Sunteți pe pagina 1din 51

Dra.

Milena Snchez Villacorta

Diagnostico etiolgico se basa en el empleo de


diversas tcnicas para la deteccin del
microorganismo o del proceso inmune frente a
ellos.
Depende de la calidad de muestra recibida.
UNA TOMA MAL REALIZADA, RECOJIDA O
TRANSPORTADA PUEDE IMPOSIBILITAR LA
DETECCION DE MICROORGANISMO CAUSAL.

1)
2)
3)
4)
5)

Examen Directo macroscopico.


Examen Directo Microscpico.(examen en
fresco y tinciones).
Cultivos y estudios de sensibilidad.
Tcnicas utilizadas en la deteccin de
anticuerpos.
Tcnicas utilizadas en deteccin de
componentes estructurales y metabolitos
microbianos.

Proporciona

informacin del aspecto


purulento-sangre-moco-.
Si contiene parsitos visibles.

Reaccin

inflamatoria: leucocitos.
Calidad de muestra: esputo y muestras de
herida tomadas con hisopos.
Movilidad y morfologa: secrecin vaginal.

Tratamiento con KOH: tia y onicomicosis.


Concentracin de las muestras: parasitos en
heces.
Examen en fresco con tinta china:
cryptococcus spp en LCR.
Tinciones:
- Tincin Gram.
- Tincin Ziehl-Neelsen.
- Ziehl Neelsen Modificado: Nocardia,
cryptosporidium, isospora, cyclospora,
sarcocystitis.

La

tincin de Gram se utiliza para diferenciar


entre los diferentes tipos de bacterias sobre
la base de las propiedades bioqumicas de sus
paredes celulares. El mtodo es el nombre
de cientfico dans Hans Christian Gram
(1853 -1938) , quien desarroll la tcnica con
el fin de distinguir entre dos causas
bacterianas de la neumona ( Streptococcus
pneumoniae y Klebsiella pneumoniae )

Es til para iniciar tratamiento emprico para las


infecciones bacterianas hasta tener cultivos y / o
datos moleculares .
La tincin Gram tambin permite la
visualizacin de levaduras .
Algunos organismos son gram variables:
especies Gardnerella vaginalis y Mobiluncus .
Estos organismos estn asociados con la vaginosis
bacteriana y son tcnicamente clasificados como
" gram-positivos . " Adems , algunos organismos
gram-negativos tales como las especies de
Acinetobacter tienden a retener cristal violeta y
pueden a veces aparecer gram variable .

Algunas

especies bacterianas no pueden ser


visualizados por tincin de Gram , ya sea
porque carecen de una pared celular ( por
ejemplo , especies de Mycoplasma ) o porque
su estructura de la pared celular no retiene
los reactivos de tincin de Gram (por
ejemplo , Chlamydia y Mycobacterium
especies ; el ltimo puede tener un "
moldeado " apariencia grampositivos )
Algunas especies bacterianas tambin se
tien de color prpura con la tincin de
Gram (Candida )

Sitios

estriles:
LCR, lquido pleural, lquido pericrdico ,
lquido sinovial y lquido peritoneal .
La sensibilidad de la tincin de Gram se
puede aumentar por centrifugacin citospina
antes de la tincin (lquido cefalorraqudeo
en particular )

Sitios no estriles : los que los organismos que


colonizan (" flora normal ") pueden estar
presentes. Los ejemplos incluyen el esputo,
exudados farngeos, muestras tomadas de
heridas y frotis genitales .
Estas muestras tambin contienen generalmente
clulas humanas tales como clulas epiteliales y
leucocitos . Las clulas humanas se tieron por
la safranina.
Una muestra de esputo de alta calidad tiene un
alto nmero de glbulos blancos y pocas clulas
epiteliales.
Interpretacin de la tincin de Gram de sitios no
estriles requiere experiencia y conocimiento de
la flora normales esperados .

