UNIVERSIDAD SAN PEDRO

VICERRECTORADO ACADMICO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGA MDICA

VIROLOGA

Clase 5: Tcnicas de Diagnstico

Generalidades, Toma de muestras, Aislamiento Viral

Hernn Daniel Cornejo Pacherres.

Bilogo Microbilogo

 MICROSCOPA ELECTRNICA

AISLAMIENTO VIRAL

DETECCIN DE ANTGENOS VIRALES

DETECCIN DE ANTICUERPOS

DETECCIN DE GENOMAS VIRALES

ENSAYOS

VIROLOGICOS

CINETICA DE ANTIGENOS Y ANTICUERPOS EN UNA

INFECCION VIRAL
reinfeccion

Titulo de Ac en suero

VIRUS

Periodo de
Perodo
incubacin enfermedad

Periodo
convalesciente

Signos y
Sintomas

Ventana
tana
inVen
munologica

inmunolgica

Tiempo en semanas

CADENA DEL DIAGNSTICO VIROLGICO

Decisin del estudio: En base a la evolucin clnica investigacin viral

Obtencin de la muestra:

Envio de la Muestra: Inmediatamente, en condiciones de

bioseguridad

Metodologia de laboratorio:

Mtodos Directos
Mtodos Indirectos

Interpretacion de los resultados:

Integracin de datos clnicos,

epidemiolgicos y de
laboratorio.

Qu ?
Cundo ?
Cmo ?

Qu muestra clnica solicitar para el aislamiento viral?

Muestra clnica

Agente

Sndrome asociado ms
importante

Aspirado NasofarngeoAspirado
Lavado Nasal
Hisopado nasal y/o farngeo

Enterovirus
Sarampin
Rubeola
Citomegalovirus
Virus respiratorio (IA, IB, VRS,
Ad, etc)

Materia Fecal

Enterovirus
Rotavirus, Adenovirus,
V.Nonwalk,
Calicivirus,Coronavirus
Citomegalovirus
Adenovirus

Encefalitis
Enfermedad eruptiva
Enfermedad eruptiva
Infeccin congnita
Infecciones respiratorias altas y
bajas
Encefalitis
Diarrea infecciosa aguda

Orina

Muestra de lesin
Sangre

Liquido cefalo raquideo

Infeccin congnita
Cistitis

Virus Herpes simplex tipo 1 y 2

Virus Varicela Zoster
HIV 1 2
HTLV I II
Epstein Barr
Virus Junin

Eruptiva Vesicular

Enterovirus
Virus Herpes simplex tipo 1 y 2
CMV
Sarampin

Encefalitis
Encefalitis
Encefalitis
Encefalitis post eruptiva

SIDA
Leucemia a clulas T
Mononucleosis infecciosa
Fiebre hemorragica Argentina

DIAGNOSTICO VIRAL
AISLAMIENTO VIRAL
Protenas (Ag virales)

PRESENCIA DE
VIRUS

DETECCIN
Acidos nucleicos(ADN,ARN)

OBSERVACION DIRECTA
DE PARTICULAS VIRALES

RESPUESTA INMUNE
DEL HUESPED

INMUNOGLOBULINAS

(IgM, IgG, IgA)

AISLAMIENTO VIRAL
SUSTRATOS PARA EL CULTIVO DE VIRUS

ANIMALES DE LABORATORIO

HUEVOS EMBRIONADOS

CULTIVOS CELULARES

AISLAMIENTO VIRAL
Se basa en la capacidad infectiva del agente infeccioso presente en la
muestra

Huevos embrionados

Lesiones de Membrana
Estudio de lquidos y tejidos

Animales

Enfermedad o muerte

Cultivos Celulares

Efecto Citoptico
Produccin de Hemaglutininas
Interferencia

(primarios, lnea contnua)

El aislamiento viral NO ES un mtodo de diagnstico rpido en la rutina de

laboratorio, ya que necesita de cierta infraestructura y condiciones (tiempos
de cultivo, pasajes en ciego, condiciones de la muestra) para su realizacin.

CABINA DE FLUJO LAMINAR

El manejo de los cultivos celulares,
el cultivo de virus y el procesamiento
de muestras para aislamiento viral
debe realizarse en cabinas de seguridad.

ESTUFA DE CULTIVO

Los cultivos celulares se mantienen en estufas

de cultivo a 37 C, con atmsfera de CO2
y humedad.

Fuente de luz

MICROSCOPIO PTICO
INVERTIDO

Mediante el microscopio invertido

se controla diariamente el crecimiento
de los cultivos celulares.

Tambin se lo utiliza para visualizar

el efecto citoptico (ECP) de los virus
sobre las clulas.

Objetivos

Aislamiento viral
en huevos embrionados

Inoculacin de ratn recin nacido

para aislamiento viral

Cultivos Celulares
Efecto Citoptico

Hemadsorcin

CULTIVOS CELULARES

Cultivo de la lnea celular MDBK

20X

Cultivo de la lnea celular MDBK

coloreado con Giemsa 20X

VISUALIZACIN DE EFECTO CITOPTICO (ECP)

Monocapa de MDBK normal

20X

ECP del virus de la diarrea viral bovina

(BVDV) sobre moncapa de MDBK 20X

Clulas teidas con Giemsa

IDENTIFICACION
Luego del aislamiento del agente viral se procede a identificarlo por mtodos
inmunolgicos y/o moleculares

Inmunofluorescencia,
Inmunoperoxidasa

Inhibicin de la Hemoaglutinacin
Test de Neutralizacin

EIA
Deteccin de Ac. Nucleicos