PROCESO BIOTECNOLOGICO.

TIPOS
DE SUBSTRATOS(MEDIOS DE
CULTIVO INDUSTRIALES).
PREPARACION Y TRATAMIENTO DE
SUBSTRATOS .ESTERILIZACION,
FILTRACION DE AIRE

BIOTECNOLOGIA
Uso integrado de la bioqumica, microbiologa
y de la ingeniera qumica con el fin de
obtener productos tiles y aplicaciones
tecnolgicas de los microorganismos, cultivos
celulares y otros sistemas biolgicos.
Esta es la definicin ms adecuada a los
contenidos de la microbiologa industrial y
alimentaria.

Biotecnologa tradicional o
clsica (Industrial)
Es la rama de la biotecnologa
que obtiene produccin a gran
escala, con costes reducidos.
Sus principales productos son
alimentos o ingredientes
saborizantes, alcohol
industrial, antibiticos y cido
ctrico. Se trata de produccin
en toneladas .

Nueva biotecnologa o
biotecnologa fina
Se concentra en la fabricacin
de productos al detalle.
Produccin de tan solo
kilogramos al ao, pero
son productos de un gran
valor aadido, como pueden
ser insulina, interfern,
enzimas,... Se requiere el
uso de tcnicas ms nuevas de
ingeniera gentica y de la
fusin de clulas para obtener
organismos capaces de
generar los productos
deseados.

PROCESO BIOTECNOLOGICO
En la prctica biotecnolgica para el cultivo de
microorganismos aerbicos se utilizan los
mtodos por cultivo en superficie y por cultivo
sumergido. Por el mtodo superficial los
microorganismos se cultivan en medios (slidos:
afrecho, salvado , humedecidos).
El mtodo por cultivo sumergido se utiliza para
microorganismos aerobios y anaerobios. Los
cultivos en este caso se desarrollan en todo el
medio lquido nutritivo en biorreactores.
El crecimiento de los microorganismos por el
mtodo sumergido puede peridico o contnuo.

Flujo general

Una produccin biotecnolgica puede manifestarse en forma de etapas ,

consecutivas:
Preparacin del medio de cultivo

Obtencin del material de siembra (cepas)

Desarrollo productivo del cultivo en condiciones superficiales o por

cultivos sumergidos

Extraccin u obtencin del Producto final

Cada concreta produccin biotecnolgica, tiene sus particularidades
distintas. Estas se ponen de manifiesto : en la composicin de los medios
nutritivos utilizados , en los mtodos de su preparacin, condiciones de
cultivo de produccin y en los mtodos de extraccin del producto final.
Igualmente estas particularidades no cambian el esquema general del
proceso biotecnolgico .

PRINCIPALES SUBSTRATOS

Uno de los principales factores , que influyen en el rpido crecimiento de

los microorganismos y la sntesis mxima por ellos de diferentes sustancias
activas biolgicas, son los medios de cultivo (substratos). Para elegir el
medio nutritivo se debe tomar en cuenta los diferentes compuestos
nutritivos en forma balanceada, necesarios para que el microorganismo
forme sus clulas en crecimiento y sintetize completamente el producto
final. Para un crecimiento y desarrollo normal de los microorganismos en
el medio nutritivo deben de existir todos los elementos, de los cuales se
forma la clula. Para muchos microorganismos, para su crecimiento en
uno u otro medio nutritivo necesita condiciones complementarias:
temperatura
-determinada concentracin de iones de H (pH).
-potencial oxido reductor del medio;
-La relacin existente necesaria entre diferentes iones.
Algunos microorganismos con signos de alteraciones hereditarias
(auxtrofos, mutantes) necesitan otros factores de crecimiento que ellos
no pueden sintetizar: aminocidos, purinas, vitaminas y otros.

Medios de cultivo
(carbohidratos,fuentes de C)
-Melazas. Subproducto de la industria azucarera, son los restos del
refinado del azcar. Son una de las fuentes ms baratas de
carbohidratos. Adems de una elevada cantidad de azcares
contienen sustancias nitrogenadas, vitaminas y elementos traza. En
cualquier caso, su composicin vara en funcin de la materia prima
usada para la obtencin del azcar, las condiciones climticas, la
localidad y el proceso usado en la industria azucarera.
- Extracto de malta. Es el extracto acuoso de la cebada malteada. Se
trata de un sustrato excelente para muchos hongos, levaduras y
actinomicetos. El extracto seco de malta contienen entre un 90 y un
92 % de carbohidratos, concretamente hexosas, que son glucosa y
fructosa, disacridos como la maltosa y la sacarosa, e incluso
trisacridos como la maltotriosa.

