TRANSFERENCIA DE LA INFORMACIN GENTICA:

TRANSCRIPCIN
Se denomina transcripcin al proceso de trasvase de
informacin, contenida en el ADN, a una molcula de
ARN. Constituye el primer paso en la expresin de los
genes y mediante esta ruta se sintetizan todos los tipos
de ARN que existen en las clulas.
A primera vista, las cadenas de ARN y ADN pueden
parecer similares, con un grupo OH en la posicin 2de
la pentosa y la sustitucin de la T por U como nicas
diferencias. Sin embargo, al contrario del ADN, la
mayora de los ARN son de cadena sencilla. Estas
cadenas se pliegan sobre s mismas, dando lugar a una
diversidad estructural mucho ms amplia que la
observada en el ADN, gracias a la cual el ARN es capaz
de asumir una amplia variedad de funciones celulares.

CARACTERSTICAS GENERALES DE LA
TRANSCIPCIN
Desde el punto de vista del mecanismo, la transcripcin
es semejante a la replicacin del ADN. Es una reaccin
de polimerizacin, se utilizan sustratos activados
(nuclesidos trifosfato), se necesita un molde (de ah el
nombre de sntesis de ARN dependiente de ADN), la
direccin de sntesis es tambin 5 3 y transcurre en
3 etapas: iniciacin, elongacin y terminacin.
Existen tambin una serie de caractersticas que
diferencian ambos procesos:
La transcripcin es un proceso monocatenario.
Con pocas excepciones, slo se transcribe una de
las cadenas del ADN. La situacin de los genes a
copiar puede localizarse en cualquiera de las dos
cadenas del ADN. Por convenio, a la cadena
utilizada como molde se la llama hebra molde,
antisentido, no codificante o hebra (-) y a la
cadena complementaria se la denomina hebra no
molde, con sentido, codificadora o hebra (+). La
doble cadena se escribe de izquierda a derecha
en el sentido 5 3 de la hebra codificadora. La
hebra codificadora del ADN tiene la misma
secuencia que la cadena de ARN transcrito
excepto que la timina sustituye al uracilo (Figura
1).

 Es un proceso selectivo. La transcripcin se limita a una porcin

del ADN. En una clula eucariota diferenciada, la parte del ADN
total que se transcribe es muy pequea. Incluso en los
organismos unicelulares, en los que prcticamente todas las
secuencias del ADN pueden transcribirse, en un momento dado
se transcribe mucho menos de la mitad de los genes. En
consecuencia, gran parte del inters por la transcripcin se
centra en los mecanismos utilizados para seleccionar
determinados genes y cadenas molde, puesto que esta
seleccin es la que gobierna en gran medida las capacidades
metablicas de una clula.
La transcripcin es un proceso reiterativo, puede repetirse
infinidad de veces durante la vida celular. A este respecto, existe
una gran variabilidad en cuanto a la frecuencia de transcripcin
de distintas regiones del ADN.
Es un proceso conservador. No afecta a la estructura del ADN.
No requiere cebador.

ARN POLIMERASAS
El descubrimiento de la ADNp y su dependencia de un molde de ADN fue
un estmulo para la bsqueda de una enzima que sintetizase ARN
complementario de un molde de ADN. Hacia 1960, cuatro grupos de
investigacin independientes haban detectado una enzima en extractos
celulares capaz de formar un polmero de ARN a partir de ribonucletidos
5-trifosfato. Investigaciones posteriores con la ARN polimerasa (ARNp)
purificada de E. coli contribuyeron a definir las propiedades fundamentales
de la transcripcin.
La ARNp realiza mltiples funciones en la transcripcin:
Busca en el ADN los puntos de iniciacin, tambin llamados secuencias
promotoras o, simplemente, promotores.
Desenrolla una parte de la doble hlice del ADN para producir un molde de ADN
de una sola hebra.
Selecciona el ribonucletido trifosfato correcto y cataliza la formacin del enlace
fosfodister. Este proceso se repite tantas veces como la enzima se desplace
unidireccionalmente a lo largo del molde de ADN. A este respecto, la ARNp es
totalmente procesiva: una nica molcula de ARNp realiza la transcripcin desde
el inicio hasta el final.
Detecta las seales de terminacin que indican dnde finaliza la transcripcin.
Interacciona con las protenas activadoras y represoras (factores de
transcripcin) que modulan en un amplio intervalo la velocidad de transcripcin.

