TUTORIAL

PARA HACER
PRUEBAS DE
1-2 TEST
 D I A G R A M A D E 1–2 T E S
T TAPA
BLANCA

MENISC
O
CÁMARA
DE
MOVILIDAD
(Medio TAPA
Sim) NEGRA

CÁMARA DE INOCULACIÓN
(Caldo Tetrationato)
PRE-ENRIQUECIMIENTO DE LA
MUESTRA
A. PARA TODAS LA MUESTRAS EXCEPTO
ALIMENTOS CRUDOS Y ALTAMENTE
CONTAMINADOS
1. PREPARAR CALDO LACTOSADO
• Pesar 3 g de Caldo Lactosado y
ponerlos en un Matraz Erlenmeyer de
250 ml.
• Agregar 225 ml de Agua destilada o
de garrafón.
• Calentar hasta ebullición con mechero
o en plancha.
• Esterilizar en Autoclave a 121°C (15
lb. de presión) durante 20 min.
2. AGREGAR LA MUESTRA
• Pesar 25 g de muestra y agregarla al
mechero con Caldo Lactosado en
condiciones de asepsia (con mechero a
un lado).
3. INCUBAR
• Meter el matraz en la incubadora a
35-37 °C por 24 + 2 horas.

• Seguir con el “Procedimiento de la

Prueba”
PRE-ENRIQUECIMIENTO DE LA
MUESTRA
B. PARA ALIMENTOS CRUDOS Y ALTAMENTE
CONTAMINADOS

1. PREPARAR SOLUCIÓN YODO-YODURO

0.1 %
• Yodo 6.0 g
• Yoduro de Potasio 5.0 g
• Agua purificada 20 ml

• Disolver el Yodo y el Yoduro de

Potasio en el agua purificada.
• NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE
2. PREPARAR SOLUCIÓN VERDE BRILLANTE
0.1 %

• Tinte Verde Brillante 0.1 g

• Agua purificada 100 ml

• Disolver el tinte verde brillante en el

agua purificada.
• NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE
3. PREPARAR CALDO TETRATIONATO
• Disolver 46 g de Base de Caldo
Tetrationato en 1 L de agua destilada.
• Calentar en mechero hasta ebullición (1
min)
• NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE
• Enfriar aproximadamente a 45°C y
agregar 10 ml de la Solución Verde
Brillante 0.1%
• Mezclar bien y separar en alícuotas de
10 ml en tubos estériles con tapón.
• Guardar en refrigeración si no se va a
utilizar en las próximas 12 horas.
• El día que se va a realizar la prueba
agregar a cada tubo 2 ml de la Solución
Yodo-Yoduro
• Transferir 1 ml del pre-enriquecimiento
incubado.
• Mezclar con 9 ml de solución Caldo
Tetrationato Verde Brillante activado
con Yodo-Yoduro.
• Agitar suavemente.
• Incubar 6-8 horas a 24°C + 0.5°C en
baño- maría
• Seguir con el Procedimiento de la
Prueba
 PROCEDIMIENTO DE LA
PRUEBA
1. AGREGAR SOLUCIÓN YODO-YODURO
(Para todas las muestras excepto los
alimentos crudos o altamente
contaminados)
• Posicionar el 1-2 Test con la tapa negra
para arriba y destapar.
• Agegar 1 gota del Reactivo #1 (Solución
de Yodo-Yoduro) a la cámara de
inoculación.
• Tapar y agitar suavemente.
NOTA: Este paso no se hace para alimentos
crudos y altamente contaminados porque
la incubación del caldo tetrationato se
2. REMOVER EL PLUG (TAPA) DE
ESTA CÁMARA
• Reposicionar 1-2 Test con la tapa
negra PARA ARRIBA y destapar.
• Remover el plug de la cámara
usando una pinza estéril y
descartar el plug.

NOTA: Si este plug no se saca, la

bacteria no es capaz de moverse
desde la cámara de inoculación
hacia la cámara de movilidad.
3. INOCULACIÓN
Antes de la inoculación asegurese
de agitar bien el caldo de
enriquecimiento con la muestra.