Clusters - cocos grampositivos en racimos: Staphylococcus ,


aunque la tincin de Gram no puede diferenciar S. aureus de
otras especies de estafilococos.
El test de la coagulasa para la diferenciacin de S. aureus de
otras especies de estafilococos .
Otros grampositivos en racimos: Micrococcus , Pediococcus ,
Aerococcus y especies Stomatococcus .
Cadenas - cocos grampositivos en cadenas por lo general indica
Streptococcus o Enterococcus especies , aunque la tincin de
Gram no puede distinguir entre los estreptococos viridans ,
estreptococos hemolticos o enterococos .
Otras especies: Leuconostoc, Abiotrophia , Granulicatella y
gnero Gemella distintos de G. haemolysans . Los anaerobios
tales como Peptostreptococcus , Finegoldia y Peptococcus spp.
Diplococos:es patognomnico de S. pneumoniae ; este organismo
tambin puede estar dispuesto en cadenas cortas . Bacterias
individuales aparecen clsicamente ligeramente alargada y
dispuestas de extremo a extremo.

Neisseria

meningitidis o Neisseria
gonorrhoeae. Tpicamente estas especies
estn dispuestos como pares ("diplococos")
Otros cocos gram-negativos incluyen
Moraxella catarrhalis , otras especies de
Neisseria y de las especies de Veillonella
anaerbicas.
Especies de Acinetobacter tambin pueden
tener este aspecto , aunque tambin puede
retener violeta cristal y por lo tanto
aparecer gram-positivas.

Formaciones bacilos grampositivos Corineformes suelen ser


pleomrfico o " en forma de maza " y dispuestos en
paralelo (empalizada ) y / o en los arreglos se asemejan a
"letras chinas" . Este aspecto es tpico de especies de
Corynebacterium ; Especies de Propionibacterium y
Listeria.
" Box- car" forma - Caja de coches en forma de bacilos
gram-positivos suelen indicar especies de Clostridium
anaerobios o especies de Bacillus o Lactobacillus
aerbicos. Estos bacilos tienen forma de " box- car" con
extremos ajustado y lados paralelos .
La presencia de bacilos gram positivas o gram variable en
muestras de tejidos blandos sin glbulos blancos visibles
debe plantear la sospecha de gangrena gaseosa .
Bifurcacin - Bifurcacin bacilos gram positivas por lo
general indica ya sea la especie de Nocardia aerbicas o
anaerbicas la especie Actinomyces . Especies de
Streptomyces tambin pueden tener esta apariencia.

No pueden distinguir confiablemente entre la mayora de


las especies aerbicas y anaerbicas de bacilos gramnegativos .
Sin embargo, algunos informes describen bacilos
gramnegativos como fusiforme , cocobacilos gramnegativos
curvos o pequeo.
Fusiforme - bacilos gramnegativos con extremos afilados:
Fusobacterium nucleatum, un anaerobio, y las especies
Capnocytophaga. Algunas bacterias gram-negativas pueden
llegar a ser ms largo y ms filamentoso en el contexto de
la terapia con antibiticos .
Curvos- bacilos gram-negativos es un aspecto tpico de las
especies de Vibrio . Especies de Campylobacter y
Helicobacter tambin pueden aparecer curvado o "S.
Pequeo cocobacilos gram-negativa corresponde a un
nmero de organismos incluyendo Haemophilus y Brucella.

- Tincin auramina y tincin de rodamina:


bacilos cido alcohol resistente.
- Tincin de naranja de acridina: Bacterias
sin pared.
- Tincin de Azul de O-toluidina:
pneumocystis carinii.
- Tincin plata metenamina: Pneumocystis
carinii.
-Tincin con azul de lactofenol: micologa.
- Tincin con calcofluor: hongos,
pneumocystis carinii, microsporidium spp y
quistes de amebas.

Tincin

tricrmica: Entamoeba y Blastocystis


hominis, helmintos,isospora belli.
Tincin Giemsa: paludismo, tripanosomiasis,
babesia, leishmania, toxoplasma y
pneumocystis carinii.
Tincin hematoxilina frrica: microfilarias en
sangre.
Tincin eosina: protozoos.
Tincin de anticuerpos marcados con
fluorocromos.
Tincin para microscopio electronico:
enteritis vrica, herpes varicela, pox virus.

CULTIVOS

DE BACTERIAS: La identificacin se
realiza utilizando diversas tcnicas:
- Tinciones
- Pruebas bioqumicas rpidas.
- Aglutinaciones sobre las colonias
- Pruebas bioquimicas complementarias.
- Cromatografa gas-lquido.
- Tcnicas moleculares

Las muestras de sitios estriles deben ser inoculadas en


medios de comunicacin de uso general enriquecidos ,
como la sangre o agar chocolate ; la mayora de los
patgenos bacterianos comunes crecen fcilmente en estos
medios slidos no selectivos . Las muestras de sitios no
estriles que pueden contener flora microbiana mixta
tambin deberan ser inoculadas en medios selectivos
como agar MacConkey u otros medios selectivos .
La morfologa de las colonias de un organismo dado puede
variar de acuerdo con el medio de agar utilizado y de las
condiciones de crecimiento . Las colonias se describen
sobre la base de su textura , tamao, forma , y color.Varios
patgenos comunes tienen un olor caracterstico.
Pruebas de banco son herramientas bioqumicas utilizadas
para determinar las especies de un patgeno crecido en la
cultivos: la coagulasa , catalasa y oxidasa

Test

de difusin o disco-placa
E Test.
Tcnicas de dilucin.
Pruebas especiales de sensibilidad.

La

mayora crece a 37C excepto


dermatofitos y mucor.
El tiempo es variable, debe cultivarse hasta
por 4 semanas.
La aparicin de resistencia ha impulsado
estudios de sensibilidad: sensibles, sensibles
dosis dependientes, resistente a fluconazol,
itraconazol.
:

Necesitan

para multiplicarse clulas vivas.


Cultivos celulares.
Se observa periodicamente buscando
evidencia de infeccin viral: efecto
citoptico.
El tiempo depende del virus.
Inmunofluorescencia con anticuerpos
monoclonales.
Shell vial: muestra centrifugada sobre una
monocapa celular en la inoculacin:16-48h,
CMV, VHS, Sarampion, adenovirus.

Cultivo

de leishmania spp: MO, lesiones


cutaneas, o biopsia heptica: NNN y
Schneider Drosophila.
Cultivo de Tricomonas vaginalis:
Cultivo de biopsia de cornea para Nargleria
fowleri y Acanthamoeba spp.
Cultivo de nemtodes: (Strongyloides
stercolaris) y e. hystoltica.
Cultivo de Trypanosoma cruzi: sangre: NNN

IgM: primeros en aparecer y desaparecer, no


atraviesan la placenta, la precencia de FR o ANA,
falsos positivos. Mtodo de ELISA.
IgG: Tardos puede persistir toda la vida,
incremento de ms de 4 veces, en3-4sem. De
diferencia se considera diagnstico. Atraviesan la
placenta. Aguda: IgG de baja avidez y Crnica:
IgG de alta avidez.
IgA:Respuesta ainfecciones de clulas con
actividad secretora respiratorio, digestivo y
genitourinario, marcador de fase aguda.
IgE: Mecanismo de defensa contra los helmintos.
IgD: No se conoce sus funciones ni su
participacin.

Reacciones

de aglutinacin y floculacin:

- Hemaglutinacin: Virus, influenza y rubeola,


falsos negativos por efecto Prozona: si hay alta
concentracin de Ac.,brusella, Echinococcus spp.
- aglutinaciones: Salmonella, Rickettsias.
- Floculacin: VDRL RPR
Reacciones de Presipitacin: La reaccin de un
Ag soluble con un Ac :complejo insoluble,
Inmunodiusin simple, inmunodifusin doble,
radial simple, doble en dos dimenciones y
contrainmunoelectroforesis.
Aspergillus, histoplasma, Coccidioides spp,
yparsitos: Echinococcus.

Reaccin de fijacin del complemento: Ag y complemento


titulado, muy laboriosa, y econmica.
Reacciones de Neutralizacin: Virus.
Radioinmunoanlisis:
Enzimoinmunoanlisis: Enzima-sustrato.: ELISA: efecto
Prozona.
Inmunobltting:
Weatern blot: separacin electrofortica
LIA (line inmuno-Assays), lectura ms clara, sangre total.
RIBA (Reconbinant Immuno-Blot Assay), VIH, HTLV, VHC,
VHS y borrelia.
Reacciones de Inmunofluorescencia: Treonema pallidum,
legionella, borrelia, CMV, VEB, VHS, VIH, varicela,
sarampion, plamodium,leishmania, tripanosona,
toxoplasma.