Las sustancias nitrogenadas en el extracto de malta incluyen

pptidos, protenas, aminocidos, purinas, pirimidinas y vitaminas. La
composicin de aminocidos vara en funcin del grano usado, pero
la prolina siempre constituye ms de un 50%. Uno de los problemas
que presentan los sustratos ricos en azcares es lo que se conoce
como reaccin de Maillard, que se da a bajo pH y elevadas
concentraciones de azcares reductores. Los grupos NH de las
aminas, aminocidos y protenas reaccionan con los grupos CHO de
los azcares reductores, lo que resulta en la formacin de productos
de condensacin de color tostado, empeorando el aspecto del
producto y que no pueden ser usados por los microorganismos,
restando as nutrientes.
- Almidn y dextrinas. Pueden ser metabolizados directamente por
los organismos productores de amilasas. El almidn ha adquirido
importancia en la produccin de etanol.

Melaza de caa de azcar

Extracto de malta

Almidn de maz

Dextrina

 - Lquidos sulfticos de las papeleras. Se trata de productos

residuales que contienen azcar de la industria del papel.
Los lquidos sulfticos de conferas contiene entre el 2 y 3 %
de azcares, de los cuales el 80 % son hexosas y el resto
pentosas.
- Celulosa. Debido a su gran disponibilidad y bajo coste, la
celulosa est siendo utilizada como sustrato de
fermentacin. Proviene de la paja, restos de mazorcas,
papel. A menudo no puede ser utilizada directamente
como fuente de carbono, por lo que se deber hidrolizarse
en primer lugar, ya sea qumica o enzimticamente, dando
el jarabe de glucosa ,que se usa en la produccin de etanol,
butanol, acetona e isopropanol.

Medios de cultivo (fuentes de carbono

diferentes a los carbohidratos)
- Aceites vegetales, como aceite de soja, de algodn o
de palmera. Son usados como ingredientes
secundarios, cuando se usa ya una fuente de
carbohidratos como principal aporte de energa.
- Etanol. Es el producto de la fermentacin del almidn
sacarificado o de la celulosa y puede ser usado como
nica fuente de carbono o como fuente
complementaria para muchos organismos.
- Alcanos. Alcanos de 12 a 18 C son rpidamente
metabolizados por muchos microorganismos. Estos
alcanos son residuos del refinado del petrleo y su uso
como alternativa a los carbohidratos depende de su
precio.

Medios de cultivo (fuentes de N)

En lo que respecta a los sustratos usados como fuentes de nitrgeno, en
muchos procesos industriales se usan los siguientes: in amonio,
sales, urea o amonaco gaseoso.
- Lquido de maceracin del maz. Se trata de un subproducto de la
produccin de almidn a partir del maz. El extracto concentrado
tiene un 4% de N y numerosos aminocidos, como son: Ala, Arg, Glu,
Ile, Tre, Val, Fenil Alanina, Met y Cis.
- Extracto de levaduras. Es un sustrato excelente para muchos
microorganismos. Se produce a partir de levaduras de panificacin,
induciendo su autlisis a 50 55 C o por plasmlisis en alta
concentracin de NaCl. Contiene aminocidos, pptidos, vitaminas
solubles en agua y carbohidratos. El glucgeno y la triohalosa se
hidrolizan a glucosa durante la produccin del extracto.
- Peptonas. Se trata de hidrolizados de protenas, de manera que
contendr aminocidos y pptidos. Pueden ser usadas por muchos
microorganismos, pero son bastante caras para la produccin
industrial, aunque pese a este su uso est muy extendido. Las
peptonas pueden tener dos orgenes: 1.- Protenas animales: Casena,
gelatina, queratina. 2.- Protenas vegetales: Semillas de cacahuete,
harina de soja, semillas de algodn y girasol. Todo esto an retiene
mucho nitrgeno, aun siendo subproductos de otras industrias.

Extracto de levadura

Sustancias minerales que contienen N

Frecuentemente se utilizan sales del cido sulfrico, clorhdrico y

ntirico. Como lo demuestra la prctica, el sulfato de amonio es el
mejor para la biosntesis de varios compuestos. En las sustancias
que contienen N amoniacal, el in amonio se encuentra en
combinacin con el anin de algn cido por ejemplo: sulfrico o
fosfrico. La necesidad de los microorganismos en el medio de S y
P es menor que el N, por eso con la utilizacin de N en el medio se
van a acumular aniones y aumentar la acidez del medio . Para
evitar esto en el procesos de cultivo de los microorganismos en el
medio se agrega carbonato de calcio o se lleva a titulacin con
soda.
La influencia de las fuentes de N depende espontneamente no
slo de la fuente de N, sino de toda la composicin del medio. Un
significativo valor tiene la relacin de las cantidades de N y C
existentes en el medio. Su dosificacin es necesario regularla en
relacin con las concentraciones ptimas de las sustancias ms
importante en determinado cultivo. Para cada cepa productora
este valor ser diferente.

