Universidad Inca Garcilaso de la Vega Biotecnologia
PROCESO DE FERMENTACION INTRODUCCION
Un proceso de fermentacin se lleva a cabo en un recipiente llamado fermentador o biorreactor, mediante el cual determinados sustratos que componen el medio de cultivo son transformados por accin microbiana en metabolitos y biomasa. El microorganismo va aumentando en su concentracin en el transcurso del proceso al mismo tiempo que el medio se va modificando y se forman productos nuevos como consecuencia de las actividades catablicas y anablicas.
Productos de la Biotecnologa Sustrato Productos de las Clulas Enzimas (Glucosa Isomerasa) Antibiticos (Penicilina) Aditivos Alimenticios (aminocidos) Alcohol Productos Qumicos (cido ctrico) Clulas Levadura Metabolitos Primarios y Secundarios Sustrato de crecimiento Metabolito Primario Clulas Las clulas y el metabolito se producen ms o menos simultneamente Sustrato de crecimiento Metabolito Primario Clulas Metabolito Secundario Despus de producidas las clulas y el metabolito primario, las clulas convierten el metabolito primario en uno secundario Sustrato de crecimiento Metabolito Primario Clulas Metabolito Secundario Despus de producidas las clulas el sustrato se convierte en un metabolito secundario durante un posterior crecimiento Especficos de un grupo de organismos No esenciales para el crecimiento Dependiente de las condiciones de crecimiento Puede obtenerse una superproduccin Caractersticas de los metabolitos secundarios Diferencias entre metabolismo primario y secundario Va metablica primaria para la sntesis de aminocidos aromticos y metabolitos secundarios con anillos aromticos Glucosa Eritrosa Fosfoenol-piruvato 3-Desoli-7-fosfo D-arabinoheptulosonato cido shikmico cido corsmico cido prefnico cido antranlico Candicidina Nistatina Cloranfenicol Ansamicina Rifamicina Nocardicina Fenilalanina Polimixina Tirosina Novobiocina Triptfano Actinomicina Piocianina Metabolito primario Metabolito secundario
El comportamiento de un microorganismo en crecimiento es el resultado de la interaccin que se produce entre el microorganismo y el medio ambiente en el reactor, y que en rigor es el resultado de los llamados efectores intra y extra celulares.
INFLUENCIA DE LOS EFECTORES INTERNOS Y EXTERNOS
Los efectores internos estn representados por la dotacin gentica intrnseca del organismo considerado y por sus mecanismos de regulacin metablica. Tambin se puede dotar a un microorganismo de una capacidad gentica nueva cuando se efecta la insercin de sectores del genoma de una especie en un microorganismo, hacindose ste capaz de producir metabolitos que desde el punto de vista gentico de su especie no podra hacerlo. EFECTORES INTERNOS
Los efectores externos de naturaleza fsica estn vinculados con las condiciones de operacin que se utilizan en los reactores y son por ejemplo la temperatura, la agitacin, aireacin, etc; es decir, estn constituidos por las variables de manipulacin fsica que se fijan o se programan en el curso del proceso de produccin. Los efectores externos de naturaleza qumica estn representados por la presencia de los componentes de los medios de fermentacin, adems del 0 2 que puede considerarse un nutriente ms. EFECTORES EXTERNOS ESQUEMA DE UN PROCESO INDUSTRIAL
1) Propagacin de cultivos, lo que se realiza en el laboratorio y que comienza generalmente en un tubo de ensayo que contiene un repique reciente del microorganismo o un tubo liofilizado o congelado donde se conserva la cepa de inters o de una colonia del microorganismo previamente seleccionada.
ESQUEMA DE UN PROCESO INDUSTRIAL
2) Fermentacin, con el material obtenido anteriormente, se siembra el tanque de inoculo que puede tener un volumen de 50, 500 1000 1 segn la escala industrial posterior. Del tanque de inoculo se pasa posteriormente al fermentador industrial (escalado) cuyo volumen, que vara de acuerdo al producto a obtener y a su concentracin, est comprendido comnmente entre 10,000 y 100,000 L.
Es necesario la preparacin y esterilizacin de los medios que se lleva a cabo tambin en esta etapa (previamente a la inoculacin) ya sea en el tanque de inculo o en el reactor industrial.
ESQUEMA DE UN PROCESO INDUSTRIAL 3) Proceso de separacin y purificacin de los productos; estas etapas comprenden en forma general y sucesivamente: a) separacin de insolubles por filtracin, centrifugacin, o decantacin; b) separaciones primarias por extraccin, absorcin, adsorcin, ultrafiltracin; c) purificacin por extraccin lquido-lquido, o extraccin a dos fases acuosas, o cromatografa de afinidad, y finalmente d) aislamiento del producto.
ESQUEMA DE UN PROCESO INDUSTRIAL 4) Tratamiento de efluentes: si bien no tiene una relacin directa con el producto, representa una etapa imprescindible porque es fundamental controlar la calidad del efluente que sale de la fbrica y que es enviado generalmente a un curso de agua, sea un canal, arroyo, un ro o al mar. ESQUEMA DE UN PROCESO INDUSTRIAL 1.-PH 2.-ESPUMA 3.-OXGENO 4.-TEMPERATURA 5.-REGULACIN DE LA FORMACIN DE PRODUCTO. CONTROL DEL PROCESO
Control necesario para el desarrollo celular y formacin de producto. Control de forma indirecta o de forma directa: Directamente (Aadiendo agentes tamponantes): Fosfato inorgnico pH entre 6.0 y 7.5. cidos orgnicos pH bajos. Carbonato clcico frente a la produccin de cidos. Hidroxisales, amoniaco, cidos sulfrico y clorhdrico. Indirectamente ( mediante un balance equitativo entre las fuentes de carbohidrato y nitrgeno). Los carbohidratos bajan el pH (formacin de cidos orgnicos). Asimilacin del nitrato alcalinidad. DESVENTAJAS: Efectos represivos sobre la formacin del producto. pH ORIGEN: Desnaturalizacin de las protenas en la interfase gas- lquido. PROBLEMAS: Ascender hasta ocupar totalmente la cabeza del fermentador. Evacuar parte del contenido del aparato por la salida del aire. SOLUCIN: Antiespumantes ( agentes tensoactivos que reducen la tensin superficial de las espumas hasta dispersarlas ). Rompedores mecnicos. ESPUMA ANTIESPUMANTES: Eficacia (Depende de las condiciones de fermentacin): Composicin del medio, cepas microbianas, etapa de crecimiento, configuracin de las vas de aireacin y del fermentador. Seleccin y cantidad del antiespumante: Procedimientos de ensayo y error. Uso de soportes(aceites orgnicos y minerales) Cantidad de antiespumante mnima ( afecta a la velocidad de transferencia de oxgeno hasta u 50%) No deben ser txicos ni peligrosos, esterilizables por el calor y baratos. ANTIESPUMANTES Requerimientos en procesos aerobios. Influencia sobre los procesos metablicos. Velocidad de absorcin especfica de oxgeno concentracin de oxgeno disuelto Antioxidantes como proteccin del producto. OXIGENO
Temperatura ptima para la produccin celular o de metabolitos. Uso de termostatos TEMPERATURA