Tcnicas

Inmunolgicas: deteccin de Ag:


Inmunofluorescia directa, aglutinacin con
partculas de latex, enzimoinmunoensayo, y
la inmunocromatografa.
H. influenza B enLCR, Neisseria meningitides,
estreptococo pneumoniae, criptococo,
legionella, clostridium dificile, rotavirus,
adenovirus, virus respiraatorio sincitial,
giardia y cryptosporidium, aspergillus.

TECNICAS

ENZIMATICAS:
- Test de ureasa: H. pylori
- Deteccin de (1-3)-beta-D-glucano: hongos:
candida, Cryptococcus, aspergillus.
TECNICAS

MOLECULARES:
- Hibridacin: Neisseria gonorrhoeae, y
clamidea.,
- PCR: Clamydia, Mycobacterium
tuberculoso, MYCOPLASMA, Helicobacte
pylori, Borrelia, VIH, papiloma, VH A, VHB,
VHC, VHD,VHE Y VHG.

TIPO DE
MUESTRA

INDICACION
HABITUAL

SISTEMA DE RECOGIDA , VOLUMEN,


ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE

SANGRE
Hemocultivo
habitual

Infeccion severa, Sangre total


sepsis,
2-3 hemocultivos de 5-10ml
endocarditis
Si sospecha de endocarditis en la
solicitud

Hemocultivo
para Hongos

Sepsis en pac.
De riesgo:
hematologicos,
oncologicos,
cateter VC

Sangre total
Solicitar informacin al laboratorio
Advertir en solicitud que se mantenga
largo tiempo de incubacin.

Hemocultivo
para
microbacterias

TBC y
micobacteriosis
diseminada, VIH

Sangre total
Solicitar informacin al laboratorio.

TIPO DE
MUESTRA

INDICACION
HABITUAL

SISTEMA DE RECOGIDA , VOLUMEN,


ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE

Estudio de
portador de
SAMR

Frotis con torunda

Secrecin en
sinusitis

Frotis con torunda


El exudado nasal no es una muestra
optima, remitir aspirado sinusal.

Viriasis

Fortis con torunda especfica o lavado


nasal

Otros

Frotis con torunda

VIAS RESPIRAT.
Nasal

Orofaringe

Sospecha de inf. Frotis con torunda


Bacteriana(S.
pyiogenes)
Sospecha de
infcc. Virica
(CMV, Herpes)

Frotis con torunda y medio de


transporte de virus

TIPO DE
MUESTRA

INDICACION
HABITUAL

SISTEMA DE RECOGIDA , VOLUMEN,


ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE

Neumonia

Muestra de esputo; no saliva

TBC, otras
micobacterias

Conservar en nevera.
Remitir 3 muestras en 3 das separados

Esputo inducido:
neumonia por
Pneumocystis

Se deben procesar inmediatamente.


En la solicitud advertir que es esputo
inducido.

Jugo Gastrico

TBC,otras
micobacterias

El jugo gastrico se procesa


inmediatamente.

Aspirado
Bronquial

Muestra de
broncoscopia

1ml de aspirado o cepillado en medio


de transporte.

Aspirdo
Bronquial

Muestra de aspirado en frasco esteril

VIAS RESPIRAT.
Esputo

TIPO DE
MUESTRA

INDICACION
HABITUAL

SISTEMA DE RECOGIDA , VOLUMEN,


ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE

Gastroenteritis
Habitual.

Heces 1gr en frasco esteril, alternativa


torunda rectal, conservacin en
nevera.

Sospecha de
Clostridium
dificilie

Heces 1gr en frasco esteril,


Se debe procesar urgentemente.

Parasitosis
intestinal

Heces 1gr en frasco esteril,


Si se interesa parasitos especificos, se
debe peticionar en la solicitud; amebas,
cryptosporidium.
Remitir 3 muestras en 3 das separados.

HECES
Coprocultivo

Parasitos en
heces