La qumica de la sntesis del ARN tiene mucho en comn con la sntesis de ADN. La
ARNp elonga una cadena de ARN por adicin de ribonucletidos al extremo 3-OH
de la cadena y sintetiza el ARN en direccin 53. El 3-OH acta como nuclefilo,
atacando el fosfato del ribonucletido trifosfato entrante y liberando pirofosfato
(Figura 2). La reaccin global es:
(NMP)n + NTP (NMP)n+1 + PPi
ARN
ARN alargado

La ARNp requiere ADN para su actividad, siendo

ms activa con un molde de ADN bicatenario. La
hebra molde es copiada en la direccin 35
(antiparalela a la nueva cadena de ARN) al igual
que en al replicacin. Cada nucletido en el ARN
recin formado es seleccionado segn las
interacciones de apareamiento de bases de Watson
y Crick; en este caso los residuos de uridilato se
insertan en el ARN para aparearse con residuos
adenilato del ADN molde. La geometra de los
pares de bases tambin puede jugar un papel en la
seleccin de las bases, tal y como hemos visto en
la replicacin.
A diferencia de la ADNp, la ARNp no necesita un
cebador para iniciar la sntesis. El grupo 5trifosfato del primer residuo de una cadena de
nueva sntesis no es cortado para liberar PPi, sino
que se mantiene intacto durante toda la
transcripcin.
La ARNp dependiente de ADN de E. coli es una
enzima compleja y de gran tamao formada por 6
subunidades de 5 tipos distintos (2). El
ncleo de la enzima est constituido por 2 y
presenta la actividad cataltica. La subunidad se
une transitoriamente al ncleo y dirige a la enzima
hacia sitios especficos de unin en el ADN
(promotores), participa en la iniciacin de la sntesis
y luego se disocia del resto de la enzima. Estas 6
subunidades contituyen la holoenzima ARNp.
(Figura 3 y Tabla 1)

Tabla 1. Composicin de subunidades de la ARN polimerasa de E. coli

Las ARNp carecen de actividad exonucleasa

35correctora de pruebas. En consecuencia,
durante la transcripcin se produce un error por
cada 104 o 105 ribonucletidos incorporados en
el ARN. Dado que de un solo gen se producen
muchas copias de ARN y que todos los ARN
son finalmente degradados y reemplazados, un
error en una molcula de ARN tiene menos
consecuencias para la clula que un error en la
informacin permanente almacenada en el
ADN.

ETAPAS DE LA TRANSCRIPCIN EN PROCARIOTAS:

INICIACIN, ELONGACIN Y TERMINACIN
1) INICIACIN

La fase de iniciacin comienza en los promotores del molde de ADN. Los promotores
son secuencias de ADN que dirigen a la ARNp hacia secuencias especficas
adyacentes para iniciar la transcripcin.
Cuando se comparan las secuencias de muchos promotores de procariotas se pone
en evidencia un patrn llamativo (Figura 4). Existen dos tramos de secuencias
consensos situados a 10 y 35 pb antes del inicio de la transcripcin.
Estas denominaciones hacen referencia a la hebra codificadora de ADN, aunque la
hebra molde o no codificadora de ADN es la que se transcribe en ARN. Por
convenio, se da el nmero +1 al par de bases en el que comienza la sntesis de
ARN, y +n ser el ltimo par de bases donde acaba la sntesis. Este ltimo par de
bases estar hacia el extremo 3 de la cadena codificadora, por lo que se dice que el
movimiento de la ARNp en esta zona es aguas abajo. La secuencia promotora,
situada hacia el extremo 5 de la cadena codificadora, se dice que est aguas
arriba, y se expresa -1 a n.
Las secuencias promotoras consenso estn a situadas a -10 (caja TATA o de
Pribnow) y -35, ya que se localizan hacia los nucletidos 10 y 35 antes del punto de
iniciacin. Cada una de estas secuencias tiene una longitud de 6 pares de bases. A
partir del anlisis de muchos promotores se han deducido sus secuencias consenso
(promedio), estas son:
-35
-10
+1
5'-TTGACA-------------TATAAT-----Punto de partida para la transcripcin

Figura 4. Tpicos promotores de E. coli reconocidos por el holoenzima de la ARN

polimerasa que contiene 70. Se muestran las secuencias de la hebra no molde que son
ledas en la direccin 3' 5', como se acostumbra en representaciones de este tipo. Las
secuencias varan de un promotor a otro, pero la comparacin de muchos promotores pone
de manifiesto similitudes, particularmente en las regiones -10 y -35. La secuencia
consenso de los promotores reconocidos por 70 es la segunda por arriba. Las regiones
espaciadoras contienen un nmero variable de nucletidos (N). Slo se muestra el primer
nucletido que codifica el transcrito de ARN (en la posicin +1).