PARA TODAS LAS MUESTRAS CON EXCEPCIÓN DE

PRODUCTOS CRUDOS Y ALTAMENTE
CONTAMINADOS
• Transferir 0.1 ml de muestra y caldo para la
cámara de inoculación
PARA PRODUCTOS CRUDOS Y ALTAMENTE
CONTAMINADOS
• Transferir 1.5 ml de Caldo Tetrationato de la
incubación 42°C para la cámara de
inoculación previamente vacía.
4. CORTAR LA PUNTA DE LA TAPA
BLANCA
• Posicionar el 1-2 Test con la tapa
blanca PARA ARRIBA y destapar.
• Cortar la punta (o piquito blanco de
plástico) de esta tapa con unas
tijeras estériles y descartar la
punta.
• Se debe cortar donde la punta se
junta con la base de la tapa.
5. PREPARACIÓN Y ADICIÓN DEL
ANTICUERPO
• En el orificio que queda en el gel, agregar
una gota del Reactivo #2 para el pocillo
formado en el gel por la punta de la tapa en
la cámara de movilidad (tapa blanca).
• Una gota del Reactivo #2 debe llenar
uniformemente las dos terceras partes mas
bajas del pocillo en el gel de movilidad.
• No agregar mas de una gota del Reactivo #2.
6. INCUBACIÓN
• Colocar 1-2 Test inoculados con la tapa
blanca PARA ARRIBA en incubadora. Incubar
de 14 a 30 hrs a 35°C.
 LECTURA DE RESULTADOS

• Con la tapa blanca PARA ARRIBA, colocar 1-

2 Test cerca de una fuente de luz.

• Observar atentamente el gel en la cámara

de movilidad girando 360° al 1-2 Test
enfrente a fuente de luz.
 INTERPRETACIÓN DE
RESULTADOS
POSITIVO
S positivo es indicado por la presencia
• Un resultado
de una banda blanca (Inmunobanda) en forma de U o
de menisco.
• La banda puede estar completa o puede estar en un
lado del gel y se observa en la mitad más alta de la
cámara de movilidad.
• El resultado positivo indica de forma presuntiva
que la muestra contiene Salmonella.
• En caso de que no se quiera hacer confirmación del
resultado inmediatamente, mantenga las pruebas
positivas en refrigeración (2-8°C).
 INTERPRETACIÓN DE
RESULTADOS
NEGATIVO
• Si no haySformación de la banda después del tiempo
de incubación mínimo de 14 horas, la prueba es
negativa.
• 1-2 Test negativos pueden presentar turbidez
uniforme en la cámara de movilidad como resultado
del movimiento de otras bacterias en el gel.
CONFIRMACIÓN
• Confirmar las muestras presuntivas positivas
siguiendo el procedimiento de AOAC Internacional,
obteniendo a la Salmonella desde al Caldo
Tetrationato en la cámara de inoculación.
INTERPRETACIÓN DE
RESULTADOS

1-2 Test POSITIVO 1-2 Test

es indicado por la NEGATIVO es
presencia de la indicado por la
inmunobanda en ausencia de la
forma de “U”. inmunobanda.
 INTERPRETACIÓN DE
RESULTADOS

Ejemplo de Ejemplo de
Inmunbanda en Inmunbanda de
forma de forma
Menisco. Asimétrica.

Ejemplo de Ejemplo de
Inmunobanda Inmunbanda
asimétrica hacia asimétrica hacia
la derecha. la izquierda.
CONDICIONES DE ALMACENAJE

Refrigerar de 2-8°C. NO CONGELAR

DESCARTE
• Las unidades 1-2 Test no se pueden reutilizar.
• 1-2 Test inoculados pueden tener organismos patógenos y
se debe manipular con cuidado.
• Todas las tapas deben estar firmemente cerradas.
• Después del uso todas las unidades deben ser esterlizadas
a 121°C por un mínimo de 30 minutos.
Para cualquier duda o aclaración
favor de comunicarse con el
Soporte Técnico de Serco
Comercial con la
Q.F.B. Cristy Martínez
González
al Tel. 01 81 83 43 12 14 Ext.
209
o escribir al e-mail: