Gentica bacteriana

Importancia
Funcin gnica constituye la base de la funcin

celular
Los
microorganismos
suministran
sistemas
relativamente simples para el estudio de fenmenos
genticos.
Los microorganismos se usan para el aislamiento y
duplicacin de genes especficos de otros
organismos. Clonacin molecular
Los microorganismos producen muchas sustancias
de valor industrial. Biotecnologa.
Microorganismos y mecanismos de patogenecidad.

 Genotipo:
Genes, informacin gentica
Fenotipo:
Funcin y apariencia
Depende del genotipo
Normal (wild-type):
Genotipo predominante en la especie
Mutacin:
Modificaciones del genotipo predominante

Definiciones

 Haploidia:

una copia de cada

cromosoma
una sola copia de cada
gen.

Diploidia:

dos copias de cada

cromosoma.
dos copias de cada gen,
que pueden ser iguales o
diferentes

Definiciones

Alelos:

diferentes formas de un
gen

Homozigotos:

diploides con alelos

idnticos

Heterozigotos:

diploides con alelos

diferentes

Mutacin
Es un cambio hereditario en la secuencia de bases

del cido nucleico que constituye el genoma de un

organismo.
Pequeo cambio gentico en la clula

Mutacin
Mutante:

la cepa que tiene el cambio en la

secuencia de bases del cido nucleco genmico.
Difiere de su cepa parental.

Genotipo: conjunto de genes del organismo

gen hisC de E. coli (Proteina HisC)

hisC2

hisC1,

Fenotipo: caractersticas o propiedades observables

de un organismo
His+ Sintetiza su propia histidina

 Clulas procariotas y eucariotas con divisin asexual

Afecta descendencia
Clulas eucariotas

Somticas
No afecta descendencia

Germinales
Afecta descendencia
Se manifiesta en clulas somticas y germinales

Consecuencias de una mutacin

 Tasa de mutacin:

Probabilidad de que un cambio ocurra en funcin del

tiempo
Ejemplo:

Nmero de mutaciones en un par de bases por generacin.

Frecuencia de mutacin:

Nmero de veces que ocurre una mutacin, expresada en

funcin de los individuos de la poblacin estudiada

Ejemplo:
Nmero de mutaciones por 1x106 individuos

Medida de la ocurrencia de una mutacin

Bases moleculares de la
mutacin
Espontneas
Ocurren como consecuencia de la accin de la
radiacin natural. Alteracin de la estructura del
ADN.
Rayos csmicos

Ocurren durante la

replicacin por errores en el

apareamiento de las bases.
Origina cambios en el ADN replicado

Bases moleculares de la
mutacin
Puntuales
Implica un par de bases (unas pocos pares).
Pueden ser resultado de sustituciones de pares

de bases en el ADN .
Insercin o delecin de un par de bases.

Microinsercin
Microdelecin

Insercin
de una base
Delecin de
una base

Sustituciones de pares de
bases
El error en el ADN se transcribe al mRNA, y este RNA

errneo se usa a su vez como molde en la traduccin

a protena.

Slo se utiliza una de las bandas de ADN como molde

para el mRNA.
Un par de bases AT no significa lo mismo que una par TA

El cdigo triplete que dirige la insercin de un

aminocido, a travs del tRNA ser incorrecto

Substitucin de bases

Mutaciones silenciosas
No todas las mutaciones en los genes que

codifican protenas causan cambios en las

protenas.
Ejemplo: El DNA
que codifica exclusivamente un codon de tirosina
sufre una mutacin
UAC

UAU

Codn de tirosina

Mutaciones con sentido errneo

Cambio en la primera o segunda base del triplete
conducen con mucha mas frecuencia a cambios
significativos
en la protena.
Ejemplo

UAC

AAC

Cambio en la protena de tirosina por asparagina

El sentido qumico (secuencia de aminocidos) del

polipptido resultante ha cambiado

La protena puede ser inactivada o mostrar actividad

reducida

Mutaciones sin sentido

La sustitucin de origen a

un codn de terminacin,
generara la
terminacin
prematura de la traduccin y
por tanto una protena
incompleta

Mutaciones por desfase

Lectura cdigo gentico. Bloques de tres bases

Delecin o insercin de una base origina una

desfase en el marco de lectura

Traduccin del gen alterado

Mutgenos
Mutgenos qumicos
Anlogos de bases que se parecen estructuralmente
a las bases pricas y pirimidnas del DNA.
Apareamiento errneo
La replicacin ocurre normal
Generan errores de copia e incorporacin de una

base equivocada en la cadena copiada.

