Biología Molecular - Ingeniería Genética

Biologa Molecular:
Gentica moderna
Dr. Angel E. Absaln
angelabsalon@yahoo.com
Angel E. Absaln CIBA-IPN Tlaxcala
Qu es la Ingeniera Gentica?
Es el conjunto de tcnicas derivadas de la
Biologa Molecular, que permiten manipular el
genoma de los seres vivos
Aplicacin de los
conocimientos de la
Ingeniera Gentica
Biotecnologa
Universidad de Alcal Patrimonio de la Humanidad
La Ingeniera Gentica es
posible porque:
Esqueleto
Azcar- Fosfato
Adenina
Citosina
Guanina
Timina
Bases
nitrogenadas
Apareamiento:
G:C
A:T
El ADN de todos los
organismos tiene la
misma composicin
y estructura
E. coli
T2
Las bacterias las utilizan como
defensa frente a la infeccin vrica
Arber descubre las enzimas de restriccin (1968)
Son las tijeras moleculares
que cortan el ADN por sitios
especficos
5
5
3
3
Extremos
cohesivos
A T
G C
EcoRI
5
5
3
3
ADN 1 ADN 2
ligasa
ADN
recombinante
La tecnologa del ADN recombinante permite la
CLONACIN de fragmentos de ADN
ADN
recombinante
CLONACIN
Las bacterias son las encargadas de multiplicar los ADNs que se quieren clonar
Para clonar un fragmento de ADN precisamos la
ayuda de las BACTERIAS
Escherichia coli
plsmido
Genoma
bacteriano
Los plsmidos se utilizan como
VECTORES DE CLONACIN
ligasa
ADN recombinante
Crecimiento
en medio de
cultivo
Microorganismos
transgnicos
Cmo se introduce el ADN recombinante en
el interior de la bacteria?
1 2
C
La tasa d e entrada o T RANSFORMACI N espontnea es
muy baja. Para aumentar el rendimiento se recurre a
tratamientos qumicos y fsicos
Los virus tambin se utilizan para introducir ADN en
el interior de las clulas
E. coli
T2
DNA recombinante
ADN vrico
Gen para
clonar
Extremos cos
del fago
Protenas de
la cubierta del
fago
Fagos con el gen
insertado
Construccin de
fagos in vitro
Los csmidos son vectores de clonacin como
los plsmidos, con fragmentos (cos) que permiten
su empaquetamiento en el interior de los fagos
Formas replicativas de los csmidos
Universidad de Alcal Patrimonio de la Humanidad Angel E. Absaln CIBA-IPN Tlaxcala
Cmo sabemos qu bacteria ha incorporado la
molcula recombinante?
Los vectores de
clonacin llevan
genes chivatos
o delatores
Amp
Medio CON ampicilina
Medio SIN
ampicilina
Bacillus Bordetella Clostridium Escherichia
Spirulina Staphylococcus Streptococcus Salmonella
Aplicaciones de los microorganismos
transgnicos
Medicina: produccin de Insulina humana, hormona del
crecimiento, vacunas y anticuerpos....
Medio Ambiente: desarrollo de microorganismos capaces de
degradar compuestos txicos o p e ligrosos
Industria alimentaria: produccin de edulcorante artificiales,
compuestos que se utilizan en panaderas, produccin de
queso y cerveza....
Cmo se obtienen las plantas transgnicas?
Mediante el
plsmido Ti de
Agrobacterium
tumefaciens
Se sustituye la regin del plsmido que
produce el tumor o agalla de la corona por el
gen de inters. Este plsmido recombinante se
introduce en la bacteria.
Planta resistente
Planta sensible
Partes de la planta se ponen en contacto con las
bacterias en medio de cultivo
Las clulas que
incorporan el plsmido
crecen en un medio
especial o selectivo
A partir de las clulas transformadas
se obtienen plantas adultas
Pistola de
genes
Plsmido
recombinante
Partcula
de oro
Para transformar plantas que no son atacadas por
Agrobacterium se recurre a la pistola o can de genes
Aplicaciones de la Biotecnologa vegetal
Resistencia a herbicidas
Resistencia a plagas y a enfermedades
Mejoras de las propiedades nutritivas
Resistencia a sequa y fro (estrs abitico)
Otras aplicaciones: produccin de variedades coloreadas,
plantas transgnicas productoras de vacunas, etc...
Qu entendemos por CLONACIN animal?
clonar significa obtener uno o varios individuos a partir de una
clula o ncleo de otro individuo, de modo que los individuos
clonados son idnticos o casi idnticos al original.

Individuos idnticos
Transgnesis y clonacin en animales
Oveja donadora de
clula huevo
Oveja que se
quiere clonar
Oveja
descendiente
clnica
Oveja en cuyo tero se
desarrollar el embrin
Medio de cultivo de
embriones
Aplicaciones de la clonacin animal
Mejoramiento gentico
Conservacin de especies silvestres en peligro de extincin
Produccin de animales transgnicos:
Productores de frmacos por sangre leche u orina(Ej.
factor de coagulacin IX humano)
Produccin de rganos de cerdo para xenotransplantes
Produccin de animales resistentes a enfermedades

La eficiencia de clonacin a partir de un animal adulto es muy baja, lo que
limita su aplicacin en la industria agropecuaria.
Vacunas Recombinantes:

Por qu utilizarlas?
Vacuna
Exponer al husped
a un antgeno.
Respuesta del
husped con
anticuerpos.
Memoria
inmunolgica

Historia de
la vacunacin
Identificada desde siglo IV AC
Momias
Cruzadas

Fatalidad
Cambio de la historia
ltimo caso de viruela:
Ali Maow Maalin

Somalia Octubre de 1977

Vacunas: Orgenes
Enfermedad Ao aparicin vacuna Observaciones
Viruela Jenner 1796 Virus vivo
Rabia Paster 1885 Virus vivo*
Tifoidea 1896 Completo
Difteria 1923 Toxoide
Tetanos 1927 Toxoide
Influenza 1938 Viral
Influenza 70s Inactivada
Vacunas: Recombinantes
Hepatitis Jenner 1796 Subunidad Core
Rabia 80s Poxvirus
Influenza 90s Poxvirus
Difteria 80s Toxoide
Tetanos 80s Toxoide
Influenza 2005 Subunidad M2
Influenza 2009 Subunidad HA
Vacunas: Recombinantes
Influenza 90s Pox
Newcastle 2009 El mismo
Newcastle 2010 Herpes virus
Influenza 2007 Newcastle
Influenza 2009 Marek
Vacunas recombinantes
Aislamiento del
gen de
microorganism
o patgeno
Insercin del
gen en un
plsmido
Purificacin de
plsmidos
Formulacin de
vacuna de
ADN
Insercin en
bacterias
o en clulas de
mamferos para
expresin
Purificacin de
protena o de
subunidad
proteica
Formulacin de vacuna
de protenas inactivadas
Insercin del
gen en un
vector viral
Crecimiento en
cultivo celular
Formulacin de
vacuna de virus
recombinante
Purificacin de
virus
recombinantes
Vacunas Recombinantes
Subunitarias

Vacunas de ADN

Vector recombinante
Clula
Virus

Vacunas
Subunitarias
Vacunas
Subunitarias
Seguras

Respuesta inmune humoral

Respuesta inmune celular
Vacunas de ADN
Material
gentico
Copia de
ADN del
patgeno
Plsmido
Plsmido
recombinante
Vacuna de
ADN
Vacunas de ADN
Exposicin prolongada del antgeno
Respuesta humoral
Incremento de memoria
Respuesta inmune celular
Vacunas vectorizadas
Modificacin
gentica
Obtencin
de virus
No patgeno
Vacunas vectorizadas:
Bacterias
Vacunas vectorizadas:
Plantas
Efectivas en laboratorio

Bajo costo de produccin
Vacunas vectorizadas
Ventajas:
Aplicacin virus vivo
Replicacin en el husped
Exposicin prolongada
Polivalencia
Replicacin sitio especfica

Introduccin
Vacuna: Es una molcula que
desencadena una respuesta
inmune espcfica contra un
antgeno.

Contiene el agente causante
de la enfermedad o una parte
del mismo.
Vacunas
de ADN
Vacunacin con ADN: Inyeccin a un
organismo con AND modificado
geneticamente para que el mismo husped
indusca una respuesta inmune.
Es una molcula de ADN de doble cadena
(generalmente un plsmido) que codifica
las protenas antignicas del patgeno.
El ADN se introduce en las clulas del
husped y las protenas antignicas son
sintetizadas. A partr de estas, se indece
una respuesta inmune.
Historia
Las vacunas de ADN son la tercera generacin de
vacuncas.
En 1990, en la Universidad of Wisconsin, Jon Wolff
encontr que la inyeccin de plsmidos en ratones
desencadenan la sntesis de las protenas codificadas.
En 1993, Merck Research Laboratories, Dr. Margaret Liu
descubri que la inyeccin de ADN conteniendo
informacin de HA del virus de influenza desencadena
una respuesta inmune.
Desde 1996, se han iniciado pruebas para la aprovacin
de diferentes tipos de vacunas de AND: Cancer,
influenza, Herpes virus.
Ventajas
No tiene el riesgo de las
vacunas vivas.
No es necesario el uso del
patgeno.
Las vacunas muertas
inducen una respuesta
humoral.
Las vacunas de ADN
inducen una fuerte
respuesta humoral y
celular.
Como hacer una vacuna de ADN
Viral gene

Recombinant DNA
Technology

Expression plasmid

Plasmid with foreign gene

Transform in to bacteria
Plasmid DNA get Amplified
Plasmid DNA isolated
Stored in vials
Ready for Apply
Methods of delivery
Inyeccion: Debe
administrarse una gran
cantidad de ADN al husped
directamente al musculo.
Gene Gun: Se requiere poca
cantidad de ADN que es
aplicada sobre la dermis.
Inyeccin por presin: Se
administra una cantidad alta
de ADN en la dermis.
Mecanismo de presentacin
de antgeno
ENDOGENO :-
Antigenic Protein is
presented by cell in
which it is produced.

EXOGENO :-
Antigenic Protein is
formed in one cell but
presented by different
cell.
Como funcionan las vacunas de
ADN
Musculo
Plasmid DNA
+
mRNA
Antigenic
Protein
Antigenic
Peptides
MHC-I
Plasmid
DNA
Nucleus
Va Endogena
Va Exogena
Antigenic Protein come outside
When Virus Enter in the Body
Viral Protein
Memory T-Cell
Antibodies
Ventajas

No implica una infeccin

La presencia del antgeno induce una respuesta inmune celular y
humoral

Estabilidad de la vacuna y fcil transporte.

Econmicas y fcil produccin.

Respuesta inmune duradera.

Desventajas
Aplicable solo a inmungenos
proticos.

Riesgo de dao a genes reguladores
del husped.

Possibilidad de generar tolerancia a
el antgenos producido.

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