Prdida o disminucin de productividad.

Los contaminantes pueden desplazar a los

microorganismos de fermentacin.
Microorganismos dificultan la obtencin de productos.
Los productos de contaminantes dificultan la obtencin de
producto.
Los contaminantes pueden degradar productos deseados.
Consecuencias de contaminacin:
Medidas para evitar la contaminacin
Uso de inculo puro.
Esterilizar el medio de cultivo y los aditivos de la
fermentacin.
Esterilizar el fermentador.
Esterilizar lneas de conduccin alrededor del fermentador.
Condiciones aspticas durante la fermentacin.
Las fermentaciones comerciales necesitan generalmente miles de litros de medio de
cultivo lquido y millones de litros de aire. Para procesos que operan con cultivos
aspticos, los materiales de partida deben de estar libre de organismos
contaminantes.

De todos los mtodos de esterilizacin disponibles, entre los que se incluyen:
1.Tratamiento qumico
2.Exposicin a radiacin UV
3.Rayos gamma
4.Rayos X
5.Sonicacin
6.Filtracin
7.Calentamiento

Solo los dos ltimos se utilizan en operaciones a gran escala.
FILTRACIN
CALENTAMIENTO
La esterilizacin
depende:
Nmero de microorganismos
La temperatura
El tiempo
Tipo de microorganismo

En alimentos y fermentaciones la esterilizacin no es absoluta, solo se evita o
reduce la probabilidad de que exista microorganismos.
La entidad de referencia para la esterilizacin es la espora de Bacillus
Stearothermophilus

En fermentaciones la esterilizacin se lleva a cabo en:
1. Caldo de fermentacin (Termo esterilizacin)
2. Aire (Filtracin)
Lote








Continua
Platos continuos



Esterilizacin Flash
Incremento de calor
instantneo
Composicin del caldo
Diluciones alteradas
Formacin de espuma
Retromezclado
Esterilizacin
del caldo de
fermentacin
ESTERILIZACIN DISCONTINUA DE LQUIDOS MEDIANTE CALOR
El medio lquido se esteriliza
normalmente en el reactor donde se
va a realizar la fermentacin en
discontinuo. El lquido se calienta
hasta la temperatura de
esterilizacin introduciendo vapor en
los serpentines o en la camisa del
reactor.
Otra posibilidad consiste en
introducir el vapor directamente en
el reactor o calentar el recipiente
utilizando energa elctrica. Si se
utiliza la inyeccin directa de vapor
se toma en cuenta la posibilidad de
dilucin del medio debido a la
condensacin del vapor (puede
representarse entre el 10-20%).
En la esterilizacin por lotes
(batch), el medio se coloca en
un tanque, generalmente
agitado, se calienta hasta la
temperatura de esterilizacin,
se deja un tiempo dado a esa
temperatura (mantenimiento)
y finalmente se enfra a una
temperatura adecuada para su
procesamiento siguiente.
Caractersticas de la esterilizacin por lotes
1. Puede efectuarse en el propio biorreactor.
Ahorro de equipo.
2. Baja velocidad de calentamiento y de enfriamiento puede provocar sobre-
exposicin de nutrientes al calor.
Criterio HTST difcil de cumplir.
3. Proceso simple.
4. Dificultad de escalado: el rea relativa disponible para la transferencia de calor
disminuye al aumentar el volumen del equipo.
Esterilizacin por lote
Perfil tiempo Temperatura de esterilizadores.
0
20
40
60
80
100
120
140
0 50 100 150 200
tiempo (min) T (C)
0 24
11 33
19 48
32 64
41 81
53 100
65 108
73 115
81 120
87 120
98 114
110 100
122 94
131 87
143 65
154 40
KN
dt
dN
=
RT
E
Ae k

=
kt
No
Nf
= ln
molK cal R
molesp Kcal E
s A
/ 9853 . 1
. / 7 . 67
10 1
1 2 . 36
=
=
=

La entidad de referencia es
Bacillus
Stearothermophilus
= = kt
Nf
No
ln
=Factor nabla.
Medida de reduccin
fraccional en el conteo de
MO viables.
Mtodo grfico:
Nabla de
calentamiento
Nabla de
enfriamiento
N
a
b
l
a

d
e

m
a
n
t
e
n
i
m
i
e
n
t
o

Mtodo rpido:
TABLA CINCO
TC K min-1
100 0.019 0
101 0.025 0.044
102 0.032 0.076
103 0.040 0.116
104 0.051 0.168
105 0.065 0.233
106 0.083 0.316
107 0.105 0.420
108 0.133 0.553
109 0.168 0.720
110 0.212 0.932
111 0.267 1.199
112 0.336 1.535
113 0.423 1.957
114 0.531 2.488
115 0.666 3.154
116 0.835 3.989
117 1.045 5.034
118 1.307 6.341
119 1.633 7.973
120 2.037 10.010
121 2.538 12.549
122 3.160 15.708
123 3.929 19.638
124 4.881 24.518
125 6.056 30.574
126 7.506 38.080
127 9.293 47.373
128 11.494 58.867
129 14.200 73.067
130 17.524 90.591
1. El corto perodo de exposicin y la alta temperatura alcanzados permiten
reducir la destruccin de nutrientes.
Se cumple mejor criterio HTST.
2. Alto control de la calidad del producto.
3. Son crticos los siguientes factores: la formacin de espuma, la viscosidad
y la presencia de slidos en suspensin.
4. Bajo requerimiento de mano de obra.
5. Esterilizador independiente del biorreactor.
6. Menor requerimiento de vapor y demanda sostenida de vapor (no hay
picos).
Caractersticas
El calentamiento puede ser realizado
por:
inyeccin directa de vapor
intercambiador de calor.
Perfiles temperatura vs tiempo en
esterilizadores continuos.
Tiempo de residencia
1. El tiempo de residencia del medio dentro de la seccin de mantenimiento es el
tiempo de exposicin del medio a la temperatura de esterilizacin.

2. En flujo es pistn, la velocidad del fluido sobre un radio dado es constante. El
tiempo de residencia, es el mismo para todas las porciones de medio.

3. Cuando el flujo no es pistn, el tiempo de residencia medio calculado a partir de
la velocidad media, no siempre corresponder con el tiempo real de cada
porcin de medio. Existen dos situaciones con respecto a los valores medio de
velocidad y de tiempo de exposicin:

Porciones de medio con mayor velocidad que la media, tiempo de posicin menor,
estarn sub-expuestas y alcanzarn un menor nivel de muerte,

Porciones de medio con menor velocidad, tiempo de exposicin mayor, estarn
sobre-expuestas, alcanzarn un nivel mayor de muerte, pero con mayor
destruccin de nutrientes.
1
umxima
u
=
Flujo pistn
A
F
= u
0,82
umxima
u
=
Flujo turbulento
Segn modelo de la 1/7 potencia de Prandtl
0,5
umxima
u
=
Flujo laminar
F: velocidad de flujo : densidad del medio de cultivo
A: rea transversal del cao : viscosidad del medio de cultivo
D: dimetro del cao
L: largo del cao
: velocidad media

D u
Reynolds de Nmero : Re

=
Re
umxima
u
1. Para el diseo de un esterilizador continuo se debe conocer la distribucin de
tiempos de residencia, o bien la desviacin del rgimen de flujo obtenido con
respecto al flujo ideal tipo pistn.
2. Para estimar dicha desviacin y el diferente grado de destruccin trmica se
utiliza el modelo de dispersin, caracterizado por un parmetro, el coeficiente
de dispersin axial o turbulenta, D
z.
dz
N N - dN

Eje z
3. Realizando un balance de microorganismos, considerando variaciones por
arrastre por flujo, dispersin axial y destruccin trmica se tiene:
D
Z
puede ser estimada usando la correlacin Intensidad de mezcla (D
z
/ D) vs Re
(Bailey & Ollis, 2nd ed. p. 544, Lee, p. 223). (Levenspiel 1958)
Definiendo el nmero de Peclet (Pe),
tambin referido como de nmero
Bodenstein (Bo):
z
D
L
Bo Pe
. u
= =
Cuando D
z
0 , Pe , el flujo se
aproxima al flujo pistn.
D u
z
D

u D
Re

=
N k
dt
dN
=
0
N
N
N =
L
z
z =
t
t
= |
t k.
u
L k
Da N
R
=

= =
0 N N Pe
z d
N d
Pe
z d
N d
R
2
2
=
Definiendo el nmero de reaccin (N
R
), tambin referido como de
Damkhler (Da):
( ) ( )
2 a Pe
2
2 a Pe
2
2 Pe
0 e
N
N
a 1 a 1
a 4
e
e



=
+

1/2
Pe
N 4
1 a
R
|
.
|

\
|
+ =
La solucin de la ecuacin diferencial es la siguiente:
u
L
t = Siendo L largo del cao yt tiempo de residencia medio:
Ec. 20
N
R

Pe
0
N
N
Wang et al. p. 154, Bailey
& Ollis 2nd ed. p. 594,
Aiba et al. 2nd ed. p. 263
Cuando Bo , se tiene flujo pistn y la ecuacin 20 se reduce a:
t k
N
0
.
e e
N
N
R

= =
1. Desde el punto de vista prctico se puede considerar flujo pistn cuando
Bo > 800 - 1000.
2. Cuando el flujo no es pistn, el nivel de destruccin disminuye.
3. Para aproximarse a un flujo cercano al modelo pistn, el esterilizador se
disea:
Usando caos largos y finos
Menor Re en zona turbulenta.
ESTERILIZADOR
DE
PLATOS
CONTINUOS
ESTERILIZACIN
TIPO
INYECCIN
FLASH
Ejemplos de
Filtros de Aire
FILTROS DE MEMBRANA
DE CELULOSA
El nmero de microbios en el aire es del orden de 10
3
-10
4
m
-3
. La filtracin es el
mtodo ms comn de esterilizacin del aire en bioprocesos a gran escala, ya que
la esterilizacin de gases mediante calor resulta poco prctica. En la industria de
las fermentacin se utilizan con gran frecuencia los filtros profundos consistentes
en lechos empaquetados o rellenos de material fibroso como lana de vidrio.
AIRE: P 1.5- 4.0 atm
103 104 cont/m3
0.2 1.0 m
MECANISMOS DE RETENCIN
Impactacin
Intercepcin
Difusin
Atraccin electrosttica
Filtro de profundidad
A
F
U =
P, T
Aire
(con
contaminantes)
Aire estril
Fibra rea Faire N
dx
dN
, , ,
kN
dx
dN
=
} }
=
=
=
x x
x
Nf
No
dx k
N
dN
0
( ) 0 ln =
|
.
|

\
|
x k
N
Nf
kx
N
N
f
o
= ln
Variacin de K y X90 con velocidad lineal de aire
(filtro relleno de fibra de vidrio, cuyo dimetro 0.5-1.0 m)
C
o
n
s
t
a
n
t
e

d
e

r
e
t
e
n
c
i

n

=

K

(
p
u
l
g
.
-
1
)