La siguiente segregacin de la cadena revela la
mutacin.

Mutgenos qumicos
Agentes alquilantes: nitrosoguanidina
Reaccionan directamente con el DNA originando
cambios qumicos en una o otra base.
Apareamiento errneo
Cambio directo

Mutacin por radiacin

Induccin de dmeros de

pirimidina en el DNA.
Unin covalente de dos

bases
pirimidnicas
adyacentes.
Insercin

de
un
nucletido
incorrecto
durante la replicacin

Mutgenos
Mutgenos biolgicos

Mutagnesis por transposn

Los genes se mueven de una lugar a otro del genoma.
Suceso que ocurre a frecuencia de 10-5 10-7 por
generacin.
La transposicin de genes esta ligada a la presencia de
elementos transponibles.
- Secuencias de insercin: segmentos cortos de DNA que
pueden integrarse en sitios especficos del genoma.
- Transposones: Segmentos mas largos de DNA y llevan
otros genes o grupos de genes entre dos secuencias de
insercin idnticas

 A. La trasnposasa

genera cortes en las

cadenas de DNA en los
extremos del elemento
transponible y del sitio
diana.
B. El sitio diana se liga
al elemento
transponible

 C. Ocurre nuevos

cortes antes de la
replicacin y el
elemento transponible
del DNA donador se
pierde
D. La reparacin

conduce a la
duplicacin del sitio
diana y finalizacin de
la transposicion.

 E. En la transposicin

replicativa, Se duplica y
la nueva copia se
inserta en otra regin.
F. estas molculas se

separan

Mutagnesis dirigida
Son mutagnesis en sitios especficos del genoma.

Se realiza mediante el aislamiento y la determinacin de

una secuencia del DNA contenido en un gen especifico y

se construye una forma modificada de este gen
cambiando una base o una serie de bases.
El DNA modificado puede insertarse en una clula

receptora y seleccionar mutantes.

Se utiliza para estudios de estructura y funcin de

enzimas y protenas

Mutgenos qumicos y fsicos y sus modos de accin

Test de Ames
Mutaciones somticas conducen al cncer
Identificacin de carcingenos
Bacterias

Recombinacin del
DNA
Oportunidad de aumentar la
variabilidad

Recombinacin gentica
- Proceso fsico por el cual

molculas de DNA diferentes se

combinan.
- Ocurre en clulas eucariticas y
procariticas.

Recombinacin gentica
Es el proceso por el que los elementos genticos

contenidos en dos genomas separados se juntan en

una unidad.
Surgen nuevas combinaciones de genes
Llevar a cabo alguna funcin nueva, tambin pueden
dar como resultado la adaptacin a cambios
ambientales.
Cambios mayores en la clula (genes, grupo de
genes)

Etapas del proceso

Rompimiento del DNA homlogo, intercambio y

reunin de hebras.

Rompimiento y reparacin de las hebras, crea

productos recprocos.

Eventos

de recombinacin pueden ocurrir en

cualquier parte de la hebra.

 Precisin en el intercambio porque no hay

prdida o ganancia de nucletidos, lo cul

previene la mutacin.

Transferencia de un pequeo segmento de

informacin de un cromosoma homlogo al otro

puede crear un rendimiento desigual de dos
alelos diferentes.

 Molculas

homologas
de DNA se emparejan e
intercalan segmentos de
DNA.

El

mecanismo implica
rotura y unin de
segmentos apareado.

SSB: Protena de unin

a cadenas sencillas y
protena
RecA.
Formacin de complejo
que
facilita
el
apareamiento con una
secuencia

 Invasin

de cadena. El
apareamiento puede ocurrir
a lo largo de cientos o miles
de pares de bases.