INICIACIN
Los promotores difieren ampliamente en su eficacia. Los genes con
promotores muy activos se transcriben con mucha frecuencia, tan a
menudo como cada 2 segundos en E. coli, en tanto que los genes con
promotores poco activos pueden transcribirse una vez cada 10 minutos
o ms. Las secuencias -10 y -35 de los promotores activos tienen
secuencias muy similares a las secuencias consenso, en tanto que los
promotores poco activos suelen presentar mltiples sustituciones en
estas secuencias. En efecto, la mutacin de slo una base tanto en la
secuencia -10 como en la secuencia -35 puede variar la actividad del
promotor. La separacin entre estas secuencias consenso tambin es
importante: la distancia ptima es de 17 nucletidos. Por tanto, la
eficiencia o actividad de una secuencia promotora sirve para regular la
transcripcin. Las protenas reguladoras que se unen a secuencias
especficas prximas a los promotores y que interaccionan con la ARN
polimerasa ejercen tambin una marcada influencia sobre la frecuencia
de transcripcin de muchos genes.
El ncleo 2 de la ARNp es incapaz de iniciar la transcripcin en las
secuencias promotoras. Ms bien, el holoenzima completo 2 es
indispensable para la iniciacin en el punto de partida correcto. La
subunidad contribuye concretamente a la iniciacin de dos maneras.
1) Disminuye la afinidad de la ARN polimerasa por las regiones
generales del ADN. En su ausencia, el ncleo del enzima se une al
ADN fuerte e indiscriminadamente. 2) La subunidad permite a la ARN
polimerasa el reconocimiento de las secuencias promotoras. Se ha
encontrado que un amplio fragmento de la subunidad presenta en su
superficie una hlice ; sta hlice se ha asociado con el
reconocimiento de la secuencia de la regin -10 (Figura 6). El
holoenzima se une a la doble hlice del ADN y se desplaza a lo largo de
ella en busca del promotor, haciendo una bsqueda unidimensional
utilizando el ADN como si fuesen los rales de un tren. La bsqueda es
rpida ya que la ARN polimerasa se desliza a lo largo del ADN en vez
de asociarse y disociarse. La subunidad se libera cuando la cadena
naciente de ARN tiene una longitud de 9 10 nucletidos. Tras esta
liberacin, la subunidad puede colaborar en la iniciacin con otro
ncleo enzimtico. (Figura 7)

INICIACIN
Aunque la ARN polimerasa puede localizar las secuencias promotoras cuando est
unida a la doble hlice de ADN, antes de comenzar la sntesis se debe desenrollar
un segmento de la hlice. Se debe desaparear una regin de la doble cadena de
ADN de tal modo que los nucletidos de una de sus cadenas sean accesibles para
emparejarse con los ribonuclesidos trifosfato entrantes. La cadena de del ADN
molde selecciona al ribonuclesido trifosfato correcto mediante la formacin de pares
de bases Watson-Crick, al igual que en la sntesis del ADN.
Qu longitud de la cadena de ADN molde desenrolla la ARNp? Cada molcula de
ARNp unida desenrolla un segmento de ADN formado por 17 pares de bases. La
transicin desde el complejo promotor cerrado (en el cual el ADN est como doble
hlice) al complejo promotor abierto (en el cual un segmento de ADN est
desenrollado) es un suceso esencial de la transcripcin. En este momento todo est
preparado para la formacin del primer enlace fosfodister de la nueva cadena de
ARN.
A diferencia con la sntesis del ADN, la sntesis del ARN puede comenzar de novo,
sin ser necesario un cebador. La mayora de las cadenas nuevamente sintetizadas
portan en un extremo 5una etiqueta muy diferenciadora: la primera base en ese
extremo es pppG o pppA. La presencia de un residuo trifosfato sugiere que la
sntesis del ARN comienza por el extremo 5. Al igual que en la sntesis del ADN, la
cadena de ARN crece en sentido 5 3.

ELONGACIN
La fase de elongacin en la sntesis del ARN comienza nada ms
formarse el primer enlace fosfodister. Un cambio importante es la
prdida de ; recurdese que el ncleo enzimtico sin se une con
mayor fuerza al molde de ADN. En efecto, la polimerasa permanece
unida a su molde hasta que se alcanza una seal de terminacin. La
regin que contiene la ARN polimerasa, ADN y la cadena creciente de
ARN se denomina burbuja de transcripcin. La cadena de ARN en
crecimiento forma una hlice hbrida con la hebra molde de ADN. Esta
hlice ARN-ADN tiene una longitud aproximada de 8 pares de bases, lo
cual se corresponde, aproximadamente, con una vuelta de la doble
hlice. En esta hlice hbrida el grupo 3'-OH del ARN est posicionado de
tal modo que pueda atacar al tomo de fsforo de un ribonuclesido
trifosfato entrante. Al igual que en la fase de iniciacin, durante la fase de
elongacin se desenrollan aproximadamente 17 pares de bases del ADN.
La burbuja de transcripcin recorre unos 170 (17 nm) en un segundo,
lo que equivale a una velocidad de elongacin de aproximadamente 50
nucletidos por segundo. Aunque rpida, es mucho menor que la
velocidad de sntesis de ADN (800 nucletidos por segundo). (Figura 8)

ELONGACIN
Las longitudes del hbrido ARN-ADN y de la regin desenrollada del
ADN permanecen bastante constantes mientras la ARN polimerasa
se desplaza a lo largo del molde de ADN. Este hecho indica que la
velocidad de enrollado del ADN en la parte posterior de la ARNp es
aproximadamente igual a la velocidad de desenrollado en su parte
frontal. El hbrido ARN-ADN debe rotar tambin cada vez que se
aade un nucletido de tal modo que el extremo 3'-OH del ARN
permanezca en el centro cataltico. La longitud del hbrido ARNADN est determinada por una estructura de la propia enzima que
fuerza la separacin del hbrido ARN-ADN, lo que permite a la
cadena de ARN separarse de la enzima y a la cadena de ADN
reunirse con su complementaria. La continua apertura por delante y
cierre por detrs, de la burbuja de replicacin, genera
superenrollamientos positivos por delante y negativos por detrs
que tienen que ser disipados por la accin de topoisomerasas.

TERMINACIN
Al igual que su iniciacin, la finalizacin de la transcripcin viene controlada de un modo
preciso. En la fase de terminacin de la transcripcin, cesa la formacin del enlace
fosfodister, el hbrido ARN-ADN se disocia, la regin de ADN fundido se enrolla y la ARNp
se desprende del ADN. Qu es lo que determina dnde debe finalizar la transcripcin? Las
secuencias transcritas de los moldes de ADN contienen seales de parada. La ms sencilla
es una secuencia palindrmica rica en GC, seguida de una secuencia rica en AT. El ARN
transcrito de esta secuencia palindrmica es autocomplementario. Por tanto, sus pares de
bases pueden formar una estructura en horquilla con un vstago y un bucle, estructura
favorecida por su alto contenido en residuos G y C. Los pares de bases G-C son ms
estables que los pares de bases A-T ya que tienen un puente de hidrgeno extra en cada
par de bases. Esta horquilla estable es seguida por una secuencia de cuatro o ms residuos
de uracilo, los cuales son tambin cruciales para la terminacin. La transcripcin del ARN
finaliza en ellos o justo detrs (Figura 9)
Cmo finaliza la transcripcin en esta estructura combinada horquilla-oligo(U)? Primero,
parece que la ARNp se detiene inmediatamente despus de sintetizar la secuencia de ARN
que se pliega en horquilla. An ms, la hlice hbrida ARN-ADN que se forma tras la
horquilla es inestable ya que sus pares de bases rU-dA son las ms dbiles de los cuatro
tipos existentes. Por tanto, la parada en la transcripcin causada por la horquilla permite al
ARN en crecimiento dbilmente enlazado disociarse del ADN y luego de la enzima. La hebra
sencilla de ADN se reasocia a su complementaria para regenerar la doble hlice de ADN y
se cierra la burbuja de transcripcin.
La ARNp no siempre precisa ayuda para finalizar la transcripcin en una horquilla seguida
de varios residuos U. En otros casos necesita la colaboracin de un factor adicional para
terminar, la protena ro (). Esta protena es un hexmero que se une especficamente a una
hebra sencilla de ARN en un tramo de 72 nucletidos, de tal forma que el ARN pasa a travs
del centro de la estructura. La protena se activa mediante secuencias ricas en citosina y
pobres en guanina situadas en el ARN en crecimiento. La actividad ATPasa de le permite
tirar del ARN naciente mientras que sigue a la ARNp. Cuando alcanza a la ARNp en la
burbuja de transcripcin, corta la hlice hbrida ARN-ADN actuando como una ARN-ADN
helicasa. (Figura 10)W3