PREPARACION DE MEDIOS DE
CULTIVO INDUSTRIALES

 Para la preparacin de un medio nutritivo a nivel industrial

primero se disuelve el azcar o sales, luego se suspenden los
componentes no solubles como las harinas o carbonato de calcio.
La materia prima que contienen almidn previamente se
homogeniza con poca agua. Para la aceleracin estos procesos se
realizan en aparatos pequeos con agitadores y luego las
soluciones se mezclan en un tanque con fondo plano, que posee
un sistema de difusin para el ingreso de vapor . El concentrado
del medio de cultivo, que viene a ser la tercera parte del volumen
necesario, para su disolucin final y suspensin se calienta con
vapor hasta 70-80 C. A esta temperatura no ocurre la
descomposicin de los componente termolbiles del medio. La
preparacin de medios ms concentrados dan lugar a la
posibilidad de utilizar mezcladores de menor capacidad. La
condicin necesaria para una esterilizacin exitosa del medio de
cultivo es la homogenizacin de sus componentes slidos y su
disolucin. Partculas grandes no disueltas pueden conservar
microorganismos patgenos, los que pueden infectar al medio de
cultivo. La velocidad de disolucin de las sustancias en el lquido
es proporcional a la potencia del mezclador . Estos deben estar
suministrados con tabiques corta-corrientes.

ESTERILIZACION DE MEDIOS DE
CULTIVO INDUSTRIALES

Esterilizacin peridica

Esterilizacin contnua

Esterilizador (sectores de
mantenimiento y enfriamiento)

Esterilizador tipo columna

Variacin de temperatura de un
volumen de sustrato durante la
esterilizacin

 Si es necesario someter al medio a una esterilizacin

cclica, entonces esta operacin se puede realizar en el
biorreactor. Para esto el medio y la maquinaria se
esterilizan al mismo tiempo. Se utiliza el
calentamiento combinado con vapor saturado a travs
de una chaqueta o serpentn. Para la esterilizacin
cclica, se ha establecido que la ms adecuada y
econmica es mantener la temperatura a 121C, lo cual
corresponde a la presin de vapor saturado de 100
KPa. En condiciones comunes los medios nutritivos se
le mantiene a la temperatura de esterilizacin durante
30 a 40 minutos. El ciclo completo de calentamiento
mantenimiento y enfriamiento para reactores grandes
63 m3 se realiza en varias horas.

 El esterilizador contnuo est compuesto por secciones:. Calentador

3 , mantenimiento 4 y enfriador 5. En este sistema se puede
alcanzar temperaturas ms elevadas . Para los medios libres de
partculas slidas suspendidas el mantenimiento de la temperatura
a un nivel de 150-160 C garantiza una esterilizacin instantnea.
En esto las variaciones qumicas que ocurren en el medio, no son
significativas, por lo que se les puede no tomar en cuenta. Si es que
en el medio existen partculas slidas suspendidas entonces la
temperatura ptima de esterilizacin debe ser menor ya que se
requiere un tiempo adicional para que el calor penetre en el
interior de estas partculas. El ms difundido, en estos casos es la
temperatura de esterilizacin de 135C y el tiempo de
mantenimiento es de 5 a 15 min. En todos los casos de
esterilizacin contnua el enfriamiento del medio se realiza en
intercambiadores de calor del tipo tubo en tubo o por el sistema de
placas ( flujo en sentido contrario) y el calentamiento mediante
inyeccin de vapor saturado. El uso econmico del vapor puede ser
alcanzado aadiendo al sistema un nivel un grado de regeneracin
especial para calentar previamente el medio no esterilizado..

LIMPIEZA Y ESTERILIZACION DEL

AIRE

Esquema tecnolgico de la limpieza,

esterilizacin del aire

Filtros

La obtencin de aire comprimido estril que se entrega en la aireacin, la

preparacin y esterilizacin del medio nutritivo y la preparacin de la
maquinaria,son operaciones que determinan los ndices de calidad y cantidad del
proceso de biosntesis, por eso la formalizacin de la maquinaria y el rgimen de
trabajo dan lugar a exigencias elevadas.
Durante el desarrollo de los microorganismos en condiciones sumergidas es
necesario alimentar en forma contnua de aire estril a los fermentadores, en la
aireacin del lquido de cultivo. El aire entregado al fermentador,no solamente
suministra al cultivo en crecimiento: de oxgeno sino que extrae productos
gaseosos del metabolismo y el calor fisiolgico que segregan los microorganismos
en el proceso de desarrollo, permite alcanzar uniformidad de la suspensin
microbiana, aumenta la velocidad de la transmisin de masa y mezcla del medio
nutritivo lquido. La limpieza y esterilizacin de aire se logra por varios mtodos.
Se utilizan mtodos de limpieza gaseosa o el uso de antispticos (fenol y mercurio
contenidos en compuestos) , temperaturas elevadas y bajas, radiacin ultravioleta,
radiacin ionizada. Ejemplos de la utilizacin industrial de antispticos, de
temperaturas altas y bajas y de otros factores son poco tiles. Son complejos
sistemas poco econmicos y por la elevada estabilidad de las esporas y conidios a
la temperatura elevada y a la radiacin ionizada. En los procesos de sntesis
microbiolgica el aire, que ingresa para la aireacin, debe estar limpio en
99,999999% de partculas extraas y de microorganismos de medidas hasta 1
micra.

Biorreactor , fermentador con ingreso

de aire filtrado