En el apareamaiento puede

ocurrir
intercambio
molculas homologas
DNA.
Formacin
intermediarios

de
de
de

Las dos cadenas parentales

parecen
haber
sido
cortadas y empalmadas una
con la otra. DNA ligasa

Recombinacin gentica en Procariotas

Se puede observar porque se trasfiere fragmentos

de DNA homlogo desde un cromosoma donador a

una clula receptora.
Transformacin: Se supone que el DNA se
encuentra libre en el medio.
Transduccin: la transferencia del DNA donador
esta mediada por un virus.
Conjugacin: la transferencia implica un contacto
clula - clula y la presencia de una plsmido
conjugativo

Transformacin gentica
Proceso por el cual el DNA libre se incorpora en una
clula receptora y lleva a cabo un cambio gentico

Solo se transfiere de una clula a otra una pequea

porcin de genes

Competente: una clula que es capaz de tomar una

molcula de DNA y ser transformada.
Capacidad heredable. Propiedad gentica
La competencia est regulada y hay protenas

especiales que juegan un papel en el transporte y

procesamiento del DNA.
Protena de membrana de unin al DNA
Autolisina de la pared celular
Nucleasas

Clulas competentes fijan mucho mas DNA que las

no competentes

Incorporacin DNA
Penetracin en las clulas
Incorporacin de DNA mientras que la cadena
complementaria
resulta
degradada
simultneamente

Procariotas se
naturales.
Gram positivos
Gram negativos

transforman

en

condiciones

Integracin del DNA

transformante
a.

Fijacin del DNA libre

por una protena de
unin del DNA ligada a
la membrana.

b.

Paso de una de las dos

cadenas a la clula
mientras la actividad
nucleasa degrada la
otra

Integracin del DNA

transformante
c. La cadena sencilla
dentro de la clula
se une a protenas
especificas.
Recombinacin con
regiones homologas
mediante la protena
RecA
d. Clula transformada

Transduccin
Se transfiere el DNA de una clula a otra por medio
de virus
Transduccin generalizada
Un DNA circular que puede proceder de cualquier
porcin del genoma de un hospedero, pasa a formar
parte del DNA de la partcula vrica madura en lugar
del genoma del virus

Transduccin generalizada
Se puede transferir cualquier marcador gentico

desde el donador al receptor.

Salmonella typhimurium con el fago p22
La clula infectada por el virus muere por rotura al

liberarse las nuevas copias virales

Inicia cuando la poblacin de bacterias sensibles se
infectan con un fago. Inicio del ciclo ltico.
Enzimas

responsables del empaquetamiento del DNA vrico en el

bacteriofago, a veces introducen DNA del hospedador en forma accidental.
Partcula transductora

Transduccin
Se transfiere el DNA de una clula a otra por medio de
virus
Transduccin especializada
El DNA de una regin especifica del cromosoma del
hospedador se integra directamente en el genoma del
virus, normalmente reemplazando algunos de los
genes vricos

Transduccin especializada
Permite la transferencia de DNA de una bacteria a

otra con una frecuencia baja pero eficiente.

Una pequea regin de un cromosoma bacteriano
se replica independientemente del resto
Cuando una clula resulta lisogenizada por lambda,

el genoma del fago se integra en el DNA del

hospedador en un sitio especifico

Transduccin de los
genes de galactosa por
el fago lambda de E. coli

Conjugacin
bacteriana
Apareamiento

Requiere contacto clula-clula.

Es un mecanismo que esta codificado en un

plsmido. Este transfiere una copia de si mismo

al nuevo hospedador.
Requiere de una clula donadora que contiene
un tipo particular de plsmido y una clula
receptora que carece de el.
Se pueden movilizar otros plsmidos o el
cromosoma del hospedador

Plsmido
Son elementos genticos

que
se
replican
independientemente del
cromosoma
del
hospedador
No
tiene
forma
extracelular y existen
dentro de las clulas
como cidos nucleicos.
Circulares y lineales
1000 mas de 1000000
pb
Plsmidos de resistencia
(antibiticos e inhibidores

Mecanismo de
transferencia del DNA
Se requiere sntesis de DNA para que tenga lugar la

transferencia del DNA.

Una de las cadenas de DNA deriva de la clula

donadora y la otra se sintetiza de nuevo en el

receptor durante el proceso de transferencia

Bibliografa
Madigan, M. T; Martinko, J. M. & Parker, J. Brock:

Biologa de los microorganismos. Decima edicin.

Prentice Hall. 2003.
Lodish, H.; Berk; Maitsudaira; kaise; Krieger;

Scott; Zipursky & Darnell. Molecular Cell Biology.

Fifth Edition. W H Freeman & Co. 2003.