbiolgico, y se define como la presencia de bacterias en el torrente circulatorio (funguemia en caso de hongos) demostrada mediante hemocultivo. EVENTOS RELACIONADOS SEPSIS
Concepto eminentemente clnico y consiste en el desarrollo de una respuesta sistmica de infeccin Caso Clnico 5
Paciente de 60 aos diabtico, febril con herida en pie derecho con zonas de necrosis en 1 dedo hace ya 3 semanas, malestar general, algo somnoliento, se le solicita 2 hemocultivos y cultivo de la lesin, en el resultado de los hemocultivos, en uno de ellos se aisla Estafilococo epidermidis y en el otro Escherichia coli - Cmo se interpreta el 1 resultado? - Si se determina alguna falla, cul sera? - Tendra valor el 2 resultado? INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
El resultado del primer hemocultivo corresponde al aislamiento de un germen de la piel, por lo tanto es considerado negativo y confirmado al no corresponder al mismo aislado en el segundo hemocultivo El aislamiento correspondera a una contaminacin por la inadecuada obtencin de la muestra El segundo hemocultivo podra corresponder al microorganismo patgeno, sin embargo tendra que repetirse el examen de ser posible
INDICACIONES DEL HEMOCULTIVO Previa a la terapia antibitica En sospecha clnica de sepsis, meningitis, osteomielitis, pielonefritis, infeccin intraabdominal, artritis, infecciones graves de la piel y tejidos blandos, neumona, endocarditis y fiebre de origen desconocido En nios pequeos o ancianos con disminucin sbita de la vitalidad. Complementarse con cultivos de otros fluidos como LCR, orina, muestras del tracto respiratorio inferior, etc. www.seimc.org/.../seimc- procedimientomicrobiologia3a.pdf
HEMOCULTIVO Examen GOLD STANDARD para el diagnstico de BACTEREMIA, de por s condicin crtica por la alta morbi-mortalidad. Requiere un cuidadoso control de calidad en los procedimientos y procesos de su realizacin HEMOCULTIVOS
Mnimo 02 hemocultivos en 24 horas, mximo 03 hemocultivos Zonas de venopuncin diferentes Volmenes: adultos de 8 a 10 ml por frasco nios 1 a 2 ml por frasco neonatos 0.5 a 1 ml por frasco Limpieza escrupulosa de la zona de venopuncin (contaminacin) OBTENCION DE HEMOCULTIVOS Seleccionar Vena Perifrica Alcohol 70% Yodo Povidona 10% Esperar secado 1 a 2 min Limpiar tapn de goma Obtener 10 ml De sangre NO CAMBIAR AGUJA Remover yodo de la piel Yodo 2% LIMPIAR PIEL 3 a 5 cm
Alcohol 70% NUNCA YODO Inocular en el frasco de hemocultivo Esperar secar PROTOCOLOS DE ESTUDIO MICROORGANISMOS COMUNES 5 DIAS Estafilococo aureus Escherichia coli Pseudomonas aeruginosas Acinetobacter sp Estreptococo pneumoniae Levaduras tipo Cndida sp MICROORGANISMO FASTIDIOSOS HASTA 30 DIAS Brucella sp Hongos profundos diversos: Histoplasma Mycobacterias METODOLOGIAS PARA LOS HEMOCULTIVOS RESULTADOS E INTERPRETACION CULTIVO NEGATIVO: cuando no se aislan microorganismos, que generalmente alejan las sospechas diagnsticas de infeccin CULTIVO POSITIVO: cuando se aislan microorganismos en el o los frascos estudiados: - Asilamiento significativo, siempre y cuando se encuentren microorganismos conocidos de rol patgeno y en los frascos estudiados - Aislamiento no significativo, cuando se aislan microorganismos de la flora saprofita de piel y en 1 solo frasco del total estudiado REPORTE DE RESULTADOS
CULTIVO NEGATIVO CULTIVO POSITIVO: Nombre del microorganismo con el patrn de sensibilidad CULTIVO CONTAMINADO: Solo se informar el nombre del microorganismo, sin la sensibilidad indicando la evaluacin del rol contaminante o patgeno de dicha muestra y la sugerencia de obtencin de la nueva muestra FRECUENCIA GENERAL DE MICROORGANISMOS AISLADOS EN HEMOCULTUICOS ADULTOS 2011 - HNERM Microorganism os N aislados Microorganismos N aislados Microorganismos N aislados Staphylococcus epidermidis 190 Staphylococcus simulans 4 Enterococcus durans/hirae 1 Escherichia coli 183 Klebsiella oxytoca 4 Enterococcus raffinosus 1 Staphylococcus aureus 117 Aeromonas hydrophila grupo 4 Eubacterium limosum 1 Klebsiella pneumoniae 88 Proteus mirabilis 3 Gemella especies 1 Staphylococcus haemolyticus 88 Citrobacter koseri 3 Kluyvera ascorbata 1 Pseudomonas aeruginosa 74 Cryptococcus neoformans 3 Providencia stuartii 1 Staphylococcus hominis subesp. hominis 67 Chryseobacterium (F.) meningosepticum 3 Serratia plymuthica 1 Acinetobacter baumannii/haemolyticus 58 Leuconostoc especies 3 Sphingomonas (P.) paucimobilis 1 Enterobacter cloacae 47 Salmonella typhi 3 Staphylococcus cohnii subsp. cohnii 1 Enterococcus faecalis 43 Staphylococcus saprophyticus 3 Staphylococcus hominis subesp. novobiosepticum 1 Enterococcus faecium 19 Streptococcus bovis 3 Staphylococcus intermedius 1 Candida albicans 17 Streptococcus salivarius 3 Staphylococcus warneri 1 Candida tropicalis 17 Streptococcus dysgalactiae 2 Streptococcus anginosus grupo 1 Acinetobacter lwoffii 17 Staphylococcus auricularis 2 Streptococcus mutans 1 VIGILANCIA DE LA SENSIBILIDAD PORCENTUAL A LOS ANTIBIOTICOS DE MICROORGANISMOS PREDOMINANTES HEMOCULTIVOS ADULATOS 2011 HNERM TABLA N 6: SENSIBILIDAD Estafilococo aureus DE HEMOCULTIVOS ADULTOS HNERM 2011 N CEPAS AM AUG C CD CF CFT CFZ CP CPE
Estudio cultural microbiolgico de la mdula sea Indicaciones: Fiebre de Origen Desconocido, Enfermedades crnicas intracelulares ( Brucella, etc), Micosis Profundas, Tuberculosis Miliar, etc Obtencin por procedimiento mdico de aspirado de mdula sea Protocolos de hasta 30 dias de observacin diaria, para el resultado final